方法論記事

Joveの中のこの11月

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DOI:

10.3791/4025

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2011年11月1日

この記事について

要約

Journal of Visualized Experimentsの11月号は、霊長類の把握能力を測定するための一連の行動実験から始まります。フリブール大学の研究者らは、動物を快適に拘束し、頭部を正しく配置するための共通の手順に従った、4つの把持・到達タスクを実演しています。Brinkman Boardテストは静止物体への到達能力を評価するために使用され、Rotating Brinkman Boardは動物が物体の位置を予測する必要がある条件下でのテストとなります。Brinkman Boxテストでは、サルが把持タスクを行う際の自由度が制限され、視覚による動作誘導ができない条件下で器用さを調査できます。Brinkman boardおよびboxテストは実験中に得られたビデオ解析のみに依存しますが、drawer reachingタスク装置は、把持力、荷重、および引き出しの位置を監視する検出器を備えており、把握能力だけでなく筋力の測定にも適しています。これら4つのテストを組み合わせることで、前肢遠位部の運動制御を評価する強力なアプローチとなり、フリブール大学のグループは、病変研究および脊髄損傷の潜在的な治療法を検証することを目的とした実験の両方からのデータを提示しています。

Clinical and Translational Medicineでは、チューリッヒ大学病院の外科学研究部門とチューリッヒ大学の実験動物科学研究所の共同研究者が、自由に動く動物で生理学的測定を行うために使用できる無線テレメトリー装置をマウスに植え込む手法を共同で開発しました。この装置は、生体電位活性(ECG、EEG、またはEMG)および温度を測定できる2本のリード線と、腹腔内に植え込み可能な軽量の無線送信機(帯域幅 1-200 Hz)で構成されています。動物のハンドリングによるストレスや麻酔は、生理学的測定に影響を与える既知の混絡要因であるため、無線テレメトリー装置は、乱されていない自然な状態の動物から生理学的データを取得し、さらに複数の動物を同時に測定するための便利な手段となります。

またJoVEは、キングス・カレッジ・ロンドンのLiu Labによる、発達中の*Xenopus laevis*オタマジャクシの頭顔面間葉系に高分子を導入する方法を加え、エレクトロポレーションプロトコルのラインナップを拡充しました。Xenopusのオタマジャクシをエレクトロポレーションチャンバーに移し、核酸を注入した後、エレクトロポレーションを行うことで、発現ベクターまたはモルフォリノを発達中の頭顔面組織に導入します。分化した軟骨への遺伝子導入は本質的に困難ですが、Liu Labは、エレクトロポレーションを通じて、さまざまな発達段階にあるXenopusオタマジャクシの軟骨前駆組織および軟骨組織にモルフォリノを導入できることを示しています。

Bioengineeringでは、ローレンス・バークレー国立研究所のZuckermanグループが、ペプトイドの合成方法を解説しています。ペプトイドはペプチドに類似した生物活性有機分子の一種ですが、側鎖がα炭素ではなくペプチド結合の窒素に結合しているため、タンパク質分解に耐性があります。Zuckermanグループは、ブロモアセチル化反応と臭化物置換反応によってペプチドモノマーを順次添加するサブモノマー合成を実演し、ペプトイドの鎖長と組成を精密に制御できることを示しています。さらに、合成がアミド樹脂上で行われる、すなわち固相合成であるため、合成されたペプトイドの精製が大幅に簡素化されます。また著者らは、新たに合成されたペプトイドを、ナノシートと呼ばれる高度に秩序化された構造へ自己組織化させることができ、これを蛍光顕微鏡および走査電子顕微鏡で可視化できることを示しています。これらのナノシートは、タンパク質や膜の模倣体の潜在的なプラットフォームとして利用できる可能性があります。

同月後半に、JoVEのImmunology and Infectionセクションでは、臨床抗体サンプルに曝露された細胞における食作用を測定するアッセイを特集します。マサチューセッツ総合病院とダートマス大学の共同研究者は、タイムラプスビデオ顕微鏡を用いて、THP-1細胞が抗体結合抗原でコーティングされたビーズを飲み込む様子を示し、食作用の程度を定量化するためのプレートベースのフローサイトメトリー法を提示します。著者らはこの手法を用いて、抗レトロウイルス療法を受けた、あるいは受けていないHIV患者からのサンプルなど、異なる抗体サンプルの食作用誘導能を決定しています。

この11月のJoVEコンテンツのまとめは、今月のハイライトの概要を提供します。その他の注目すべき論文には、血管内皮細胞における細胞骨格ダイナミクスのライブイメージング法、心筋細胞におけるカルシウムフラックスの測定法、および嗅球における成人出生ニューロンのスライス電気生理学などが含まれます。

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