パパニコロウ染色:卵管細胞の細胞学的特徴を可視化する技術

要約

出典:Chen, H. et al.卵巣がんの早期発見のための有望なツールとしての卵管の卵管細胞診。J. Vis. Exp.(2017年)。

このビデオでは、卵管細胞学を研究するためのパパニコロウ染色の修正プロトコルを示しています。この手法は、悪性および非悪性の卵管上皮細胞の細胞学的特徴を視覚化するために使用できます。

プロトコル

1. 修正パパニコロウ染色プロトコール

1. 表1.
   に示すように、自動化された非婦人科染色手順を実行して、組織に付着したスライドを染色します。 注:染色法は、非婦人科標本に日常的に使用しているパパニコロウ染色技術の修正を表しています。一部のスライドを染色するために、自動ティッシュプロセッサーを使用しています。この研究では、婦人科染色手順よりも非婦人科染色手順を選択しました。使用されるエオシンは、婦人科検体(パップスメア標本)に使用されるEA-50ではなく、EA-65です。また、主に扁平上皮細胞染色のための婦人科染色法のOG-6は、この研究では扁平上皮細胞が見られないと予想されるため、染色手順には含まれていません。EA65(Eosin Azure)は、Eosin Y、Fast green FCF、Bismarck brown Yの3種類の色素で構成された対比染色液です。この手順を表 1 に示します。
2. 以下の手順に従って、手動のクイックパップステン染色手順を実行します。
   1. 組織を塗ったスライドを95%エタノールに10回浸し、各浸漬には約1秒かかります。
   2. スライドをH₂Oに10回浸し、各ディップに約1秒かかります。
   3. スライドをヘマトキシリンで10〜60秒間出現させます。
   4. スライドをH₂Oに10回浸し、各ディップに約1秒かかります。
   5. スライドを95%エタノールに10回浸し、各浸漬には約1秒かかります。
   6. EA65でスライドを1〜3分間浮かび上がらせます。
   7. スライドをH₂Oに10回浸し、各ディップに約1秒かかります。
   8. スライドを95%エタノールに10回浸し、各浸漬には約1秒かかります。
   9. スライドが透明になるまで、スライドをキシレンに浸します。
      注:これは修正されたパパニコロウ染色手順です。この方法は、現場での細針吸引やSTAT検体など、時間やスペースが限られている場合の、より迅速な染色方法として使用されます。この手順では、自動化されたNon-Gyn染色手順と同等の品質の染色が可能です。この手順を表 2 に示します。

表1:非婦人科染色の手順。

95%エタノール	5分間
H2O(ヘリウム2O)	10秒
ヘマトキシリン	15秒 - 3分
蒸留H2O	5分間
95%エタノール	30秒
EA65	2 - 5 分
95%エタノール	30秒
95%エタノール	30秒
100%エタノール	30秒
100%エタノール	30秒
キシレン	30秒
キシレン	5分間

表2:手動のクイックパップステイン手順。

95%エタノール	10ディップ
H2O(ヘリウム2O)	10ディップ
ヘマトキシリン	10秒-1分
蒸留H2O	10ディップ
95%エタノール	10ディップ
EA65	1 - 3 分
95%エタノール	10ディップ
100%エタノール	10ディップ
キシレン	透明になるまで浸します

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
パパニコロウステイン、EA 65	シグマ・アルドリッチ	HT40432
95%エタノール	シグマ・アルドリッチ	652261
100%エタノール	シグマ・アルドリッチ	493538
キシレン	シグマ・アルドリッチ	214736
ヘマトキシリン	シグマ・アルドリッチ	H9627-J