パンチ生検によるマウスモデルにおける切除皮膚創傷の生成

要約

出典: Anderson, L. S. et al., A Mouse Model to Assess Innate Immune Response to Staphylococcus aureus Infection. J. Vis. Exp. (2019)

このビデオは、マウスモデルで正確な傷を作るためのパンチ生検手順を示しています。切除は皮膚の皮下層を露出させ、局所的な病原体感染に対する免疫応答を研究するための適切な部位を提供します。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. マウスのソースとハウジング

1. 前述のC57BL/6J遺伝的背景上にリゾチームM-増強緑色蛍光タンパク質(LysM-eGFP)マウスを誘導します。C57BL/6Jの背景でLysM-EGFPマウスとMyD88-/-マウスを交配することにより、LysM-EGFP×骨髄分化一次応答88(MyD88)-/-マウスを導出します。
2. ビバリウムの中のハツカネズミ。これらの研究では、動物を手術前にカリフォルニア大学デービス校でグループに分けて飼育し、手術後に単独で飼育しました。10〜16週齢のマウスを使用してください。

2. 皮膚の切除傷

1. 100 μL の 0.03 mg/mL ブプレノルフィン塩酸塩 (~0.2 mg/kg) を腹腔内注射により各マウスに投与します。
2. 注射後20分で、2〜4匹のマウスを2〜4匹のマウスを、2〜4%イソフルランを含む毎分2〜3リットル(LPM)の酸素が入ったチャンバーに入れます。マウスが完全に麻酔されたら、マウスを一度に1つずつ、2〜3LPM酸素と2〜4%イソフルランに接続されたノーズコーンに移します。マウスが完全に麻酔をかけられていることを確認するには、親指と人差し指で後肢をしっかりとつまみます。動物がピンチに反応しない場合は、次のステップに進みます。
3. 電動バリカンでマウスの背面の1インチ×2インチの部分を剃り、清潔なワイプまたはガーゼを使用して毛皮の切り抜きの領域を取り除きます。脱毛ローションの使用は、過剰な炎症を引き起こす可能性があるため、避けてください。
4. 最初に10%ポビドンヨードに浸したガーゼでマウスの背中を掃除し、次に70%エタノールを浸したガーゼで掃除します。手術領域の中心から外側に向かって、らせん状に領域を清掃します。手術前に手術部位が乾くまで約1分待ちます。
5. マウスの剃った背面を2本の指でゆるく持ち、準備した手術領域の中央で滅菌済みの6mmパンチ生検をしっかりと押します。皮膚をぴんと張らないでください。
   1. パンチ生検をひねって、輪郭の少なくとも1つのセクションで皮膚を完全に切り裂く円形の輪郭を皮膚に作成します。下にある筋膜や組織に切り込まないように注意してください。
   2. 滅菌ハサミと鉗子を使用して、パンチ生検によって刻印された円形パターンに従って表皮と真皮を切断します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
6mm使い捨て生検パンチ	インテグラミルテックス	33から36
ブプレノプリン塩酸塩注射剤	西洋医療用品	7292	0.3 mg/mL
C57BL/6Jマウス	ジャクソン研究所	664
LysM-eGFPマウス	トーマス・グラフ アルバート・アインシュタイン・カレッジ・オブ・ニューヨーク	NAの
MyD88 KOマウス	ジャクソン研究所	9088
不織布スポンジ	AMD-Ritmed株式会社	A2101-CH	5cm×5cm
ポビドンヨウ素10%溶液	アプリケア	697731

名 名 の