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方法論記事
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2025年7月8日
出典:Kumar, S. B. et al., Intracellular Glucose Depletion as an Indirect Measure of Glucose Uptake in Cells and Tissues Ex Vivo.J. Vis. Exp.(2022年度)
このビデオでは、採取したマウス臓器の細胞外グルコースアナログ枯渇を測定するex vivo技術を示しています。これは、蛍光標識されたデオキシグルコースを含む溶液でマウス組織をインキュベートし、細胞に取り込まれることを含みます。グルコースアナログの取り込みは、インキュベートされた培地の蛍光を測定することによって間接的に決定できます。
動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。
>注:すべての手順は、ブロワーをオンにし、照明をオフにしたクラスIIバイオセーフティキャビネットで行う必要があります。
1. 材料の準備
>注:すべての材料は材料の表に記載されています。
2. 臓器における細胞外FD-グルコース....
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図1:さまざまな臓器における細胞外FD-グルコース枯渇の動態ex vivo.(A-C)Lepobマウスに、ビヒクル(PBS、n = 4)、インスリン(12 IU/kg BW、n = 3)、およびAAC2(1 nmol/g BW、n = 3)を注射しました。15分後、組織を解剖し、単離した。(A)内臓脂肪、(B)肝臓、および(C)脳の外植片をFD-グルコース(0.29 mM)でインキュベートした。細胞外グルコース枯渇の動態は、さまざまな時点で培地のアリコートで測定されました。データ(平均SD)は、インキュベーション0分での各臓器の蛍光の%として示されています。有意性P<0.05、対応のないt検定。
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| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 96ウェルプレート | 隼 | 353227 | プラスチック製品 |
| B6です。V-Lepob/J雄マウス | ジャクソン研究所 | 品番 000632 | マウス |
| BioTek Synergy H1 モジュール式マルチモード マイクロプレート リーダー (Fisher Scientific、米国) | フィッシャーサイエンティフィック、米国 | フィッシャーサイエンティフィック、米国 | デバイス |
| 細胞インキュベーター | フォーマ | シリーズIIウォータージャケット | デバイス |
| ダイエット(マウス/ラットダイエット、照射) | エンビゴ | テクラッドLM-485 | ダイエット |
| イソフルラン、5% | ヘンリー・シャイン | NDCの11695-6776-2 | 麻酔薬 |
| リン酸緩衝液 | シグマ・アルドリッチ | DA537-500ミリリットル | 細胞培養 |
| ペニシリン/ストレプトマイシン(P / S) | Gibco/サーモフィッシャー | 15140-122 | 細胞培養 |
| グルコースフリーおよびフェノールレッドフリーDMEM | Gibco/サーモフィッシャー | A14430-01 | 細胞培養 |
| 蛍光 2-デオキシ-2-[(7-ニトロ-2,1,3- ベンゾオキサジアゾール-4-イル) アミノ]-Dグルコース) | シグマ | 72987から1MG | 試験 |
| ダルベッコのモディファイドイーグルミディアム | Gibco/サーモフィッシャー | 11965-092 | 細胞培養 |
| ウシ血清 | Gibco/サーモフィッシャー | 161790から060 | 細胞培養 |
| エタノール | シグマ・アルドリッチ | E7023-500mL | 試薬 |
