マウスの表在性リンパ節手術

Summary

同じマウス内で時間をかけて免疫応答の進行を追跡するには、リンパ節は、順次手術によって除去することができる。ここでは、この手法を実行する方法について説明します。

Abstract

ワクチン、感染症や腫瘍に対する免疫応答の進行を理解する免疫学の分野では、応答は、しばしば時間をかけて続いています。同様に、リンパ球の恒常性の研究では、時間経過実験をする必要があります。同じマウス内でこれらの研究を実行すると、実験的な変動と同様に使用されるマウスの数を減らすことが理想的です。血液の撤退は時間経過実験のパフォーマンスを可能にする、それが唯一の循環リンパ球に関する情報を提供し、細胞^1-4の限られた数を提供しています。体を循環するリンパ節に存在するリンパ球は異なる特性を持っているので、両方の場所を調べることが重要です。手術によるリンパ節の連続除去が免疫応答や時間をかけて同じマウスの免疫細胞の増殖に従うユニークな機会を提供しています。 PEに十分であるリンパ節あたり1×10 ^6個の細胞の間にさらに、この技術は、収量表現型の特性および/または機能アッセイをrform。シーケンシャルリンパ節の手術やリンパ節郭清が正常に私たちと他の^5月11日によって使用されています。ここでは、上腕動脈と鼠径部リンパ節がanesthetisedマウスの皮膚に小切開を行うことにより除去することができる方法について説明します。手術は表面的な、急速に行われるので、マウスは非常に迅速に回復し、よくヒールや過度の痛みを経験していません。一日おきに、それは時間のコースの実験を可能にする1つまたは2つのリンパ節を採取することが可能です。この手法は、時間をかけてリンパ節に存在するリンパ球の特性を研究するため、適しています。このアプローチは、様々な実験デザインに適しており、我々は多くの研究室は、順次リンパ節の手術を行うことの恩恵を受けるだろうと信じています。

Protocol

1。手術前の準備

マウスは、アニマルケアのガイドラインのカナダ人評議会に従って処理した。

1. ケタミン/キシラジン（150/300 mg / kg投与、ip）を注入するか、またはイソフルランの吸入（2％、1Lの酸素）によるAnesthetiseマウス。可能であればそれは麻酔時間と深さのよりよい制御を可能にするとして、イソフルランを使用する必要があります。また、酸素は動物の生理機能をサポートし、同時に投与される。また、イソフルランは、直接肺によって除去されるため、肝臓または腎臓の代謝を必要としません。
2. または他の鎮痛剤 - ブプレノルフィン（0.1 mg / kg体重、皮下0.05）注入します。
3. （イソフルランが使用されている場合）眼の乾燥を避けるために手術前にマウスの目に軟膏を適用します。
4. マウスは、その足をつまんで、そのしっぽを丸めて眠っていることを確認します。マウスが反応しない場合は、手術を続行します。

2。外科

1. その側にマウスを置きます。
2. あなたがincisioを実行する領域をローカライズするnは、あなたが収穫したいLNによって異なります。 （ 図1）。
3. その領域に、クロルヘキシジン、または他の消毒剤を適用します。

Discussion

我々は、多くの実験系に適用することができLN手術のプロトコルを記述している。免疫応答または免疫細胞の恒常性に従うことが非常に有用ですが、このテクニックはいくつかの制約があります。まず、4つのみLNSを収穫することができます。第二に、研究免疫応答は、全身であるか、浅鼠径または上腕（皮排水）LNSで実行する必要があります。最後に、採取した細胞の数は、LNの除去、絶対細胞数が必要な場合、実験のばらつきに貢献するかもしれない技術的な限界の質に影響されます。 LNのサイズは様々な実験条件にわたって変化しないただし、標的細胞の割合は、独自に、特に関連性の高い正確な情報を提供することができます。テクニックはよくマスターになると幸いなことに、、LNの除去の品質は、それぞれのLNで再現性の高い細胞数を考慮して、改善されます。我々は、これらのいくつかの制限にもかかわらず、LN手術が検討する主要な利点を提供していると信じて免疫応答の進行。まず、時間をかけて免疫応答は、実験のばらつきなどを使用したマウスの数を減らす、与えられたマウスで追跡することができます。第二に、このようなリンパ球恒常性またはLNSで発生した免疫応答の開始などのイベントを直接研究することがで.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
試薬名	会社	カタログ番号	コメント
グレーフェファインパターンプレミアム鉗子	ハーバード装置	52から2144	強く湾曲し、10センチ（4インチ）、0.8 mmの先端
鉗子を適用すると削除ミシェルクリップ	ハーバード装置	52から3779	12.5センチメートル（5）
ミシェル·クリップ100	ハーバード装置	52から3746	7.5〜1.75ミリメートル
Temgesic（ブプレノルフィン塩酸塩）	シェリング·プラウ
Vetalar（塩酸ケタミン）	Bonicheアニマルヘルスケア		DIN：01989529
Rompun（キシラジン）	バイエル		DIN：02169592
イソフルレン	ABBOTT		DIN：02032384
Hypotearsの眼軟膏	ノバルティスOphtalmics		DIN：02133288
Baxedin（イソプロピルアルコールでClorhexidineグルコン酸2パーセント70％）	オメガ	L0000017	DIN：02251477