ラット脳組織切片のTTC染色:虚血再灌流障害後の組織切片中の生存組織と壊死組織を区別するための染色手順

要約

出典: Liepinsh, E., et al. Rodent Heart and Brain Tissue Preparation for Digital Macro Photography after Ischemia-reperperfusion. J. Vis. Exp. (2022)

このビデオでは、ラットの脳組織切片を視覚化し、中大脳動脈閉塞および再灌流後の生存組織と損傷組織を区別するための2,3,5-トリフェニル-2H-テトラゾリウムクロリド染色手順について説明しています。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 脳の染色とスライス

1. 中大脳動脈閉塞実験後、頭蓋骨から脳幹を含む脳を取り出し、氷冷PBSで洗浄します。
2. 動物の体重に応じて、脳のステンレス鋼マトリックス(材料の表を参照)の正しいサイズを選択します(図1B)。腹側を上にして脳を脳マトリックスに置きます。
   手記：マトリックスに座っているとき、脳の腹面は金型の上面と平行でなければなりません。
3. ブレードを使用して、脳の前頭部と尾側部分(両側から2枚のブレード)を制限します.
   手記： スライシングマトリックス対応のカミソリの刃を使用する必要があります。一般に、互換性のあるシングルエッジのカミソリの刃(厚さ最大0.01インチ(0.254 mm))をラットの脳のスライスに使用できます。
4. ブレードを部分的に(脳を完全に切断しないで)最初のブレードと最後のブレードの間のチャネルに入れます。すべてのブレードを平行に挿入して配置したら、すべてのブレードを手のひらで同時に押し下げて、脳を2mmの冠状にスライスします。
5. 2本の指で側面に沿ってブレードをしっかりとつかみ、スライスした脳と一緒にマトリックスから取り出します。
6. 脳のスライスを1つずつトレイ(70mL、72 x 72 mm)に並べます。スライスを配置するときは、各スライスの前面が常に上を向いていることを確認してください。
7. PBS中の温かい(+37°C)1%TTC溶液を脳スライスに注ぎ、暗闇で37°Cで8分間インキュベートします><。 手記：インキュベーション中に脳スライスをTTC溶液に完全に浸す必要があります。
8. 1% TTC溶液でインキュベートした後、ブレインスライスを青色のプラスチックトレイに移して画像をキャプチャします。脳スライスを前頭部から尾側部分に順番に並べ、メスを使用して矢状面の半球を分離します。

結果

図1:ラットの心臓と脳のスライスのためのマトリックス(A)ラットの心臓、(B)ラットの脳。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
2,3,5-トリフェニルテトラゾリウムクロリド(TTC)	シグマ・アルドリッチ	298-96-4
大人のラットブレインスライサーマトリックス	ジビックインストゥルメンツ	BSRAS001-1
シングルエッジカミソリブレード	ジビックインストゥルメンツ	BLADE012.1
ソニーαα6000ミラーレスデジタルカメラ	ソニー	ILCE6000	最新のデジタルカメラで再パレス可能
外科用ブレード	ハインツ・ヘレンツ、ハンブルク、ドイツ	BS2982
計量トレイ、70 mL	サーステッド	71,99,23,212
サーモシェーカー	バイオサン	PST-60HL-4
歯付き組織鉗子	アグントス	11021-12
塩化ナトリウム	フィッシャーバイオ試薬	BP358-10
カバーガラス鉗子、角度付き	ファインサイエンスツール	11073から10