UV照射によるアポトーシスT細胞の生成のためのIn Vitro技術

要約

出典:Hodge, M. X., et al. オゾン曝露後の肺胞マクロファージエフェロサイトーシスの生体内評価。 J. Vis. Exp. (2019).

このビデオは、ヒトTリンパ球白血病細胞株であるJurkat細胞にアポトーシスを誘導する方法を示しています。細胞は紫外線C(UVC)光にさらされ、広範なDNA損傷を引き起こし、アポトーシス細胞死を引き起こします。

プロトコル

1. Jurkat T細胞株の調製(2日目)

>注:すべての手順は、クラスIIの生物学的安全キャビネットで実施する必要があります。

1. Jurkat T細胞を24 mLの基礎細胞培養培地+ 10% FBS + 5%ペニシリン/ストレプトマイシン、37°C+5%CO₂で培養します(材料表)。Jurkat T細胞は、3日ごとに予熱培養培地に1:6-1:8を継代することで維持できる浮遊細胞株です。振らないでください。
2. アポトーシス細胞を調製するには、各フラスコでアポトーシス細胞を90%のコンフルエントまで増殖させます(継代後達成には3〜4日かかります)。この研究では、5つのT75フラスコからの細胞を使用して、このプロトコルで使用される十分な数の細胞を取得します。
   手記：コンフルエントフラスコには、約2,000万〜2,400万個の細胞が含まれています。
3. 各フラスコ(約24 mL)から細胞(フラスコ全体)をピペットで取り出し、血清学的ピペットを使用して細胞を滅菌済みの50 mLコニカルチューブに移します。複数のフラスコには複数の円錐形のチューブを使用します。
4. 50 mLのコニカルチューブから11 μLの細胞分を取り出し、11 μLのトリパン....

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
アネキシンV-FITCキット	トレビゲン	4830-250-K	TACS Annexin V-FITC Kitは、フローサイトメトリーを使用して、個々の細胞のアポトーシスを迅速、特異的、かつ定量的に同定することができます。
BCL2 Jurkat T細胞	ATCCの	ATCC CRL-2899	BCL2 Jurkat細胞株は、ヒトBCL-2 ORFインサートとネオマイシン耐性遺伝子を含むpSFFV-neo哺乳動物発現ベクターをヒトJurkat T細胞にトランスフェクションすることによって得られました。エフェロサイトーシスを測定するモデルに使用されています。
Countess II 自動セルカウンター	サーモフィッシャー	AMQAX1000	これは、懸濁液中の細胞を迅速に評価するための最先端の光学系、フルオートフォーカス、および画像解析ソフトウェアを備えたベンチトップアッセイプラットフォームです。非常に使いやすいです。
Cytospin 4 細胞遠心分離機	サーモフィッシャー	A78300003	あらゆる液体マトリックス、特に気管支肺胞洗浄液などの低細胞液から経済的な薄層製剤を提供します。
ウシ胎児血清、認定済み、熱不活化	サーモフィッシャー	16140071	培養細胞が成長するための栄養素を提供します。細胞培養の標準です。
ペニシリン-ストレプトマイシン	シグマ/アルドリッチ	P0781-100ミリリットル	ペニシリン-ストレプトマイシンは、哺乳動物細胞の培養に最も一般的に使用される抗生物質溶液です。さらに、細胞培養中に無菌状態を維持するために使用されます。
RPMI 1640 ミディアム、GlutaMAX サプリメント	サーモフィッシャー	61870036	RPMI 1640培地(Roswell Park Memorial Institute 1640 Medium)は、もともとヒト白血病細胞を懸濁液および単分子膜として培養するために開発されました。それ以来、RPMI 1640培地は、HeLa、Jurkat、MCF-7、PC12、PBMC、アストロサイト、がん腫など、さまざまな哺乳動物細胞に適していることがわかっています。Jurkat T細胞を迅速かつ効率的に増殖させます。
Stratagene UV Stratalinker 1800 UVクロスリンカー	ケンブリッジ・サイエンティフィック	16659	Stratalinker UV架橋剤は、アポトーシス、DNAまたはRNAをナイロン、ニトロセルロース、またはナイロン強化ニトロセルロース膜に誘導するように設計されています。