胚のアクセシビリティの容易さは、ニワトリウズラのキメラとフォーカル色素のラベリングを含めて、いくつかのアプローチを、使用して細胞の運命をマッピングするための実験を可能にした。この記事では、長い生存時間に対して最適化されている1個の卵の調製方法を示しています。
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この記事について
サマリー
要約
開発の研究が大幅に実験モデルとしてニワトリ胚の使用によって促進されています。胚のアクセシビリティの容易さは、ニワトリウズラのキメラとフォーカル色素のラベリングを含めて、いくつかのアプローチを、使用して細胞の運命をマッピングするための実験を可能にした。さらに、それはタンパク質でコーティングされたビーズとOVOエレクトロで使用してプラスミドDNAの導入の配置などのいくつかの種類の分子摂動、することができます。これらの実験は、中枢および末梢神経系の発達に重要なデータが得られている。これらの研究の多くの場合、それは卵の殻を開いて、胚の成長を乱すことなく、それをrecloseする必要があります。胚は、卵殻を再度開くことにより、連続した発達段階で調べることができます。鶏の卵を開くためのいくつかの優れた方法がありますが、この記事では、長い生存期間のために最適化されている一つの方法を示しています。この方法では、卵はその側にかかっていると、小さなウィンドウがシェルにカットされます。実験手順の後に、シェルはその開発期間中の卵をカバーするために使用されます。卵殻を覆う透明なプラスチックテープは、胚を保護し、潜伏期間の残りの中に水和を保持するのに役立ちます。このメソッドは、インキュベーションの2日間の始まりを使用されており、成熟した胚古くから生存を可能にした。
プロトコル
1。インキュベーターから卵を取り除く
- 37維持° C 60％以上に設定された相対湿度と。
- 卵を取り外し、卵を90 °回転、大きな基盤が水平に横たわるように。
2。綿棒は、卵消毒に
- 70％エタノールで非滅菌ガーゼのスタックを飽和させる。
- 5卵にまで綿棒に2〜3個を使用してください。ガーゼが汚れた場合は破棄する。
3。卵白除去サイトの準備
- ちょうどアルブミンを引き抜くされる領域を保護するためにベースの左側3Mプラスチックテープの1"× 1"の部分をカットして置きます。
4。卵白の除去
- テープの真ん中に小さな穴を作るためにハサミのポイントを使用してください。
- 18ゲージ、1インチの針を10 ccシリンジを使用して、ゆっくりとハサミで作った穴から針をドリル。
- 卵の底に向かって45 ° Cの角度で針を駆動します。
- 中心に向かって針を傾け、卵白の3〜4 mLを策定する。
5。ウィンドウイング
- ビニールテープの3"x 3"の部分をカットし、卵の上に収まるようにそれを伸ばす。あまりにも強く引っ張らないように注意しながら、卵の水平表面の丸い端を角のコーナーを拡張。それはない折り目と卵の表面にしっかりとなるようにテープを引っ張る。
- シャープストレート4"解剖ハサミを使って、テープが配置された領域の下部中央に穴をねじる。ゆっくりの内側に対してヒントを保つようにしている卵にはさみの下刃をガイドシェルは。ベースに向かってブレードを直接ゆっくりとシェルをカットし始めます。ちょうど上部中央に達する前に停止し、反時計回りに進む。はさみを削除するとのほんの少しになるまで反対の方向に進んで繰り返す卵は、接続されたままになります。卵子が受精されることを確かめてください。ウィンドウをシャットダウンします。
6。卵を再度開き、シール、閉会。
- 広いビニールテープ"1 / 2に長い"約2〜3カットし、カットした穴に戻って収まるようにウィンドウをシャットダウンします。テープの別の1 × 1"の部分を取ると卵子が排出された穴を塞ぐ。どんな操作を行うために卵を再開する鉗子のペアを使用してください。あなたがインキュベーターに卵を返すように準備ができたら、一部をカットウィンドウを密封し、卵の全体の水平方向の表面をカバーするために十分な大きさのテープの。
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ディスカッション
このメソッドは、実験操作後の長期生存時間が可能になります。例えば、色素標識研究は、後に運命のマッピングの研究（1）E10またはに生存を許さ。さらに、それは後の発達段階（2-6）に進むために遺伝子の発現レベルと必要な開発の変化を提供するOVOエレクトロポレーション研究のために使用されています。このウィンドウテクニックは、胚への操作後の生存を必要とするすべての手順と組み合わせて使用することができます。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント | |
|---|---|---|---|---|
| 回転インキュベーター | Profi | 温度37°、相対湿度60%以上に維持 | ||
| 70 % EtOH | ||||
| ガーゼ | ||||
| 3Mプラスチックテープ | ||||
| 10ccシリンジ | 卵1個につき1本 | |||
| 18G針 | 1½ インチ針、シリンジ1本につき1本 | |||
| 解剖用はさみ | 4" 直刃、鋭利なもの | |||
| 受精卵 |
参考文献
- Cramer, K. S., Fraser, S. E., Rubel, E. W. Dev Biol. 224, 138-151 (2000).
- Cramer, K. S., Bermingham-McDonogh, O., Krull, C. E., Rubel, E. W. Dev Biol. 269, 26-35 (2004).
- Cramer, K. S., Cerretti, D. P., Siddiqui, S. A. Dev Biol. 295, 76-89 (2006).
- Huffman, K. J., Cramer, K. S. Dev Neurobiol. 67, 1655-1668 (2007).
- Krull, C. E. Dev Dyn. 229, 433-439 (2004).
- Gerlach-Bank, L. M., Cleveland, A. R., Barald, K. F. Dev Dyn. 229, 219-230 (2004).
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