疱疹状皮膚炎（DH）は、IgAおよび表皮トランスグルタミナーゼ（ETG）の間に自己免疫反応を特徴とする慢性炎症性疾患です。 DHは、グルテン過敏性および/または腹腔患者の非常に小さな部分で開発しています。この研究の結果は、DHもidiopatic皮膚炎の症状とアカゲザルのホストで開発できることを示している。
このコンテンツを表示するには、JoVEへの購読が必要です。 または、無料トライアルをお申し込みください。
この記事について
サマリー
要約
組織トランスグルタミナーゼ2（tTG2は）すでに部分的に消化された食物グルテンなどグリアジンのペプチドをdeamidates腸の消化酵素です。遺伝的素因のある個体では、tTG2は小腸壁1,2にtTG2抗体およびその直接堆積の生産によって特徴づけられる自己免疫応答をトリガします。このような抗体の存在は、セリアック病（CD）の主要な特徴の一つである。表皮トランスグルタミナーゼ（ETG）はまた、CD患者のごく少数の自己抗原として機能することができるトランスグルタミナーゼファミリーの別のメンバーです。これらは比較的まれなケースでは、ETGは臨床的に疱疹状皮膚炎（DH）として知られる自己免疫反応（皮膚の発疹）をトリガします。 CDとDH発症の正確なメカニズムはよく理解されていないが、それが知られているtTG2とCDとDH患者3,4の両方から血清抗体によって認識することができる株式の抗原エピトープをETG。
アカゲザル ）（表1、図1および図2）の皮膚病変からの生検サンプルの共焦点顕微鏡検査は患部組織を研究するために使用されていました。一匹（EM96）でIgAとtTG2抗体（図3）のスペクトルの重複が実証された。ダブルポジティブtTG2 +型IgA +細胞の存在は、真皮乳頭の周りに、深い表皮に集中していた。これは、DHの患者3に記載された病変と一致している。 EM96は、グルテンフリー食事療法、皮膚炎だけでなく、tTG2に置かれたときに+型IgA +預金は消失し（図1-3）はもはや検出されなかった。皮膚炎は、EM96での食事グルテンの再導入（図示せず）に基づいて、しかし、再び現れた。関係のない皮膚炎を持つ動物を含む他のニホンザルでは、tTG2 +型IgA +預金は検出されなかった。その皮膚のtTG2の存在と一緒にEM96の皮膚炎のグルテンフリー食事療法に依存した寛解+型IgA +細胞は、DH -など、自己免疫を示唆しているこの条件の開発のためのメカニズム。これは、任意の非ヒト霊長類におけるDHのような皮膚炎の最初の報告である。
プロトコル
1。皮膚生検標本のコレクション
- 前に皮膚生検の手順に、tiletamine塩酸塩とzolazepam塩酸telazol混合物（フォートダッジアニマルヘルス、フォートドッジ、アイオワ州）の2.5 mg / kgの筋肉内で動物を麻酔。横臥位までは麻酔薬の投与から動物を監視し、それらのエンクロージャから取り外します。
- betadineスクラブとアルコールを交互に準備を無菌的にサイズ40のブレード（オスタープロフェッショナルプロダクツ、マックミンヴィル、テネシー州）でオスターゴールデンA5シングルスピード獣医クリッパーを利用し、興味の皮膚領域から髪を削除します。選択された生検のサイト上に滅菌有窓ドレープを固定します。
- わずかな圧力で時計回りに180度時計回りと反楽器を回転させながら生検パンチが皮下TIに真皮層を介してトランセクトまで、無菌テクニックを使用して、皮膚に対して4.0ミリメートルMiltexパンチ皮膚生検器具（Miltex、ヨーク、ペンシルバニア州）を配置ssue。生検標本を取り出して、鉗子と皮下組織から無償で皮膚のtransected部分を把握する。
- 靭帯パターン3 / 8サークルカット針（Ethilon、エチコン、ジョンソン＆ジョンソンメディカルリミテッド、バークシャー、英国）に接続されている3から0ナイロン縫合糸で皮膚の欠陥を閉じます。すべての動物に術後鎮痛のための筋肉注射では0.01 mg / kgの塩酸ブプレノルフィン（ホスピーラ、レイクフォレ....
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
ディスカッション
グルテン感受性の私達の新しく設立された非ヒト霊長類モデルは、最近の食事グルテン5,6によって引き起こされる腸の透過性の変化を研究するために使用されていました。プラズマtTG2抗体だけでなく、腸のtTG2 +型IgA +堆積物は、いくつかのグルテンに敏感なマカクザルで検出された。我々は最近、アカゲザルコロニーでは通常の（代謝/感染症）病因が確立できなかったニホンザルを、特発性皮膚炎のまれな事件を識別するので、本研究の目的は、評価することである場合tTG2 +型IgA +抗体の鉱床は、これらのまれなケースから皮膚サンプルで検出することができた皮膚炎の（表1）。
1:70と1:200 7の間のCDの範囲を示すものであるtTG2自己抗体の有病率。グルテン過敏性のマカクとの我々の研究では、キャプティブのtTG2抗体の有病率は、アカゲザル、ヒト集団から報告されたものに類似してニホンザルを示している。程度Oに影響を与えると思われる主な環境と遺伝的要因ヒトとニホンザルの両方にfをそのような有病率は、8,9を代役されています。 CD.......
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
開示事項
利害の衝突は宣言されません。
謝辞
著者は彼らの技術支援のためにアマンダタルドで、博士はモスタファBouljihad、ステファニーフィーリー、キャロルコイン、博士エリンRibka、博士はピートディディエとドロシーキュブラーに感謝します。この作品は、NIHの助成金R01 - DK076653とKSに3R01 - DK076653 - 02S1とTNPRC RR000164の基本オペレーティング助成金によってサポートされていました。
....アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 試薬や機器の名前 | 会社 | カタログ番号/製品コード | （注） |
| 抗ヒトIgA - FITC * | シグマ、セントルイス、MO | F - 5259 | 1:100希釈率 |
| 抗ヒトtTG2 | サーモサイエンティフィック、カラマズー、ミシガン | MS - 300 - P1ABX | 1:100希釈率 |
| 抗マウスIgG1 ** | インビトロジェン、カールスバッド、カリフォルニア州 | - 21124 | 1:1000希釈率 |
| ToPro - 3 DNAプローブ*** | インビトロジェン、カールスバッド、カリフォルニア州 | T - 3605 | 1:1000希釈率 |
| ホルマリン亜鉛 （Z -修正） | Anatech（株）、バトルクリーク、ミシガン | 171 | |
| OCT凍結 中 | サクラファインテック、トーレンス、カリフォルニア州 | 4583 | |
| Cytoseal取り付け 中 | リチャード - アラン科学、カラマズー、ミシガン | 8312から4 | |
| アンチクエンチング ソリューション | シグマ、セントルイス、MO | P 3130 | |
| Ethilon （ナイロン縫合糸） | エチコン、ジョンソン＆ジョンソン、バークシャー州、イギリス | 663G | |
| Miltexパンチ皮膚生検器具 | Miltex、ヨーク、ペンシルバニア州 | NA | |
| オスターゴールデンA5サイズ40ブレードとシングルスピードの獣医クリッパー | オスター製品、マックミンヴィル、テネシー州 | 78005-050 | |
| ライカのティッシュプロセッサ | ライカマイクロシステムズ株式会社。、バッファローグローブ、カンザス州 | ASP300 | |
| 回転式ミクロトーム | Micromインターナショナル、 ルドルフ、ドイツ | HM325 | |
| クライオスタット | サーモサイエンティフィック、 カラマズー、ミシガン | HM560 | |
| 共焦点顕微鏡 | ライカ、ウェッツラー、 ドイツの | TCS SP2 |
*フルオレセインイソチオシアネート
tTG2一次抗体の後に使用される**セカンダリ（のAlexa Fluor ® 568 -共役）抗体
**色素
参考文献
- Diosdado, B., Wijmenga, C. Molecular mechanisms of the adaptive, innate and regulatory immune responses in the intestinal mucosa of celiac disease patients. Expert. Rev. Mol. Diagn. 5 (5), 681-700 (2005).
- Schuppan, D., Dennis, M. D., Kelly, C. P.
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
再版と許可
タグ
