インフルエンザA型およびB型ウイルスの定量のための分子ベースのアッセイ

要約

出典:Otto, C. C. et al., Rapid Molecular Detection and Differentiation of Influenza Viruses A and B. J. Vis. Exp. (2017)

このビデオは、インフルエンザウイルスAとBを定量するためのアッセイを示しています。このアッセイでは、インフルエンザ特異的プライマーによるニッキングエンドヌクレアーゼ増幅と、分子ビーコンプローブを用いた標的検出を採用しています。

プロトコル

サンプル採取を含むすべての手順は、研究所のIRBガイドラインに従って実行されています。

1. アッセイを実行する前に

>注:インフルエンザAおよびBアッセイは、鼻咽頭スワブ検体およびウイルス輸送培地に保存された鼻咽頭スワブに対して承認されています。綿棒はキットに含まれており、最適なパフォーマンスを得るために使用する必要があります。ただし、レーヨン、フォーム、植毛綿棒、またはポリエステル鼻腔ぬぐい液を使用して、鼻腔ぬぐい液サンプルを採取することもできます。

1. 鼻腔スワブサンプルを採取するには、スワブを最も目立つ排液がある鼻孔または最も混雑している鼻孔に挿入します。穏やかに回転させて、抵抗が満たされるまで綿棒を鼻孔に押し込み、鼻壁に対して数回回転させてから、ゆっくりと鼻孔からスワブを取り外します。綿棒を保管し、3 mlのウイルス輸送培地(VTM)が入ったバイアルに入れて輸送します
   注:不適切な検体採取は誤った結果をもたらす可能性があるため、適切な検体採取には細心の注意を払う必要があります。
   注:綿棒検体は、収集後できるだけ早くテストする必要があります。ただし、室温で最大2時間保存するか、テストがすぐに利用できない場合は2〜8°Cで最大24時間冷蔵することができます。採取したばかりの試験片は、最適な試験性能を得るのに理想的です。不適切なサンプルの取り扱い、保管、および/または輸送は、誤った結果をもたらす可能性があります。
   注:予防措置として、この検査を実施する個人は、検体を取り扱う際の普遍的な予防措置に従って、すべての検体を感染の可能性があるものとして扱う必要があります。
2. テストする前にすべてのサンプルを室温に戻してください.
   注:すべてのテストコンポーネントは1回限りの使用を目的としており、複数のテストを実行するために使用しないでください。異なるロット番号のキット成分を混在させないでください。有効期限を過ぎたキット試薬は使用しないでください。
3. 青色のサンプルレシーバーを室温に戻してからテストします。オレンジ色のテストベースは、室温まで温めることなくテストできます。
4. すべての試験片は、使用直前までホイル包装に入れたままにしておきます。機器の横にある電源ボタンを押して、機器の電源を入れます。ユーザーIDを入力し、「OK」を押します。

2. テストの実行

1. テストプロセスを開始するには、機器画面の[テストの実行]をタッチします。オンスクリーンキーボードまたはバーコードスキャナーを使用して患者IDを入力し、「OK」を押します。蓋を開けて、OrangeテストベースをOrangeテストベースホルダーに挿入します。
2. 画面に正しいテストが表示されていることを確認し、「OK」を押します。青色のサンプルレシーバーを青色のサンプルレシーバーホルダーに挿入します。
   注:サンプルレシーバーを装置に入れる前に開かないでください。溶出バッファーが正しい動作温度に達するのを防ぎ、テスト性能に影響を与える可能性があるためです。
3. サンプルレシーバーがウォームアップするのを待ちます。機器から促されたら、ホイルシールを取り外し、テストする患者用綿棒をサンプルレシーバーに入れます
   注意: ホイルを取り外すときは、サンプルレシーバーの端に2本の指を置いて、所定の位置に留まるようにします。
4. スワブを液体に10秒間激しく混合し、スワブヘッドをサンプルレシーバーの側面に押し付けて混合し、サンプルをスワブから取り除きます。「OK」を押して続行します。試験用スワブをウイルス輸送培地に保管している場合は、VTMを10秒間ボルテックスした後、サンプルレシーバーに200μlを加えます。
5. 白いトランスファーカートリッジを青いサンプルレシーバーに押し込みます。オレンジ色のインジケーターが上がるまで、サンプルレシーバーを押し続けます。
6. トランスファーカートリッジを持ち上げて、テストベースに接続します。カートリッジの転送が正しく取り付けられると、オレンジ色のインジケーターが下降するのを観察します。蓋を閉じ、「テスト完了」メッセージが画面に表示されるまで開かないでください。

3. 品質管理(QC)

1. ホーム画面の「QCテストの実行」をタッチします。実行するQCテストを選択します。「OK」をタッチし、画面の指示に従ってテストを完了して、テスト対象のQCサンプルと一致するテストタイプを確認します。

4. 結果の解釈

1. テストの実行が完了したら、インフルエンザ A、B、および不明なサブタイプの存在を解釈して、画面に表示されたテストの結果を観察します。無効な結果の場合は、テストを繰り返します。

5. メンテナンスとクリーニング

1. 装置と周囲のベンチエリアを毎日70%エタノールまたは10%漂白剤溶液で清掃します。広告に洗浄液をスプレーしますamp 糸くずの出ない布できれいにします。溶液を機器に直接注がないでください。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
アレーレ・イ・インストゥルメント	アレレ	NAT-000 (グローバル)、NAT-024 (米国)
インフルエンザA&B24テストキット	アレレ	425-000 (グローバル)、425-024 (米国)
バーコードスキャナー	アレレ	EQ001001
Alereユニバーサルプリンター	アレレ	55115 (グローバル)、alereiprinter (米国)
200 μL 精密ピペット
200 μL ディスポーザブルピペットチップ
ウイルス輸送培地	レメル	M4-RT

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