ダブル染色法:ルテニウムレッドとラクトフェノールコットンブルーを用いた植物と真菌の相互作用を可視化する技術

要約

出典:Marques, J. P. R., and Nuevo, L. G. Double-Staining Method to Detect Pectin in Plant-Fungus Interaction. J. Vis. Exp. (2022年)。

このビデオでは、ルテニウムレッドとラクトフェノールコットンブルーを使用して、コーヒーさび植物の植物と菌類の相互作用中のペクチンとキチンを視覚化する二重染色法を示しています。この手順は、真菌感染症における植物の防御メカニズムを理解するのに役立ちます。

プロトコル

1. 二重染色プロセス

1. コーヒーの錆に感染したコーヒーアラビカcv.Catuaíの極薄の樹脂埋め込み葉部分から始めます。切片をラクトフェノール溶液(水に溶かした40%グリセロール、20%フェノール、および20%乳酸)に溶かした5%コットンブルーで切片を覆い、ホットプレート上で45°Cで5分間加熱します(図1A)。
2. 蒸留水で満たされたビーカーでスライドを3回洗浄して、余分な染料を取り除きます(図1B-D)。
3. 2 mLの0.01%ルテニウムレッドを水に1分間染色します(図1E)。
4. 蒸留水で満たされたビーカーでスライドを3回洗浄することにより、余分な染料を取り除きます(図1F、G)。
5. 切片に蒸留水を一滴垂らし、24 mm x 60 mmのカバーガラスで切片を覆って光学顕微鏡分析を行います。

結果

図1:二重染色プロトコルの個々のステップの詳細 (A) 切片をコットンブルーラクトフェノールの滴で覆い、スライドをホットプレート上で45°Cに加熱します。 (B-C) 蒸留水で洗浄して余分な色素を取り除きます。(D)洗浄後のスライドガラスの切片(矢印で示しています)。(E)セクションをルテニウムレッドの滴で覆います。(F-G)蒸留水で洗って余分な染料を取り除きます。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
ホットプレート	デュベッサー	SSCD25X30-110V	染色
コットンブルーラクトフェノール	メタキミカ	70ソルシグ024629	染色
顕微鏡	ツァイス	#490040-0030-000	画像キャプチャ
プラスチック成形カップトレイ	EMSの	10176-30	染色
ルテニウムレッド	LABハウス	#006004	染色
ソフトウェア Axion Vision	ツァイス	#410130-0909-000	画像キャプチャ