CD4 + Tリンパ球キャプチャHIVのための使い捨てマイクロ流体チップを用いた

プロトコル

1. 抗CD4 ⁺ biotinlayted表面とマイクロ流体チャネルを準備します。
2. シリンジポンプとマイクロ流体チャネルに5ml /分でサンプルの血液10mlを注入する。
3. PBSで20分間20ml /分で血を洗い流す。
4. 15分間5ul/minで希釈FACS溶解溶液を（PBSで原液から10％に希釈）を注入。
5. 15分間インキュベートする。
6. 20分間5ml /分で一次CD3 ⁺抗体溶液を（PBSで原液から10％に希釈）を注入。
7. 2時間インキュベートします。
8. 15分間を5 ml / minでPBSでチャンネルを洗い流す。
9. 同時に20分間、5ml /分で20％AF488 CD4 ⁺抗体、0.2％DAPI原液、および10％の二次CD3 ⁺抗体を注入する。
10. 20分間インキュベートする。
11. 15分間を5 ml / minでPBSでチャンネルを洗い流す。
12. 蛍光顕微鏡下で細胞を数える。
    1. ホワイト（光） - 黒と白：セルとほこり
    2. UV（DAPI） - 青：セルのみ
    3. ブルー（CD4 ^+） -緑：T -リンパ球と単球
    4. グリーン（CD3 ^+） -赤：T -リンパ球のみ

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
PDMSマイクロチャネル				SU-8モールドにより作製
血液				健康なヒト被験者からの献血。Mass General Hospital（10倍高密度WBC）またはBrigham and Women’s Hospitalより提供。
PBS	緩衝液	Invitrogen	14190	1x Dulbecco’s リン酸緩衝生理食塩水。
FACS溶血液		BD Biosciences	349202	ストック溶液をPBSで10%に希釈。
抗CD4+ビオチン化抗体		Beckman Coulter Inc.	IM0704	抗CD4+ビオチン化抗体を用いて表面処理。0.2mgのストックと1mlの脱イオン水を混合後、ストック溶液をPBS/BSAで10%に希釈。
goat anti-hCD3delta	pAB	Santa Cruz Biotechnology, Inc.	sc-1128	ストック溶液をPBSで10%に希釈
rabbit anti-goat IgG PE		Santa Cruz Biotechnology, Inc.	sc-3755	抗CD3抗体用二次抗体。ストック溶液をPBSで10%に希釈
anti-human CD4+		BD Biosciences	557695	Alexa Fluor 488標識、ストック溶液をPBSで20%に希釈。
DAPI		Invitrogen	D1306	4’,6-dianidino-2-phenylindole dihydrochloride溶液。ストック溶液をPBSで0.2%に希釈。