がん細胞に対するナチュラルキラー細胞の細胞毒性を評価するためのin vitroアッセイ

この記事について

要約

このビデオでは、乳酸デヒドロゲナーゼ放出アッセイを実施して、標的がん細胞に対するナチュラルキラー(NK)細胞の細胞毒性を決定する方法を示します。このアッセイは、形成された赤色の生成物の吸光度を測定することにより、がん細胞からの細胞質乳酸デヒドロゲナーゼ酵素の放出を定量化します。

プロトコル

1. Cytotoxicity Assay: アッセイプロトコール

丸底の培養処理された96ウェルプレートを使用して、表1に示されているようにプレートをセットします。この表は、実験コントロールと3セットのNK実験列を示しています。これは、96ウェルプレートで合計10本のNK実験カラムに拡張できます。
アッセイプレートを250 x gで4分間遠心分離し、エフェクターと標的細胞が接触していることを確認します。加湿チャンバーインキュベーターで96ウェルプレートを37°C、5%_CO2で5時間インキュベートし、標的細胞とエフェクター細胞の間の十分な接触、およびエフェクター細胞による標的細胞の溶解を実現します
手記：ここでプロトコルを一時停止できます。
上清を回収する45分前に、10 μLの10倍溶解液をTarget Cell Maximum LDH Releaseウェル(ウェル1E、1F、1G、1H)に加え、プレートを加湿チャンバーに戻します。
インキュベーション時間が完了したら、プレートを250 x gで4分間遠心分離し、マルチチャンネルピペッターを使用して、すべてのウェルから50 μLのアリコートを新鮮な96ウェル平底アッセイプレートに移します。
手記： 細胞が新鮮なアッ....

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前	会社	カタログ番号	コメント
96ウェル組織培養プレート	セルトリート	229190	滅菌済み、丸底
セルスクレーパー	漁夫	8100241
Cytotox 96 非放射性細胞毒性アッセイキット	プロメガ	G1780
RPMI(ルプミ)	ギブコ	11875135	1640ミディアム
YAC-1セル	ATCCの	TIB-160

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