の評価に使用するキー技術カンジダ膣炎が説明されています。メソッドは、腰リンパ節を排出するから膣標本とリンパ球の迅速な収集が可能になります。これらの技術は、女性の下部生殖管の他の疾患のマウスモデルを生じさせることができる。
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この記事について
サマリー
要約
カンジダ種に起因する外陰膣カンジダ症（VVC）は、、彼らの生殖年齢18,32-34中にそれ以外の場合は健康な女性の約75％に影響を与える低く、女性生殖器の真菌感染症です。素因は、抗生物質の使用、妊娠に起因する生殖ホルモンレベルのコントロール不良の糖尿病と障害、経口避妊薬またはホルモン補充療法33,34を含む。年ごとに3つ以上のエピソードのように定義再発VVC（RVVC）は、、ない素因33で女性の8％に独立した5影響を与えます。
VVCの実験的マウスモデルを確立し、病因とカンジダ 3,4,11,16,17,19,21,25,37の粘膜ホストの応答を研究するために使用されています。このモデルはまた、in vivoで 13,24 の潜在的な抗真菌治療法をテストするために採用されている。モデルでは、動物がoptのpseudoestrusの状態に維持されている必要がありますimal カンジダの保菌/感染6,14,23。このような条件下では、接種した動物は数週間から数カ月のための膣真菌負担を検出可能なことになります。過去の研究は、免疫学的及び生理学的性質を3,16,21の相対動物モデルとヒトへの感染の間に極めて高い並列を示す。違いは、しかし、正常な膣内細菌叢とマウスの中性の膣のpHとしてカンジダの欠如などがあります。
ここでは、膣接種、膣標本の迅速な収集、膣真菌負担の評価、及び細胞の抽出/分離のための組織の準備を含むマウス膣炎モデルにおける重要な一連のメソッドを示しています。これは、膣洗浄液、真菌の負担、および流入領域リンパ節の白血球の利回りの構成要素のための代表的な結果が続いている。麻酔剤の使用で、洗浄のサンプルは、の経時的評価のための同じマウスで複数のタイムポイントで収集することができます感染症/植民地化。さらに、このモデルは、定義されたホストの条件の下で免疫学的研究を可能にする、感染を開始するためには免疫抑制剤を必要としません。最後に、モデルとここで紹介した各手法は、潜在的に低い女性の生殖器（ウイルス、寄生虫、細菌）と、それぞれの局所的または全身的な宿主防御の他の感染症を調べるために方法論の使用を生じさせることができる。
プロトコル
1。 カンジダアルビカンスによる膣接種
- 前の接種から3日後、腹部を露出するために動物を抑制しつつ、下腹部の皮下にβ-エストラジオールの0.1から0.5 mgを含むごま油の100μlを注入する。注射部位からの漏れを最小限に抑えるために皮膚に横5〜10ミリメートル程度の針を進める。
下腹部におけるエストロゲンの皮下投与は生殖器に近接のため、このモデルに最適です。有効用量は、マウスの系統、年齢またはエストロゲン誘導体によって異なる場合があります。 CBA - J（H - 2κ）、C3H/HeN（H - 2κ）、C57BL / 6（H - 2 b）に、をBalb / c（H - 2 d）を用いてこれまでの研究では、DBA / 2（H -年齢の6-8週で2 D）、SJL（H - 2 S）マウス、0.1 mg/100μlの膣壁の肥厚により証明される効果的な発見した、膣粘液を減少させ、上皮細胞の脱落が増加した。上記のこの濃度でエストロゲンを投与したマウスはカンジダで一貫性のある膣の植民地化を示す。他の株と年齢のマウスでの接種の場合は、パイロットスタディは、修正された条件下でのエストロゲンの実効性を確保し、必要に応じてエストロ....
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ディスカッション
カンジダ膣炎の実験的マウスモデルが確立され、歴史的に3,4,11,13,16,17,19,21,24抗真菌治療をテストするためだけでなく、 カンジダの粘膜ホストの応答を研究するために過去数十年のために使用されています25,37。プロトコルは、これまでに説明した効率的で手間のかかる方法を取り入れて、 カンジダ膣炎の最も最適化されたモデルシステムの一つであるように見えるここで紹介。これらの技術は、膣標本の真菌負担と収集の迅速な定量を可能にします。さらに、マウス（n = 13）と様々な時点で接種後のいくつかのhaplotypic株をテストする以前の研究では、 カンジダ 2,6,41と膣の植民地化する真菌の負担と宿主応答の変動の類似のレベルを示した。したがって、このモデルは、マウスの系統や感染期間の制限なく、既存のプロトコルに適合させることができます。しかし、一つのことを認識すべき膣真菌負担の変動は同じ接種（図6B）、特定の動物の間で高くなることがあります。ばらつきが膣上皮4.......
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開示事項
利害の衝突は宣言されません。
謝辞
この作品は、R01 AI32556（NIAID、国立衛生研究所）によってサポートされていました。この作品は、評議のルイジアナ州会主催の感染症研究のためのルイジアナ州ワクチンセンターと南部ルイジアナ研究所によって部分的にサポートされていました。
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材料
| 試薬の名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
| 雌のCBA / Jマウス | チャールズリバー研究所 | 01C38 | 生後5-6週間 |
| カンジダアルビカンス （3153A） | 病原真菌のナショナルコレクション、英国 | NCPF3153 | |
| ごま油 | シグマアルドリッチ | S3547 | 使用前にあらかじめ滅菌する必要はありません。 |
| Β-エストラジオール17 -吉草酸 | シグマアルドリッチ | E1631 | ごま油で0.1 - 0.5mg |
| Phytoneペプトン | ベクトンディッキンソン | 211906 | 0.1％グルコースで補足 |
| トリパンブルー溶液 | シグマアルドリッチ | T8154 | |
| サブローデキストロース寒天 | ベクトンディックinson | 211584 | |
| コラゲナーゼIV型 | シグマアルドリッチ | C5138 | 0.25パーセント |
| ディスパーゼ | インビトロジェン | 17105-041 | 1.7 U / mlの |
| ワイヤーメッシュスクリーン | TWP | 060X060S0065W36T | No.60メッシュ、ステンレス |
| ハンクス平衡塩類溶液 | インビトロジェン | 24020-117 | |
| CytoPrep固定液 | フィッシャーサイエンティフィック | 12-570-10 | スミアスライドを保持 |
| パパニコローは、EA - 65染色 | EMDケミカルズ | 7054X - 85 | |
| パパニコローは、OG - 6染色 | EMDケミカルズ | 7052X - 85 | |
| ハリス"ミョウバンヘマトキシリン | EMDケミカルズ | 638A - 85 | |
| イソフルレン | バクスターヘルスケア | NDC 10019-773-60 | イソフルラン気化器、またはドロップシステムで使用される麻酔薬室は閉鎖 |
参考文献
- Abraham, M. C. Inducible immunity to Trichomonas vaginalis in a mouse model of vaginal infection. Infect. Immun. 64, 3571-3571 (1996).
- Black, C. A. Major histocompatibility haplotype does not impact the course of experi....
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