バクテリオシン産生マウス糞便細菌分離株の抗菌可能性の評価

要約

出典:Bäuerl, C., et al.マウスの腸内細菌叢に対するバクテリオシンの影響を評価する方法。J. Vis. Exp.(2017年)。

このビデオは、マウスの糞便に由来するバクテリオシン産生乳酸菌の検出を示しています。このアッセイは、特定の細菌株に対するバクテリオシンの抗菌活性を決定します。

プロトコル

1. LABのカウントとバクテリオシン活性

1. 1.5 mLチューブ内の各サンプルの糞便ペレット1個を秤量し、氷冷した0.9% NaClを適量加えて10%(w/v)溶液を得ます。1.5 mLチューブ用の滅菌マイクロ乳棒を使用して、糞便懸濁液を均質化し、氷冷した0.9%NaClで10倍段階希釈液を調製します。
2. LABセルの総数をカウントします。
   1. 希釈した細胞(100 μL)を、予熱したMan Rogosa Sharpe(MRS)軟寒天培地(50°C、0.8%寒天培地)4 mLに移します。ボルテックスして混合してから、細胞を固体MRS寒天プレート(1.5%寒天)に注ぎます。
   2. 滅菌フードで蓋を外して5〜10分間プレートを乾燥させた後、細胞を30°Cで20〜24時間インキュベートして細胞増殖とコロニー形成を行います。
3. バクテリオシン産生細胞を数えます。
   1. バクテリオシン産生者の希釈細胞(100 μL)を4 mLの予熱済みMRS軟質寒天培地(50°C、0.8%寒天)に移し、ボルテックスにより混合し、細胞をMRS寒天プレート(1.5%寒天)に注ぎます。この層を第1層と呼びます。
   2. さらに4 mLの無細胞MRS軟質寒天培地(0.8%寒天培地)を第1層に移し、軟寒天培地内のすべての細胞を包埋します
      手記： この層は、寒天プレートの表面で細胞がコロニーとして成長するのを防ぐためのものです。表面で成長している細胞は、上部にインジケーター細胞を注ぐときに簡単に変位するため(ステップ4.3.4)、結果の解釈が複雑になります。このレイヤーは 2 番目のレイヤーと呼ばれます。
   3. 滅菌フード内で蓋を外して5〜10分間プレートを乾燥させた後、細胞増殖とコロニー形成のために30°Cで20〜24時間インキュベートします。
   4. バクテリオシン産生コロニーを同定するには、適切な指示菌株の一晩培養した40 μLと、予熱した軟質寒天4 mLを混合します。混合物をプレートに注ぎます。このレイヤーは 3 番目のレイヤーと呼ばれます。
   5. 滅菌フード内で蓋を外して5〜10分間プレートを乾燥させた後、細胞増殖とコロニー形成のために30°Cで20〜24時間インキュベートします
      手記：バクテリオシン産生コロニーは、コロニーの周囲に明確な(阻害)ゾーンを持っています(図1)。

結果

図1:3層プロトコルによる糞便から回収されたLABでのバクテリオシン産生の検出(手順で説明

)

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
プラスチックシャーレ	サーモサイエンティフィック	101VR20
ブレインハートインフュージョンブロス	コンマ	1400
ヨーロッパ細菌寒天	プロナディサ	1800
アガロース D1 低 EEO	プロナディサ	8010
1x TAEバッファ	サーモサイエンティフィック	15558042
MRSブロス	ディフコ	288130
PBSタブレット	シグマ	P4417-100TAB
規模	メトラー・トレド	PB602-Sシリーズ

名 年 名