方法論記事

末梢神経切片のトルイジンブルー染色:末梢神経構造の可視化のための有髄神経線維染色技術

2025年7月8日

この記事について

要約

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出典:Ghnenis, A. B. et al., 末梢神経形態の評価のための樹脂包埋切片のトルイジンブルー染色.J. Vis. Exp.(2018年)

このビデオでは、トルイジンブルーを使用して、四酸化オスミウム処理ラット末梢神経切片をレジン包埋する染色技術を示しています。染色された神経切片は、末梢神経の微細な構造を視覚化するのに役立ちます。

プロトコル

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動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. トルイジンブルー染色

  1. ホウ酸ナトリウム2gを脱イオン水100mLに溶解してトルイジンブルーの1%溶液を調製し、次いでトルイジンブルー1gを加えて溶解するまで撹拌する。濾紙(細孔径:11μm)で溶液を濾過し、不透明なボトルに入れて室温で最大2週間保管してください。
  2. プラスチック製のピペットまたはマイクロピペットを使用して、神経部分の上部にトルイジンブルー溶液を一滴加え、20〜30秒間放置します。
  3. スライドを脱イオン水ジャーにそっと浸して、余分なトルイジンブルー溶液をすべて洗い流し、切片が透明になるまで3〜4回繰り返します。スライドを60°Cで少なくとも15分間、または室温で一晩乾燥させた後、通常の封入剤を使用して切片をカバースリップで覆います。取り付けられたスライドはすぐに調べるか、室温で保管してください。
  4. 光学顕微鏡で調べます。100倍油浸レンズは、g比の計算に使用される詳細な画像に推奨されます。

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開示事項

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利益相反は宣言されていません。

材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
トルイジンブルーOシグマ・アルドリッチT3260
四ホウ酸ナトリウム十水和物アクロスオーガニックス205950010
顕微鏡カバーガラスフィッシャーサイエンティフィック12545102
VWRマイクロスライド、スーパーフロストプラスVWRの48311-703
100ワットオーブンミリポア 6350115
Whatmanフィルターペーパーシグマ・アルドリッチWHA10010155
オリンパスの蛍光顕微鏡デュアルCCDカラーおよびモノクロカメラ、DP80
3mLプラスチックピペットシグマ・アルドリッチZ331740

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