出典:Pradhan Mitra, P. et al., Histochemical Staining of Arabidopsis thaliana Secondary Cell Wall Elements. J. Vis. Exp. (2014).
このビデオでは、特殊な植物細胞に存在するシリンギルリグニンを染色するためのマウレ染色技術について説明します。この染色技術は、木部および束間繊維のリグニン分布を特徴付けるのに役立ちます。
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方法論記事
リグニンのモール染色:シロイヌナズナの茎切片におけるリグニン分布を特徴付ける技術
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2025年7月8日
この記事について
要約
プロトコル
1. モール染色
- 0.2 gの過マンガン酸カリウムを40 mlの蒸留水に溶解して、0.5%過マンガン酸カリウム溶液を調製します。暗い色のボトルに入れて室温で最大7日間保管してください。
- 1 mLの濃縮HCl(37 N)を9 mLの蒸留水(1:10)に加えて、3.7%HCl溶液を調製します。実験当日に新鮮な3.7%HCl溶液を調製します。使用している37 N HClストック溶液が古すぎないことを確認してください。濃縮水酸化アンモニウム溶液(14.8 M)は、飽和溶液のモル濃度が低下するのを防ぐために、4°Cで保存する必要があります。
- ステム切片を2.0 mLの微量遠心チューブに移します。切片を含むチューブに0.5%過マンガン酸カリウム溶液1mlを加えます。
- 0.5%過マンガン酸カリウム溶液を、できれば切片を乱さずに、穏やかに上下にピペットで動かします。2分間インキュベートし、ピペッティングを繰り返します。すべてのセクションが落ち着くまで微量遠心チューブを放置します.
手記：切片が損傷する可能性があるため、切片をピペットチップにピペットで入れないように注意してください。溶液が暗いとステム部分が見えにくい場合がありますので、チューブを試験管ラックにセクションを置いたまま、2分間落ち着かせます。 - 1 mLのピペットを使用して、0.5%過マンガン酸カリウム溶液700 μlを引き出します。蒸留水700μlを加えて、過マンガン酸カリウム溶液を洗い流します。3〜4回、または水溶液が透明になるまで繰り返します。
- 水を捨てます。深い茶色が切片から排出されるまで、1 mLの3%HClをすばやく加えます。これは3〜5分以内に発生する場合もあれば、それぞれ5分の洗浄が2回必要になる場合があります。すべての3%HCl溶液をピペットで取り出し、すぐに次のステップに進みます。
- 1mlの濃水酸化アンモニウム溶液を加えます。1mlのピペットは、切片を傷つけずに簡単にピペットで取り出せるように先端をカットしたものを使用してください。切片をチップにそっとピペットで入れ、顕微鏡スライドに取り付けます。セクションをカバースリップで覆います。明視野照明下のセクションを観察します。(図1)
注意：水酸化アンモニウムは非常に腐食性が高いため、顕微鏡やレンズのステージに腐食を引き起こさないように特別な注意と注意が必要です.
手記：水酸化アンモニウムの煙はカバーガラスを曇らせ、サンプルの観察を困難にする可能性があります。したがって、カバースリップを追加する前には特に注意してください。溶液は5〜10分で乾燥するため、その時間内にイメージングを完了する必要があります。
- 0.5%過マンガン酸カリウム溶液を、できれば切片を乱さずに、穏やかに上下にピペットで動かします。2分間インキュベートし、ピペッティングを繰り返します。すべてのセクションが落ち着くまで微量遠心チューブを放置します.
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結果
図 1.A. thalianaの茎断面のMäule染色。野生型A. thalianaの茎切片のモーレ染色(赤色)は、束間繊維および木部細胞(A-E)の壁における正常なリグニン沈着を示しています。表皮と皮質(Ep)、束間線維(Fi)、髄(Pi)、および木部(Xy)の位置が示されています。倍率:パネルA:5倍。パネルB:10X;パネルC:20X;パネルDおよびE:40倍。バー = 100 μm。
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開示事項
利益相反は宣言されていません。
材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| アガロース | EMDの | MERC2125 | CAS番号:9012-36-6 |
| 塩酸 | EMDの | HX0603-75 | CAS番号:7647-01-0 |
| ビブラトーム | ライカ | ライカ バイブレーションブレード ミクロトーム VT1000S | http://www.leicabiosystems.com/ 製品/切片/振動ブレード-ミクロトーム/詳細/製品情報/ライカ-VT1000-S/ |
| 剃刀 | アメリカの安全かみそり会社 | アイテム # 60-0139-0000 | ステンレスダブルエッジブレード(ペルソナスーパー) |
| スクリューキャップマイクロ遠心チューブ(2 ml) | VWRの | 16466-044 | |
| 微量遠心チューブ(0.6 ml) | アクシゲン・サイエンティフィック | MCT-060-Cの | |
| ティッシュ接着剤 | テッド・ペラ・インク | 10033 | 4°Cまたは20°Cで3か月以上保存 |
| メカニカルシャッターのないCCDチップ付きカメラ | 浜松 | C4742-95 | |
| カメラソフトウェア | 分子デバイス | MetaMorph バージョン 7.7.0.0 | |
| アナリシスの想像 | アドービ | フォトショップCS4 | |
| マイクロカバーグラス スクエア No.1 | VWRの | 48366-067 | 22 x 22 mm (7/8 x 7/8")-カバーガラスは耐腐食性があります |
| つや消しマイクロスライド、1 mm | VWRの | 〒48312-003 | 75 x 25 mm - 1 mm |
| 水酸化アンモニウム | EMDの | AX1303-6 | CAS番号:1336-21-6 |
| 過マンガン酸カリウム | シグマ | 223468 | CAS番号 7722-64-7 |
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