In VitroでのSMC収縮の測定:電気細胞-基板インピーダンスセンシングを使用して平滑筋細胞の収縮を評価するための非侵襲的方法

要約

出典:Bogunovic, N. et al., Isolation of Primary Patient-specific Aortic Smooth Muscle Cells and Semiquantitative Real-time Contraction Measurements In Vitro. J. Vis. Exp. (2022).

このビデオでは、ECIS(Electrical Cell-Substrate Impedance Sensing)を使用した大動脈平滑筋細胞(SMC)の収縮の測定について説明しています。ECISは細胞の運動を測定し、収縮を測定するための信頼性の高い方法です。

プロトコル

人間の参加者が関与するすべての手順は、人間の福祉に関する機関、国内、および国際的なガイドラインに準拠して実施され、地元の施設審査委員会によって審査

されています

1. 収縮の測定 (SMC の例)

1. 96w10e ECIS アレイを準備します (拡大電極と電極上にシードされたセルを備えたアレイの代表的な画像については、図 1A を参照してください).
   注:滅菌組織培養層流フードの下で次の手順を実行します。
   1. 滅菌済みの96w10eアレイに、ウェルあたり200 μLの10 mM L-システインを室温で30分間コーティングします。
   2. プレートを滅菌水で2回洗います。蓋を少し開けた状態で、プレートを組織培養フードで一晩乾かします。
      注:プレートをL-システインでコーティングする必要があるのは、プレートを初めて使用するときだけです。
   3. 翌日、プレートとフタを30分間UV滅菌し、フタを上に回して内部を滅菌します。プレートが滅菌されたら、フローフードの外側でプレートを開かないでください。
2. ECIS アレイでのセルのシード
   1. 1%滅菌ゼラチン溶液をウォーターバスで30分間予温します
      注:溶液は冷蔵庫に保....

結果

図1:ECISプレートのセットアップと大動脈SMC収縮のグラフィック表現。(A)左;96ウェルECISプレート。中央;ECISプレートの1つのウェルの拡大図で、ウェルの底部にある10個の電極を示しています。右;ECISプレートに播種されたSMCの光学顕微鏡画像。倍率 10x. (B) コントロールSMCをトリプリケートで播種した後にECISによって測定された抵抗曲線。太い青い線は三重の平均を表し、点線は三重の平均を表します。播種後の最初の4〜5時間で、SMCは表面全体に広がり、高抵抗(~1000 Ω)が測定されます。安定したSMC単分子膜が形成されると、抵抗は時間の経過とともに約500 Ωに減少します。略語:ECIS = electric cell-substrate impedance sensing;SMC = 平滑筋細胞;.......

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
96ウェルアレイ	応用生物物理学	96W10IDF ペット	ECIS セットアップで収縮を測定するために使用される配列
Human Vascular Smooth Muscle Cell Basal Medium (旧称 ''Medium 231'')	ギブコ	M231500	平滑筋細胞の培養に使用される培地
ジメチルスルホキシド	シグマ・アルドリッチ	472301	イオノマイシンを希釈するために使用される溶液
インビトゲン伯爵夫人 II	サーモフィッシャーサイエンティフィック	AMQAX1000	自動セルカウンター
Streptomyces conglobatus由来のイオノマイシンカルシウム塩	シグマ・アルドリッチ	I0634-1MG	収縮刺激に使用される化合物
Zテタ	応用生物物理学	Zテタ	収縮測定に使用されるECIS機器

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