末梢血採取と血漿単離のためのマウステールスニップ法

要約

出典: Coats, J. S. et al., Expression of Exogenous Cytokine in Patient-derived Xenografts via Injection with a Cytokine-transduced Stromal Cell Line. J. Vis. Exp.(2017年)

このビデオでは、マウスモデルで末梢血を採取するための尻尾切りの手順を実演します。採取した血液は、その後、遠心分離にかけられ、血漿を分離し、さらなる実験に使用することができます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

>1. マウスにおける外因性ヒトサイトカインの連続採血と血漿モニタリング

1. テールスニップによる採血
   1. バイオセーフティフードを消毒し、マウスの拘束具、はさみ、その他の手順用のツール/消耗品を組み立てます。
   2. マウスを拘束具に置き、マウスの動きを最小限に抑えるためにチューブを固定します。
   3. 尾と手術用ハサミをイソプロピルアルコールで消毒します。尻尾に局所麻酔クリームを塗ります。
   4. 非常に鋭利な手術用ハサミを使用して、マウスの尾の先端の約0.5〜1mmを切り取ります。ヘパリン処理された毛細血管チューブを使用して約80μLの末梢血を採取します
      手記：この方法で血液を6回以上採取する場合は、尾の除去量に対して控えめにする必要があります。スニップが尾を上るにつれて、直径が増し、出血が速くなり、治癒に時間がかかります。

2. プラズマ分離

1. (毛細血管から血液を排出するために)球根注射器を使用して血液を標識されたK₂EDTAマイクロテーナーチューブに移し、凝固を防ぐために20回反転させます
   手記：通常、尾部ニップからの血液凝固は速いです。ただし、出血が~2分以上続く場合は、凝固を助けるためにスタイプティックペンシル/パウダーを使用してください。
2. 製造元の指示に従って採血チューブを遠心分離し、さらなる分析の準備ができるまで血漿を保存(-20°C)します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
カニューレ付き動物埋め込み型ナノトランスポンダー	トロバン	ID-100B(1.25)
EMLAリドカイン麻酔クリーム(動物飼育施設による処方で入手)	パースクリプト	パースクリプト
BD 1/2 cc LO-DOSE U-100 インスリン注射器 28G1/2	BDの	#329461
BDマイクロテーナーチューブ(K2EDTA付き)	BDの	#365974
遠心機	ベックマン・コールター	アレグラ X-15R
FisherBrandキャピラリーチューブ(ヘパリン化)	フィッシャーサイエンティフィック	22-260-950
血球計算盤	漁夫	02-671-6
MACSクアントアナライザ10	ミルテニーバイオテック	〒130-096-343
マウスパイケージ	ブレインツリーサイエンティフィック株式会社	MPC-1
マウステールイルミネーターレストレイン	ブレインツリーサイエンティフィック株式会社	MTIのSTD
ピストルグリップインプランター	トロバン	IM-300(1.25)
「NSGマウス」うなずく。Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ、男性または女性、6〜8週間	JAXマウス	#005557

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