Three-Chambered Array-Based Impedance Assay:電気インピーダンスを測定することにより、がん細胞の浸潤性を評価するリアルタイム解析技術

Abstract

出典:Sharif, G. M. et al., Real-Time Detection and Capture of Invasive Cell Subpopulations from Co-Cultures. J. Vis. Exp. (2022).

このビデオでは、電気インピーダンスに基づく3チャンバーアレイを使用した侵入アッセイについて説明しています。この技術は、腫瘍微小環境において常在する間質細胞によって分泌される可溶性因子の影響下で、がん細胞の浸潤性を測定する。

Protocol

1. 新しいチャンバー設計(図1)

1. 新しいデュアルチャンバーセルアナライザープレートを開きます。上部チャンバーを電極で脇に置きます。
2. フライス盤を使用して、セルアナライザープレートのU字型のボトムウェルを2mm削り取ります。
3. UVキュレーション接着剤を使用して、孔径0.2μmの2cm×7cmのポリエーテルスルホン(PES)メンブレンを削ったウェルの底に貼り付けます。接着剤が完全に硬化し、不活性であることを確認するために、30分間のキュレーション時間を確保します。
4. フライス盤を使用して、側面に沿って2つの縦方向のスリット(1.5 mm x 5.6 mm)を切り取り、新しく製造された3番目のチャンバーの尾根にはめ込みます。
5. フライス盤を使用して、セルアナライザープレートの全体寸法(72 mm x 18 mm)を再現した3つ目のポリカーボネートチャンバーを作成します(材料表)。
6. 深さ4.8 mm、直径4.75 mmのウェルを作成し、Cell Analyzer Plateの16ウェル設計を再現します。これにより、ウェルあたり90μLの容量が可能になります。
7. 側面に 2 つの三角形の隆起部を作成し、チャンバーがステップ 1.4 で作成した元のスリットにロックされるようにします。三角形の水平部分は1.5mm、垂直部分は1.4mm、斜辺....

Results

図1:アレイチャンバーと変更の画像。

(A) 配列の構築に使用された 3 つのチャンバー。電極を収容する上部チャンバーには変更は加えられていません。(B)中央のチャンバーウェルから、2 mmの高さが削られ、開いた底に膜が取り付けられています。縦スリット(1.5mm×5.6mm)を両側に追加しました。(C)下部チャンバー(72 mm x 18 mm)は、16ウェル設計を再現するために製造されています。ウェルの深さは4.8mm、直径は4.75mmで、三角形の隆起部(水平1.5mm×垂直1.4mm)が側面に沿って追加され、中央のチャンバースリットにカチッとはめ込まれます。

....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.05%トリプシン-EDTA	サーモフィッシャー	〒25300-054
接着剤	Norland光学接着剤	NOA63
ウシ血清アルブミン(BSA)	シグマ	A9418の
セルリフター	ザルシュテット	83.1832
コレラ菌由来のコレラ毒素	サーモフィッシャー	12585-014
CIMプレート	アジレント5665817001		セルアナライザープレート
Clostridium histolyticum由来のコラゲナーゼ	シグマ	C0130
DMEM	サーモフィッシャー	11995年065月
DMEM-F12	サーモフィッシャー	11875-093
ウシ胎児血清(FBS)、熱不活性化	オメガサイエンティフィック	FB-12
ヘープス	サーモフィッシャー	15630106
ウマセラム(HS)	ギブコ	16050-122
ヒトEGF	ペプロテック	AF-100-15
ヒドロコルチゾン	シグマ	H4001-J
インスリントランスフェリンセレンエタノールアミン (ITSX) (100x)	サーモフィッシャー	51500056
インスリン、ヒト組換え体、亜鉛溶液	シグマ	C8052
J2線維芽細胞	幹細胞 (RRID:CVCL_W667)	〒100-0353
リンフォプレップ	ステムセル	7851	単核細胞の単離のための密度勾配培地
マトリゲル	コーニング	354230	基底膜マトリックス
MCFDCIS.com セル(DCIS)	RRID:CVCL_5552
MDA-MB-231 セル	RRID:CVCL_0062
フライス盤			Bridgeport シリーズ 1 バーティカル
リン酸緩衝生理食塩水 (1x)	サーモフィッシャー	10010049
ポリエーテルスルホン(PES)メンブレン	スターリテック	PCTF029030
RBC溶解液	ステムセル	7800
RTCA DPアナライザー	アジレント	3×16	デュアルパーパスセルアナライザー
トリプシン	シグマ	T4799