Picrosirius赤偏光染色:明視野顕微鏡を用いた心臓組織切片の線維症検出技術

要約

出典:Ku, H. C. et al., ラットにおける腹部大動脈の収縮による心臓リモデリングのモデル。

このビデオでは、線維組織切片における過剰なコラーゲン沈着を検出するための線維性組織のピクロシリウス赤色染色について説明しています。この染色技術は、結合組織疾患におけるコラーゲン発現の評価に役立ちます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 組織線維症の定量化

1. パラホルムアルデヒド固定した心臓組織を組織切片装置に置き、厚さ2mmの切片を切断します。組織切片を埋め込みカセットに入れます。一連の段階的なアルコール浴(50%、75%、95%、および100%をそれぞれ1時間)で組織を脱水します。
2. 組織にキシレンで1時間浸潤し、最後にワックスで1時間浸潤し、浸潤した組織を包埋カセットに入れ、パラフィンワックスで埋め込む。パラフィンブロックに包埋した組織を室温でミクロトーミングするまで保存します。
3. 埋め込まれた組織を厚さ4 μmの切片にスライスします。セクションを45°Cのウォーターバスに入れます。スライドガラスを斜めにウォーターバスに浸し、パラフィンセクションの端に徐々に近づいて、スライドに部分的に取り付けられるようにします。
4. スライドをバスに出し入れして、ティッシュセクションの下にある潜在的なエアポケットを取り外し、取り付けを容易にします。スライドを37°Cで1時間乾燥させ、組織学的染色のために室温で保存します。
5. スライドをタンクに入れます。スライドをキシレンで30分間脱パラフィンし、順次希釈したアルコール(95%、75%、50%、各3分間)で再水和し、最後に蒸留水で再水和します。適切なピクロシリウスレッド溶液を使用して、組織切片を1時間完全に覆います。.スライドを0.5%酢酸溶液ですすぎ、2回交換した後、無水アルコールで2回すすぎます。
6. スライドを風乾し、カバースリップで合成樹脂に取り付けます。可視光線フィールドでスライドを撮影します.
   手記：写真の赤い部分は、顕微鏡で200倍の倍率でピクロシリウスの赤いポジティブゾーンを示しています。線維化の程度を示す全面積に対するピクロシリウスの赤い陽性ゾーンの割合を計算します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
パラホルムアルデヒド	シグマ・アルドリッチ	441244
Picrosiriusの赤い解決	アブカム	ab150681
イメージクォント	分子動力学