アガロースを用いたヒト精密切断肺スライスの調製

要約

出典: Neuhaus, V. et al., Assessment of the Cytotoxic and Immunomodulatory Effects of Substances in Human Precision-cut Lung Slices. J. Vis. Exp. (2018)

このビデオでは、孤立した人間の肺をアガロースで膨らませ、人間の精密に切断された肺スライスを準備する手順について説明します。調製したex vivo肺スライスは、さらなる免疫学的実験に使用できます。

プロトコル

サンプル採取を含むすべての手順は、研究所のIRBガイドラインに従って実行されています。

1. ヒトPCLSの一般的な調製とその後の化学物質への曝露

>注:肺を満たすには2人が必要です。A型肝炎およびB型肝炎の最新の予防接種記録が推奨されます。患者は、肺移植の前にHCVとHIVの定期的なスクリーニングを受けます。結核菌による活動性感染症が診断または疑われる場合は、肺を拒絶する必要があります。.それにもかかわらず、すべての新鮮なヒト肺組織とそれに由来するサンプルは、感染の可能性があるものとして扱う必要があり、スタッフの労働安全を確保するために、対応する保護措置(粒子フィルターマスク(FFP2)、保護メガネ、手袋)を講じる必要があります。手続きには60〜90分かかります。

1. ヒト肺葉の無傷性を確認します.
   手記：胸膜の裂傷は、組織の均質な充填を防ぎます。ヒトの肺物質は、切除日のものでなければなりません。氷上にアガロースを充填する前に、室温(RT)で約2時間の保存期間が許容されます。このプロトコルで使用する組織は、切除を受ける患者から採取されます。亡くなった患者からのものではありません。組織が氷上に保存されている場合は、充填する前にRTに予め温めてください、そうしないと、アガロ....

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
シリコンホース 3.0 x 5.0 mm	A.ハルテンシュタイン(ライプツィヒ、ドイツ)	SS04
注射器	Faust Lab Science(ドイツ・クレットガウ)	9.410 050
コアリングツール	オーダーメイド	オーダーメイド
トリミングブレードハンドル(フェザー)	pfm medical ag (ドイツ・ケルン)	205530001
トリミングブレード(フェザー)	pfm medical ag (ドイツ・ケルン)	205500000
ミクロトーム:ティッシュスライサー	アラバマR&D(ドイツ、バート・ホンブルク)	303400-ADPT	Krumdieckティッシュスライサー(MD6000)
ミクロトームブレード	Wilkinson Sword (ゾーリンゲン、ドイツ)	ENR-4027800011506
組織培養皿	Sigma(ドイツ、ミュンヘン)	Z666246-420EA
接種ループ	Copan Diagnostics(米国、ムリータ)	CD176S01
TPP組織培養プレート 24ウェル	Sigma(ドイツ、ミュンヘン)	Z707791-126EA
カセット	Thermo Scientific(ドイツ、シュヴェルテ)	1000957
Nunc MaxiSorpフラットボトム	Fisher Scientific GmbH (ドイツ、ハノーバー)	〒44-2404-21
Nunc MicroWell 96ウェル	Thermo Scientific(ドイツ、シュヴェルテ)	260836
試薬
アガロース、低ゲル化温度	Sigma(ドイツ、ミュンヘン)	A9414-100Gの
バランス塩混合物および溶液, 細胞培養, クラシック培地および塩, アールバランス塩(EBSS)	Sigma(ドイツ、ミュンヘン)	E2888-500ミリリットル
ペニシリンとストレプトマイシン	ロンザ(ベルギー、ヴェルヴィエ)	17-602E
ダルベッコのモディファイドイーグルの中型栄養素混合物F-12ハム(DMEM F-12)	Gibco (ドイツ、ダルムシュタット)	〒11039-047	培地
CaおよびMgを含むダルベッコリン酸(DPBS)	ロンザ(ベルギー、ヴェルヴィエ)	BE17-513F

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