神経応答の電気生理学的特性は、脳機能を理解するためと経路トレース用染料の配置を導くために重要である。しかし、多くの研究は麻酔下の動物で行われます。麻酔なしで脳機能を理解するために、我々は、ニューロンの応答特性を記録し、覚醒マウスの色素を注入する手法を開発した。
このコンテンツを表示するには、JoVEへの購読が必要です。 または、無料トライアルをお申し込みください。
この記事について
サマリー
要約
これはよく麻酔は脳の様々な領域で神経応答特性を変化させることが知られている13。聴覚系では、しきい値、周波数特異性、阻害側波帯を含む脳幹の神経細胞の基本的な応答特性は、麻酔下に1から2の重要な方法で変更されます。これらの観察結果は、生理学者は、麻酔の汚染影響を与えることなく単一ニューロンから記録する方法を模索するように求められます。つの結果は、脳幹が完全に脳の4レベルで切断しました除脳の準備でした。この製剤の欠点は手ごわい手術、脳からの下降の予測を排除し、中脳、上記の構造を調べるために感覚刺激を使用することができないことがあります。動物が目を覚まし、そして/または、5,6に動作している間に別の戦略は、単一のニューロンとマルチユニットクラスタから記録するために慢性的に電極アレイを移植してきました10月12日にコウモリ7-9に使用されるヘッドレスト技術を適応している。この方法を使用して、我々は無麻酔マウスで数日間電気生理学的記録を行うことができます。レコーディングセッションの終わりに、我々は、電極の位置と記録部位を再構築するかにと記録座からの経路を決定することができるようにトレーサーを注入する色素を注入することができます。このメソッドは使用せずに、複数の麻酔薬日間も隔離された単一ニューロンの記録を可能にします。
プロトコル
1。頭部拘束の概要
- 特注のヘッドポストを組み立てるために、クロスを形成するためにステンレス製のロッド"3/32にドリル穴に垂直にステンレス製のロールピン" 1月16日を挿入します。頭部ポストの垂直部分は約20mmと15 mm程度水平断面部分でなければなりません。 ＃1から72までネジを受け入れるように垂直ロッドの一方の端をタップします。 （ 図1）。
- 手術や録音中に、頭のポストは、＃1から72ネジ（ 図2）特注の真鍮やアルミの取り付けバーに固定されています。取り付けバーの長い作品は約90 mm長、幅5〜10ミリメートルでなければなりません。頭ポストは45度で傾斜している長いバーオフ15 mmの拡張子に溝カットに収まる。取り付けバーの下部にある小さな溝に頭の回転、ヘッドポスト程近い場所にありますの桟を防ぐことができます。
- カスタムメイドのアルミ取り付けブロックに取り付けられた後の取り付けバーK（ 図3）。取り付けブロックは約30ミリメートル×30ミリメートル×25 mmである。頭部ポストの位置を正確に正中線に沿って、ブレグマに配置することができますように、この取付ブロックは、マイクロマニピュレータに取り付けられています。取り付けブロックは、ネジと一緒に取り付けられて2つの部分か....
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
ディスカッション
マウスの電気生理学的および神経解剖学実験のための頭部ポスト拘束システムの利点は、実験は麻酔薬に起因する潜在的な応答の汚染を排除し、無麻酔、覚醒したマウスで行うことができるということです。さらに、セットアップがより効率的な動物の使用を可能にするために複数の日にわたって使用することができます。
ヘッドポストのほとんどのコンポーネントは、既製の用意されています。頭だけポストと取付装置は、カスタムメイドであり、構築するのが比較的簡単で、再利用可能などちらも。機械工場は、施設で利用できない場合は、研究者は、おそらく使用することができますhttp://www.emachineshop.com/必要なコンポーネントを製造する。
熟練した外科的なスキルが必要です。外科医は、最高の顕微鏡の下に行われるいくつかの微細な外科技術を持つ熟練しなければなりません。ザ手術は無菌条件下で行わなければなりません。頭蓋骨のフラップを.......
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
開示事項
我々は、開示することは何もありません。
謝辞
NSFの助成金0920060、NIHの助成金DC004395、NHMRC助成金1009482、科学と医学研究のNSW Office、およびガーネットPasseのとロドニー·ウィリアムズ記念財団によってサポートされています。
....アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 名 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
| 歯科用セメントの前に頭蓋骨を洗浄するためのエッチングゲル | ヘンリーシャイン | 101-5396 | 1.2 mLシリンジと12個 |
| 歯科用セメント用のプライマー | カーオプチボンド | 25881 | 8 mLのボトル |
| 歯科用セメント用接着剤 | カーオプチボンド | 25882 | 8 mLのボトル |
| 歯科用セメント用アプリケータ | カーオプチボンド | 24680 | 200/pk |
| 歯科用セメント | カリスマ、ヘレウスKulzer | 66000085 | 4gmシリンジリフィル |
| タングステンロッド（ グラウンド·ピン ） | AMシステム | 717200 | 0.010 "の直径 |
| 経済UV硬化ライト | ヘンリーシャイン | CU-80 | |
| ヘッドポスト | 社内で構築された | ||
| 取り付けバー | 社内で構築された | ||
| 取り付けブロック | 社内で構築された | ||
| 定位フレーム | デビッド·Kopfは楽器 | 902 | |
| マウスおよび新生仔ラットアダプター | Stoelting | 51625 | |
| 等温パッドをDeltaphase | トリーサイエンティフィック株式会社 | 39DP |
参考文献
- Evans, E. F., Nelson, P. G. The responses of single neurones in the cochlear nucleus of the cat as a function of their location and the anaesthetic state. Exp. Brain Res. 17, 402-427 (1973).
- Joris, P. X.
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
再版と許可
タグ
