経皮的精巣上体精子の吸引とプロセシングの技術

要約

このビデオは、精液に精子が存在しないことを特徴とする無精子症の患者からの精巣上体精子の経皮的吸引を示しています。この手順では、陰嚢領域を消毒し、特殊な培養液を入れた注射器を使用して精巣上体液を吸引し、採取したサンプルを処理して生存可能な精子を分離します。準備された精子は、高度な不妊治療手順で使用する準備が整います。

プロトコル

人間の参加者が関与するすべての手順は、人間の福祉に関する制度的、国内的、および国際的なガイドラインに準拠して実施され、地元の施設審査委員会によって審査されています。

1. 術前準備

1. 手術用品の準備
   1. 手術に必要な消耗品を準備します。これには、手術器具パッケージ1つ、0.7mm針を備えた5mLシリンジ2本(0.7×32 Thin Wall Long Bevel(TWLB))が含まれます。 60 mLの消毒液、滅菌ゴム手袋2組、滅菌接着ドレッシング1枚。
   2. 看護師に、高圧蒸気滅菌を受けた手術器具パッケージに損傷や有効期限がないか調べてもらいます。問題がないことを確認したら、インスツルメントテーブルに置き、外層を開きます。
   3. アンドロジストの場合:滅菌ゴム手袋を着用し、手術器具パッケージの内側の層を開いて、滅菌インジケーターテープが適格であるかどうかを確認し、内部のすべての器具が完全であることを確認します。
   4. 麻酔と手術用に0.7mm針(0.7×32TWLB)を装備した5mLシリンジを2本用意し、リドカイン注射液の入ったアンプルを開封します。
   5. 5mLの滅菌シリンジを使用してリドカイン注射を吸引し、その後シリンジから気泡を取り除きます。.
2. 手術を受ける患者様の準備
   1. 患者様のための皮膚の準備を手配します。使い捨てのカミソリを使用して会陰の恥骨を剃り、会陰と周囲の皮膚を石鹸水で洗って、余分な恥骨や汚れがないことを確認します。
   2. 患者を手術台に載せて結石切開の位置に置き、ズボンを脱ぎ、上着をへその上に固定して、会陰部と下腹部をへその下を完全に露出させます。
   3. 患者の陰嚢を照らすために、シャドウレスランプの角度を調整します。
   4. 楕円形の鉗子を使用して滅菌ガーゼボールをつかみ、それを消毒液に完全に浸して消毒プロセスを開始します。皮膚の消毒は、下腹部、大腿部の前部と内側、会陰部、陰茎、陰嚢の順序で、末梢から陰嚢まで行います。
   5. 最初の消毒後、滅菌ガーゼボールを交換し、消毒プロセスを繰り返します。3回の消毒後、術前の消毒プロセスが完了します。
   6. 消毒が完了したら、滅菌タオルを敷くプロセスを開始します。まず、滅菌済みの四角いタオルを患者の臀部の下に置き、次に滅菌済みの穴の開いたタオルを手術領域とその周辺に広げ、穴の領域の陰嚢を完全に露出させます。
3. G-MOPS-PLUS培養液の調製
   1. 胚培養室の技術者に依頼して、滅菌パスツールピペットを使用してG-MOPS-PLUS培養液約2mLを培養皿に移してもらいます。蓋を適切に閉じ、その後、トランスファーウィンドウを通じて手術室の看護師に蓋を届けます。
   2. インスツルメントテーブルの滅菌タオルの上に培養皿を置き、蓋を開けます。
   3. 別の5 mLシリンジを使用して、約0.2 mLのG-MOPS-PLUS培養液を吸引し、その後、将来の利用のために気泡を除去します。

2.麻酔と手術

1. アンドロロジストの場合:リドカイン注射で満たされた注射器を右手で持ち、左手で患者の精索を固定します。皮下穿刺し、少量のリドカインを注入して膨疹を形成します。その後、皮下穿刺を行い、精索の組織に深く入り込み、血液が戻らないことを確認した後、約0.5mLのリドカインを注入し始めます。精索ブロック麻酔のより良い効果を達成するために、注射針の方向を同じ穿刺点で2〜3回変更し、リドカインを精索に注射する操作を繰り返します。
2. 左手で患者の陰嚢を押さえ、穿刺が必要な精巣上体を固定します。触診により、右手を使用して外科的穿刺が必要な精巣上体の位置を確認します。次に、上記のリドカインを含む注射器を保持し、穿刺部位の皮下に注入して局所浸潤麻酔を実現します。
3. 左手で患者の陰嚢を押さえ、穿刺が必要な精巣上体を固定します。次に、G-MOPS-PLUS培養液(0.2mL)が入った5mLシリンジを右手に持ち、皮膚に対して垂直に穿刺し、精巣上体組織に浸透させます。シリンジ内の陰圧を維持し、精巣上体組織を繰り返し穿刺して、陰圧の影響下で精巣上体液が針を通って入るようにします。
4. 負圧を維持し続け、穿刺針をゆっくりと引き抜きます。抽出した精巣上体液を培養皿に注入します。注入終了後、近くのG-MOPS-PLUS培養液を吸引してシリンジをすすぎ、培養皿に注入される精巣上体液の採取量を最大化します。

3. 手術標本の治療

1. 精巣上体精子の探索観察
   1. G-MOPS-PLUS培養液と精巣上体液が入った培養皿を胚検査技師に移送します。
   2. 胚培養室の技術者が培養皿を引き継ぎ、倒立光学顕微鏡のステージに置き、固定します。顕微鏡の電源スイッチをONにし、光調整ボタンを適切な光量に回します。
   3. 倒立光学顕微鏡のコンバーターを回転させ、10倍の対物レンズを選択し、粗いフォーカススパイラルと細かいフォーカススパイラルを順番に回転させて焦点距離を調整します。焦点を合わせる状況を観察し、顕微鏡下で精巣上体精子を検索します。
   4. 倒立顕微鏡のコンバーターを40倍対物レンズに回転させ続け、ファインフォーカススパイラルを回転させて焦点距離を調整し、精巣上体の精子をフィールドごとに観察します。精巣上体精子の数と質を評価します。正常な精巣上体精子が成熟し、動く能力を獲得したことが分かります。
2. 精巣上体精子の治療
   1. 十分に活動的な精子を観察したら、培養皿内の液体を滅菌パスツールピペットを介して15mLの遠心チューブに移します。
   2. 上記の遠心分離管をバランストレイに置き、滅菌水が入った同じ仕様の遠心分離管を使用して水平にします。
   3. 遠心分離機のドアを開き、遠心分離機のチューブをカードスロットに対称的に配置してから、遠心分離機のドアを閉じます。コントロールパネルで遠心力を500 x gに、遠心分離時間を5分に設定します。コントロールパネルのSTART ボタンを押して、遠心分離プロセスを開始します。
   4. 遠心分離プロセスが完了したら、遠心分離機のドアを開き、精巣上体液が入った遠心分離管を取り外します。蓋を緩め、滅菌パスツールピペットで上清を静かに吸引し、引き出された上清を捨てます。
   5. 滅菌パスツールピペットを使用して、約2 mLのG-IVF-PLUS培養液を遠心チューブに移します。次に、遠心チューブ内の溶液を静かにピペットで動かし、完全に再懸濁します。
   6. バランス調整、遠心分離、および液体の上層の除去のプロセスを繰り返します。
   7. 細胞質内精子注入法(ICSI)のニーズに応じて、滅菌パスツールピペットを用いて約0.5mLのG-IVF-PLUS培養液を遠心管に移し、遠心管の底にある精巣上体精子を優しく吹き飛ばして完全に懸濁させます。
   8. 完全に懸濁した精巣上体精子をICSIプロセスに直接使用します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
遠心分離機	Origio MAXI	G123511110440	最大回転数:4000;最大RCF:2826 x g
遠心分離管	ファルコン	352095	15 mL
コンビネーション試験管スタンド	Shenzhen Zhicheng Long Technology Co., LTD	なし
培養皿	ファルコン	353001	35 mm x 10 mm
消毒液	Shanghai Likang Disinfection high-tech Co., LTD	20230801S	60 mL
G-IVF PLUS	Vitrolife Sweden AB	511574	culture精巣上体液治療用溶液
G-MOPS PLUS	Vitrolife Sweden AB	511712	穿刺手術用培養液
高安全性胚パスツールピペット	ダーウィン	D2208003	230 mm, ファイヤーポリッシュ
インストゥルメントテーブル		DZ202012010
倒立光学顕微鏡	オリンパス		IX71
リドカイン塩酸塩注射剤		H31021072	5 mL : 0.1 g
医療天秤	上海光正医療機器有限公司	201609-4854	JYT-2
医療用サージカルマスク	広州市番禺区浩正健康材料工場	161220328	17.5×9.5 cm(展開)サイズ 17.5×17 cm)
電動操作台	山東明台医療機器有限公司	YZB0089-2011	手術台
自己接着性創傷被覆材	広州雅天生物技術有限公司 LTD	20142140348	6 cm x 7 cm(3 cm x 4 cm)
使い捨て滅菌皮下注射器	山東偉高グループ医療用ポリマー製品有限公司	20230921	5 mL, 0.7mm (0.7 x 32TWLB)
無菌粉末フリーラテックス手術用手袋を装着	Beijing Ruijing Latex Products Co., LTD	2023030322	71/2, 61/2
手術器具パッケージ	中山大学第三附属病院供給部	10228376	オートクレーブ滅菌
手術用ライト	上海吉春医療機器製造有限公司	JSL2009-160D
垂直フロークリーンテーブル	蘇州ワンダ精製技術有限公司 株式会社	DS-CZ-1311006	SH-CJ-2FD-1500