組織切片のCresyl Violet染色:凍結マウス胚切片の軟骨と骨を視覚化するための染色手順

要約

出典:Wu, Meng, et al., Laser Capture Microdissection of Mouse Embryonic Cartilage and Bone for Gene Expression Analysis. J. Vis. Exp.(2019年)

このビデオでは、凍結マウス胚の冠状切片の骨と軟骨を可視化するクレシルバイオレット染色の手順を説明しています。この染色技術は、周囲の組織から異なる色の骨や軟骨を区別するのに役立ちます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. レーザー捕獲マイクロダイセクションのためのサンプル調製

1. 染色と脱水のための溶液を準備します。
   1. 氷上の3本の50 mL遠心分離チューブのそれぞれに45 mLの80%エタノールを入れます。#1、#2、#3 のラベルを付けます。エタノールをRNase / DNaseフリー水で希釈します。
   2. 氷上の50mLの遠心分離チューブに45mLの95%エタノールを入れます。
   3. 氷上の50mLの遠心分離チューブに45mLの100%エタノールを入れます。
   キシ
   4. レン45mLを50mLの遠心チューブに室温で入れます
      注意: キシレンはドラフトで使用する必要があります。
2. PENメンブレンスライドを手袋をはめた手に当てて短時間解凍し、45mLの80%エタノール(#1および#2)で各30秒間2回洗浄し、50mLの遠心分離チューブで攪拌してOCT.
   注:染色中に緩んだOCTが切片を覆い隠すのを防ぐために、染色前にOCTを除去することが重要です。鉗子は、攪拌によって洗い流されないOCTの除去を容易にするために使用できます。
3. アルミホイルのシートの上にスライドを置きます。0.8 mLの0.1%クレシルバイオレットを50%エタノールでスライド上にピペットで移し、30秒間染色します。スライドを45 mLの80%エタノール(#3)で30秒間洗浄し、次いで50 mLの遠心チューブに45 mLの95%エタノール、100%エタノール、キシレンをそれぞれ30秒間通過させて脱水します。
4. スタンドは繊細なタスクワイパーで5分間スライドし、キシレンと乾燥した部分を排出します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
遠心分離管	サーモフィッシャーサイエンティフィック	339653	円錐形滅菌ポリプロピレン遠心チューブ、50 mL
クレシルバイオレットアセテート	シグマ・アルドリッチ	C5042
繊細なタスクワイパー	サーモフィッシャーサイエンティフィック	06-666
蒸留水	インビトゲン	10977-015	DNase/RNaseフリー
エタノール、絶対(200プルーフ)	サーモフィッシャーサイエンティフィック	BP2818	分子生物学グレード
ガラスPENメンブレンスライド	ライカマイクロシステムズ	11505158
OCTコンパウンド	電子顕微鏡科学	102094から106
RNase除染剤	シグマ・アルドリッチ	R2020	表面洗浄用のRNase除染剤
キシレン	シグマ・アルドリッチ	214736