皮膚の炎症を誘発することにより抗原に対する免疫応答を評価する技術

要約

出典:Yao, Y., et al. Intravital Imaging of Neutrophil Priming Using IL-1β Promoter-driven DsRed Reporter Mice. J. Vis. Exp. (2016).

このビデオは、マウスモデルで皮膚の炎症を誘発することにより、試験抗原を評価するin vivo技術を示しています。試験抗原(油/アセトン溶液中のハプテン)をマウスの耳の皮膚に局所的に塗布し、適切な期間が経過した後に皮膚の炎症を評価します。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. pIL1-DsRedマウスにおける皮膚炎症の誘導

1. 100 mg / kgケタミン、10 mg / kgキシラジン、および1 mg / kgアセプロマジンを含む麻酔カクテルの腹腔内(i.p.)注射によりマウスに麻酔をかけます。.適切に麻酔をかけたマウスは、後足からつま先つまみへの離脱を示さない。
2. マウスの両耳の背側表面に脱毛クリームを塗ります。30秒から1分待ちます。水で濡らした綿で耳の表面を拭き、風乾させます。
3. マイクロメーターを使用して耳の厚さを測定し、マウスを別のケージに交換します。麻酔から回復するまで観察します(~15〜30分)。脱毛製品によって引き起こされる皮膚の炎症を解決するには、マウスを3日間休ませてから、さらなる実験を行います。
4. 16.7 mgのOXを1 mLのアセトンに溶解し、750 μlのOX/アセトン溶液を250 μlのオリーブオイルと混合して、1.25%(w / v)オキサゾロン(OX)を調製します。750 μlのアセトンと250 μlのオリーブオイルを混合して、ビヒクル溶液を調製します。
5. 麻酔カクテル(1.1)の腹腔内(i.p.)注射によりマウスを再麻酔します。以前と同様に耳の厚さを測定します。
6. 12.5 μlの1.25% OXを右耳の両側に塗布します。12.5 μlのアセトン/オリーブオイルビヒクル溶液を左耳の両側に塗布します。
7. 他のマウスによる耳への侮辱を防ぐために、完全に回復するまでマウスをケージメイトから分離しておき、その後、マウスを元のケージに入れ替えて動物収容施設に戻します。
   手記：脱毛は、耳の太さの変化に続いて軽度の皮膚の炎症を引き起こす可能性があります。この軽度の炎症は、3日後に正常な耳の厚さで解消されます。24 時間の局所適用後、OX で処理された耳は、ビヒクル溶液のみで治療された耳と比較して有意な (p < 0.01) 腫れを示します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
ケタミン塩酸塩	ホスピーラ	NDC番号 0409-2051-05
キシラジン	ロイド研究所	灘#139-236
アセプロマジン	ベーリンガーインゲルハイム	アナダ 200-361
脱毛クリーム	チャーチ&ドワイト
アセトン	フィッシャーサイエンティフィック	A16P4
オキサゾロン	シグマ・アルドリッチ	E0753

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