方法論記事

Bioreporter Assay:生物発光レポーターシステムを用いたSARS-CoV-2抗体検出のための高感度技術

2025年7月8日

この記事について

要約

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

出典: Rezaei, R. et al., Detection of SARS-CoV-2 Receptor-Binding Domain Antibody using a HiBiT-Based Bioreporter. J. Vis. Exp. (2021)

このビデオでは、SARS-CoV-2中和抗体を検出するためのHiBit-RBDバイオレポーターシステムベースのアッセイを示しています。このシステムは、RBDドメインにHiBiTが融合した生物発光レポーターシステムを使用して、ウイルスのRBDドメインを標的とします。

プロトコル

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. 迅速かつ高感度なアッセイによる抗RBD抗体の検出

  1. HiBiT-RBD抗体検出アッセイ
    1. HiBiT-RBD bioreporter.
      手記： 次のアッセイでは、上清の方が収集が容易で、成熟したグリコシル化バージョンのタンパク質が含まれているため、上清を使用することをお勧めします。さらに、ライセートには、HiBiT-RBD-抗体の相互作用を妨害する可能性のある他のいくつかのタンパク質があります。
    2. 50 μL の HiBiT-RBD 含有上清と 1 μg の市販の SARS-CoV-2-RBD 抗体を 1.5 mL のマイクロチューブに混ぜ合わせます。20 μLの免疫グロブリン結合タンパク質 (プロテイン G) を溶液に加えます。PBS.
      を添加して、総容量を 300 μL に上げます。 手記： 混合物の総量は150μLまで減らすことができますが、総量を減らすとバイオレポーターとの抗体の混合が不十分になる可能性があるため、推奨されません。
    3. チューブシェーカーまたはローテーターでチューブを30分間インキュベートし、12,000 x gで30秒間遠心分離し、上清を捨ててPBSで洗浄します。このプロセスを3回繰り返して、空きHiBiT-RBDを削除します。50 μL の PBS に再懸濁し、96 ウェルプレートに移します。
    4. 1x LgBiTを50 μL加え、5分間待ちます。次に、50 μLの1x NanoLuc基板を添加します。すぐにルミノメーターで発光信号を読み取ります。

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開示事項

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利益相反は宣言されていません。

材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
Bio-Plex ハンドヘルド磁気ウォッシャーバイオ・ラッド171020100デバイス
Dual-GloルシフェラーゼアッセイシステムプロメガE2940100mLキット
LGビT(LgBiT)プロメガN3030アッセイキット
Pierce Protein G 磁気ビーズサーモフィッシャーサイエンティフィック88848試験
SARS-CoV-2 (2019-nCoV) スパイク中和抗体、マウスマブシノバイオロジカル40592-MM57試験
Synergy MX マイクロプレートリーダービオテック96ウェルプレートリーダールミノメーター
の

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タグ

HiBiT RBD RBD G LgBiT

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