低分子殺線虫剤スクリーニングアッセイ:Ditylenchus dipsaciに対する潜在的な殺線虫剤をスクリーニングするための中スループット法

Abstract

出典:Cammalleri, S. R., et al. Cultturing and Screening the Plant Parasitic Nematode Ditylenchus dipsaci. J. Vis. Exp. (2022年)。

このビデオでは、線虫に対する低分子殺線虫剤の有効性を特定するためのスクリーニングアッセイを実演します。殺線虫剤は、ばく露後に試料中の移動性線虫の数を減少させる場合に有効であると考えられています。

Protocol

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査

されています

1. in vitro低分子スクリーニング

1. 以下の手順に従ってアッセイプレートを調製します。
   1. オートクレーブ処理した蒸留水を滅菌トラフに注ぎ、マルチチャンネルピペットを使用して、トラフから40 μLの蒸留水を平底96ウェルプレートの各ウェルに分注します。
2. ピン留めツールを準備し、薬品を追加します。
   1. 実験室のベンチのブンゼンバーナー炎の近くにピナートレイ(材料表を参照)を設置します。連続するピナートレイに以下を追加します:25 mLのピン洗浄液、35 mLの50% DMSO(水中)、45 mLの蒸留水、55 mLの70% EtOH、および65 mLの95%EtOH。.各トレイの前にあぶらとり紙を1枚置きます。
   2. ピンを洗浄液に浸し、溶液中でピンを上下に3回(3倍)動かして、ピン留めツールを清掃します。このプロトコルでは、「3x」と「10x」は、溶液内でピナーをそれぞれ3回または10回上下に動かすことと定義されています。あぶらとり紙でピンを拭き取ります。この手順をもう一度繰り返します。
      1. 次に、ピンを蒸留水で3回すすぎ、続いてピ....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
50mLビーカー	パイレックス	CLS100050
96ウェルプレート	ザルシュテット	83.3924
アルミホイル	アルカンプラス
範囲を解剖する	ライカ	ライカMZ75
DMSOの	シグマ・アルドリッチ	472301から500ミリリットル
スライドガラス	マグナ	60〜1200
糸くずの出ないあぶらとり紙	V&Pサイエンティフィック	VPの522-100
ローリテンションピペットチップ(200uL)	LABFORCEの	1159M44
マルチチャンネルピペット	エッペンドルフリサーチプラス	3125000036
NaOH	シグマ・アルドリッチ	S8045-500G
パラフィルム	ビーミス	PM-996
ピンクリーニングソリューション	V&Pサイエンティフィック	VP110Aの
ピナー	V&Pサイエンティフィック	VP381Nの
ピナーリンストレイ	V&Pサイエンティフィック	VPの421
マルチチャンネルピペット用の蓋付き試薬リザーバー	シグマ・アルドリッチ	BR703459
振盪インキュベーター	ニューブランズウィックサイエンティフィック	I26