ジカウイルス増殖の強力な阻害剤としてのインターフェロンをスクリーニングするためのIn vitroアッセイ

要約

出典:Contreras, D. et al., ジカウイルス感染性細胞培養システムとインターフェロンのIn Vitro予防効果 J. Vis. Exp. (2016)

このビデオは、ヒトの病原体であるジカウイルスに対する抗ウイルス活性を持つインターフェロンをスクリーニングするためのin vitroアッセイを示しています。宿主細胞内では、ジカウイルスは内在化の際に増殖し、隣接する細胞に感染し、異なるゾーンまたはウイルスプラークを形成します。I型インターフェロンは、抗ウイルス剤として作用し、ウイルスの増殖を妨げ、それによって宿主細胞単層におけるウイルスプラークの形成を防ぎます。

プロトコル

1. ジカウイルス感染に対するサイトカインライブラリーのスクリーニング

1. ナイーブなVero細胞を1ウェルあたり1 x 10⁵細胞で12ウェルプレートを使用して播種します。細胞が付着したら(播種後6時間)、各サイトカインをat
   で追加します 生物学的重複(2 mL容量/ウェル)で示された濃度。車両(PBS)単独制御を含めます。
2. 治療後12時間で、ジカウイルス感染を行います(ウェルあたり400μlで0.1のMOI)。感染のないネガティブコントロールウェルを含めます(模擬)。
3. 感染後4時間で、ウイルス接種物をサイトカイン処理培地(2 ml)と交換します。.細胞を37°Cでさらに44時間インキュベー
トします。
4. 感染後48時間で、位相差顕微鏡を使用してウイルスプラークをカウントし、感染細胞の代表的な画像を40倍倍で取得します(図1)。

結果

図1:インターフェロンは強力な抗ジカウイルス活性を示す。 (A)各種サイトカインによるジカウイルスの増殖調節をビヒクル制御と比較したグラフ。平均値と標準偏差は棒グラフに示されています。インターフェロンは、ジカウイルスの複製を統計的に有意に阻害することを示しました(p値<0.05)。(BおよびC)サイトカイン処理の有無にかかわらず、ジカウイルス感染細胞の位相差画像。感染した細胞によって形成されたウイルスプラークは、病巣として見ることができます。インターフェロン処理ウェルにはウイルスプラークがないことに注意してください。陰性対照としてZIKV感染を伴わない模擬対照。(スケールバー=50μm)。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
ベロ細胞株	ATCCの	CCL-81
ジカウイルス株PRVABC59	疾病管理予防センター(CDC)
IL-6	ペプロテック	200から06
IL-1アルファ	ペプロテック	200-01A
TNF-アルファ	ペプロテック	300-01A
インターフェロンαA	R&Dシステム	11100-1
インターフェロンベータ	ペプロテック	紀元前300-02
インターフェロンガンマ	ペプロテック	300から02
遠心分離機 5415R	エッペンドルフ	5415Rの
遠心分離機 5810R	エッペンドルフ	5810R型
Nikon Eclipse Ti 免疫蛍光顕微鏡 with Nikon Intenselight C-HGFI	ニコン