コンゴレッド染色:植物の茎切片におけるセルロース沈着物を可視化する技術

要約

出典: Pradhan Mitra, P., Loqué, D. シロイヌナズナ二次細胞壁要素の組織化学的染色. J. Vis. Exp.(2014年)。

このビデオでは、シロイヌナズナの茎切片にセルロース沈着物を可視化するコンゴレッド染色法を実演しています。

プロトコル

1. コンゴの赤の汚れ

1. 0.5 gのコンゴレッドを100 mlの蒸留水に溶かして、0.5%コンゴレッド溶液を調製します。
2. ステム切片を2.0 mLの微量遠心チューブに移します。0.5%コンゴレッド溶液1mlをチューブに加えます。0.5%コンゴレッド溶液をセクションを乱さずに上下に静かにピペットで動かします
   注意: セクションをピペットチップにピペットで挿入しないように注意してください。
3. 室温で10分間インキュベートし、ピペッティングを繰り返します。その後、室温でさらに3分間インキュベートします。
4. 1 mLのピペットを使用して、0.5%コンゴレッド溶液700 μlを引き出します。蒸留水700μlを加えて、コンゴレッド溶液を洗い流します。洗浄液が透明になるまで、3〜4回洗浄を繰り返します。
5. 1mlのピペットは、切片を傷つけずに簡単にピペットで取り出せるように先端をカットして使用してください。切片を先端と顕微鏡スライドにそっとピペットで入れ、カバースリップで覆います。560/40.
   のバンドパスのフィルターを使用して、青色光励起下で顕微鏡スライド上のサンプルを観察します 注:顕微鏡分析の前に切片を長時間水に保管しないでください、水は10〜30分でコンゴレッドを洗い流します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
コンゴレッド	シグマ	C6277	二ナトリウム 3,3'-[[1,1'-ビフェニル]-4,4'-ジイルビス(アゾ)]ビス(4-アミノナフタレン 1-スルホン酸) [CAS番号573-58-0]
微量遠心チューブ(0.6 ml)	アクシゲン・サイエンティフィック	MCT-060-Cの
メカニカルシャッターのないCCDチップ付きカメラ	浜松	C4742-95
ハイスピードカラーカメラ	Qイマージング	MicroPublisher 5.0 RTV
カメラソフトウェア	分子デバイス	MetaMorph バージョン 7.7.0.0
アナリシスの想像	アドービ	フォトショップCS4
マイクロカバーグラス スクエア No.1	VWRの	48366-067	22 x 22 mm (7/8 x 7/8")-カバーガラスは耐腐食性があり、均一に厚く平らです。No.1の厚さは0.13〜0.17mmです。
つや消しマイクロスライド、1 mm	VWRの	〒48312-003	75 x 25 mm - 1 mm
TX2フィルターキューブ	ライカ	11513851/11513885	バンドパス560/40のコンゴ赤解析に使用されるフィルター。