ガスクロマトグラフィーによるオペラントエタノール自己投与とエタノール判別中エタノールのマイクロダイアリシス

サマリー

オペラントエタノール自己投与時のラットの脳におけるエタノール濃度の経時変化を決定するための方法が記載されている。水素炎イオン化検出器付きガスクロマトグラフィーは、それが生成される小さなボリュームに必要な感度を持っているので、透析液サンプル中のエタノールを定量化するために使用されます。

要約

オペラント自己管理の方法は、一般的にエタノールを含む虐待の多くの薬剤の行動や薬理作用を研究するために使用されています。しかし、エタノールは、一般的に経口投与した自己ではなく、虐待の多くは、他の薬のように静脈内にされています。経口投与された薬物の薬物動態は、静脈内投与される薬よりも複雑です。エタノールの薬理学的および行動への影響の関係を理解することは、エタノールの経時的変化の知識が飲酒中や後に脳に到達する必要があるので、我々は時間をかけて脳透析液のエタノール濃度を監視するために水素炎イオン化検出器のin vivoマイクロダイアリシスとガスクロマトグラフィーに使用します。

組み合わせたマイクロダイアリシス - 行動実験は、いくつかの技術の使用を含む。自己投与と神経の多くをテストするために適合させることができ、この記事では、定位手術、行動訓練とマイクロダイアリシス、rochemical中心仮説は、彼らだけがサンプル採取および透析液エタノール分析の後続フェーズとどのように関係するかを説明するために含まれています。エタノールの研究に固有の炎イオン化検出付きガスクロマトグラフィーによるエタノール濃度分析を透析液、詳細に記載されている。これらのメソッドによって生成されたデータは、自己管理手順の間に脳に到達するエタノールのパターンを明らかにし、同じ透析液サンプルの神経化学的解析と組み合わせた場合、結論はエタノールの薬理と行動への影響についての定めをすることができます。

プロトコル

1。定位手術

1. すべての手順は、実験動物の管理と使用のためのNIHのガイドに従い、施設内動物のケアと使用委員会によって承認された。
2. イソフルランで麻酔し定位固定装置を用いて、よく扱わLong-Evansラット、関心のある脳領域と、上記のテザー（プラスチックワン、ロアノーク、バージニア州）（後microdilaysisプローブ挿入用）、21ゲージのカニューレで注入さボルトは、ヘッドステージ（微小透析機器をサポートするために使用される）に組み込まれています。
3. 手術中と後に慎重にラットを監視します。すべての動物は、外科手術後のケアと回復の少なくとも一週間を受信し、次の手順を開始する前に、健康であることを確認してください。定位手術法のJoveのビデオは入手可能です^。1

2。オペラントトレーニング

1. 手術後の回復の一週間後、動物は10％スクロースsolutio用レバー押すように訓練されるMedAssociatesからn lickometer、リトラクタブルレバー、シッパーチューブ（以前Howardらで説明したように、2009年）を装備メッドアソシエイツオペラントチャンバー（MedAssociates社、バーモント州、米国）インチ²ソフトウェアは、すべてを設計するために使用されているオペラントプログラム（MedAssociates社、バーモント州、米国）。
2. 一度、スクロース応じるエタノールを徐々に複数の飲み会以上溶液に添加されている間の適切なトレーニングスケジュールでラットを開始するために訓練した。
3. たとえば、私たちの研究室では現在、エタノールは10％エタノール/ 10％ショ糖飲料溶液中で最高潮に達するソリューションに色あせている8日間のトレーニングスケジュールが使用されます。対照動物にはわずか10％のスクロースまたはno飲料ソリューションを受け取る。使用するオペラントスケジュールの特定のタイプは大きく異なる場合がありますが、マイクロダイアリシスのサンプリングには、後述する一般的な手順は、引き続き行うことができる^。3

3。プリマイクロダイアリシス手順：テザリング

最後のトレーニングセッション（この例では、これは^第 7 ^回のトレーニングセッションである）の二番目の前の夜は、動物が自分の頭の舞台でテザーボルトにアタッチテザー春、に慣らされています。春は動物がケージ内を自由に移動できるように、リングスタンドとクランプをケージの隣に中断されているマイクロダイアリスイベルとカウンターバランスレバーアームに取り付けます。テザー動物はテザリングセットアップにそれらを慣らすために、不断の食料と水で彼らのホームケージで、オペラント部屋で夜を過ごす。
1. 翌日、ラットは、その行動のタスクを実行中にテザー感に動物を慣らすために、所定の位置にテザーとのオペラントプログラムを完了します。オペラント室の屋根の中央に上記のテザーとスイベルの懸濁液を可能にするために先頭付近にオペラントチャンバーの壁に係留装置をマウントします。このすべてが、音響減衰チャンバー内に配置されます。 AfteRセッション、microdiaysisプローブの挿入を​​待つために、オペラント部屋でそのホームケージにラットを返す。

4。プリマイクロダイアリシス手順：ラットは、その日の行動訓練を完了した後にマイクロダイアリシスプローブは、マイクロダイアリシス実験の前日に挿入されている

1. つながれながら、ネズミがオペラントセッションを完了した後、微小透析実験の前日には、イソフルランでラットを麻酔し、ガイドカニューレからオブチュレータを取り外します。徐々に（約5分かけて）興味のある脳領域に頭蓋ガイドカニューレを介して人工脳脊髄液（ACSF）で灌流マイクロダイアリシスプローブを挿入します。我々は、実験室に構築プローブとDoyonら、2003、ペティットと正義、1991年モデルにしたマイクロダイアリシス·プロシージャを使用する^。3、4
2. 動物上記プローブの入口と出口のラインを一時停止する以前に議論テザリング装置を使用しています。
3. pを回しローブ流量0.2μL/分にダウン。もう一度、ラットは、オペラント部屋で夜を過ごしています。

5。マイクロダイアリシス手順：分離欲求とコンサマトリー相と自己管理セッション中にサンプルのコレクション

1. 実験が始まる少なくとも2時間前に、その作業の流量にプローブを上げてください。私たちは、脳の領域に応じて1.0または2.0のどちらかμL/分を使用しています。プローブ流量が一貫していることを確認し、時間をかけて体積を測定するためにハミルトンシリンジを使用して設定された流量の少なくとも90％である。
2. 透析サンプル（5または7分）の間、およびオペラントセッションの後、前に取得されます。サンプリング間隔は脳領域に依存し、神経伝達物質が分析されて、分析対象物の濃度、および分析に使用する分析化学機器の感度を透析液。行動のフェーズは次のとおりです。
   1. ベースライン：実験の開始時に、動物のホームケージで透析サンプルを収集（4サンプル）。
   2. 転送：ホームケージのベースラインのサンプルを集めた後、オペラントチャンバーにラットを転送します。テザーラットの移転は、マイクロダイアリシス流体移送ラインが絡まりないことを確認するために細心の注意を必要とし、ラットが落ち着いたままであること。あなたが最初の待機サンプルにベースライン/転送のサンプルから変更するとすぐに転送後、オペラントプログラムをアクティブにします。
   3. 待機：ラット室（脳の領域に応じて3から4サンプル）にはみ出させるレバーを待っている間にサンプルを収集し続けます。
   4. 酒：レバーが提示され、押された後、飲料溶液（10％sucrose/10％エタノールまたは10％ショ糖）のボトルが約20分（3-4サンプル）のラットを使用できるようになります。
   5. ポスト飲酒：飲酒期間の後、ボトル引っ込みが、ラットが残って私約20分（3-4サンプル）に対するnオペラントチャンバー。

6。マイクロダイアリシス手順：エタノール分析用マイクロダイアリシスサンプルの調製

1. 、エタノール濃度について評価された後の動物の前に2つのサンプルは、エタノール溶液、およびすべてのサンプルを自己投与する。ピペットのいずれか2 mlのガラスバイアルに興味のあるサンプルからの1または2の10μlアリコート。その後気密隔壁（9ミリメートルレッドポリスクリューキャップ、PTFE / Silのセプタムは、Agilent Technologies）を用いてバイアルを密封します。エタノール分析アリコート（1または2μL）の体積は、総サンプル量、および任意の追加的な分析に必要な試料の量によって異なります。
2. サンプルは後で神経化学分析に使用する場合は、適切にエタノールの定量化のためのアリコートをピペッティングした後にサンプルを保存します。
3. たとえば、私たちのラボは、ドーパミンのサンプルを分析します。これを達成するために、実験中にドライアイス上にサンプルを配置その後、実験後-80℃でサンプルを格納します。我々は、側坐核に配置されたプローブのための2.0μL/分の流量を使用して収集さ5分のサンプルのエタノールの分析のための2μlアリコートを使用しています。これは、電気化学検出高速液体クロマトグラフィーによるドーパミンの後の分析のための残りの少なくとも7μlを可能にします。
4. はるかに低い細胞外ドーパミン濃度を有する前頭前野から採取したサンプルのために、私たちは1.0μL/ minの流量を使って7分のサンプルから取らエタノール分析に1μlのアリコートを使用しています。

7。ポスト·マイクロダイアリシス手続き

1. マイクロダイアリシス実験の終了後、ラットを麻酔し、プローブを取り外す。動物はすぐに安楽死されていない場合、閉塞具を交換してください。実験の3日以内の脳を収集します。それ以外の場合は、プローブ管の可視化が可能でないかもしれません。
2. 脳は、iを削除する必要があります承認された動物の使用プロトコルでのn準拠。私たちは、生理食塩水、生理食塩水でその後ホルマリンで心臓灌流続いペントバルビタールナトリウム（150 mg / kgで、ip）を過剰摂取、使用しています。セクショニングの前に少なくとも12時間ホルマリン食塩水に沈め脳。
3. 歯冠部100μmのスライスに脳。クレシルバイオレットでスライスを染色し、正しいプローブの配置についても検討を行う^。5,6

8。エタノール濃度のサンプルの分析

1. 収集されたサンプルだけでなく、外部基準（0.3125から20 mMのエタノール）は、水素炎イオン化検出システムとのガスクロマトグラフ上で実行されます。このシステムは、水素炎イオン化検出器を備えたバリアンのCP 3800ガスクロマトグラフで構成され、ブルカー（バリアン）8400ヘッドスペースオートサンプラは、°C、およびHP Innowaxキャピラリカラム（30 mxの0.53ミリメートル×1.0μmの膜厚）で50に加熱移動相としてヘリウム。
2. クロマトグラムはchromatogrで記録され、分析されそのような具体的にここで議論されるバリアンスタークロマトグラフィーワークステーションソフトウェアなどaphyソフトウェア。
3. エタノールの分析のためにシステムを準備するには、再循環水浴を用いてオートサンプラの板を加熱、および2つの追加のガスタンク（空気と水素、ヘリウムは常にワックス列を保持するために実行されたままである）を開きます。
4. セプタム、ガスタンクの圧力だけでなく、あなたが繊維とセプタムは、それらが適切な場合（ファイバ-500注射を変更することができるようにするために使用された回数のカウントを維持することができるように実行しようとしているサンプルの数を記録-100穿刺）。
5. サンプル（表2のプログラムのパラメータ）を実行するためのシステムを準備し、起動方法を、開始します。それが "準備完了"であることを報告してシステムを待つ。
6. 20分のいずれかが、それが吸収した汚染脱着する高温に供することにより試料分析のための繊維を準備している "焼く"を開始安静時間。
7. 標準はによって作られていケミカルドラフト内でメスフラスコを用いて、100 mLの最終体積に水での95％エタノールを238μlの希釈。これは、40mMのエタノール溶液を作成します。我々は、20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125 mMの基準を作成するために1:1シリアル希釈を使用しています。標準の各濃度は、透析サンプルから取られる、同じボリュームのアリコートを使用しています。 2 mlのガラスバイアルにアリコートをピペットで、次に気密隔壁でバイアルを密封します。
8. 全体の液体のアリコートが気化されるまで、すべてのエタノールサンプルはオートサンプラで加熱される。私たちは約30分間私達のサンプルを加熱する。
9. このセクションでは、我々はガスクロマトグラフで使用しているスター·ワークステーションのソフトウェアについて説明します。他のソフトウェアを使用することができるが、以下の説明は、適切でないかもしれません。
10. サンプルを実行するには、サンプルがどのオートサンプラスロットになっていると指摘サンプルリストを作成し、サンプルは何回パンクしなければならない。あなたの選択された折りにルーティングするデータファイルへ必ずえー。次に、サンプルのための選択の方法を選択し、実行を開始します。我々は、表2に記載されて実行されているパラメータを使用します。
11. 当社の透析液エタノールプログラムは3分間サンプルを吸収して1分間、ワックスカラムに送り込まヘリウムストリームに脱着する。しかし、プログラムは、特定のニーズに対応するために書き込むことができます。
12. 炭素は、例えば、エタノール、燃焼およびリリースイオンなどの化合物を含有する水素炎イオン化検出器を通過した後ワックスカラムで分離し、試料成分。検出器のアノードからの電圧に変換されます（図1）以下に示すようなクロマトグラムの結果が記録され、現在作成カソードに増加した電子の流れでこの結果。電圧の変化はtime.7渡っ検出器を通過した炭素の量に比例している
13. システムは、サンプルを実行して終了した後は、各ピークの積分をチェックする必要があります。スター·ワークステーションのソフトウェアについては、ツール·バーの青色ピークのアイコンをクリックしてください。各ピークの色をクリックして、ベースラインを調整するには、矢印をドラッグします。ピークの次のグループに移る前に、各ピークを再統合。ピーク解析ソフトウェアは、任意の一般的なクロマトグラフィソフトウェアすることができます。
14. スターWorkstationソフトウェアは、お使いのツール·バーのバッチレポートのアイコンをクリックしてください。サンプルレポートを印刷するには、バッチレポートにあなたの指定したフォルダから、各サンプルをドラッグします。レポーティング·ソフトウェアは最も一般的なクロマトグラフィー·ソフトウェア·システムを使用してカスタマイズできます。
15. レポートは、選択した情報を表示するようにプログラムされることができます。我々は現在、ピーク高さを使用していますが、報告書はまた、ピーク面積を使用するようにプログラムされることができます。
16. システムをシャットダウンするには、シャットダウンの方法（パラメータは表2に記載）を開始、水浴をオフにし、カラムオーブン温度は30℃に達したときに水素と空気タンクを閉じる

9。エタノールデータ

1. ピークの高さなどをプロット既知の各外部標準エタノール濃度の関数（図2A）。各透析試料によって与えられたピーク高さからエタノール濃度を計算するために、これらの点で与えられる線形関数を使用します。
2. 時間をかけて透析液中のエタノール濃度をプロットすることにより、我々の行動のセッション中に興味のある脳領域におけるエタノール濃度のパターンを見ることができます。以下に示す例のデータ（図2B）は、自己管理セッション中に時間を越えて透析液中のエタノール濃度として表されます。

10。一般的なメンテナンス：ファイバが各500パンク、セプタム100人ごとパンクを変更する必要があります

繊維を変更するには

1. ガスクロマトグラフキーパッドの[メニュー]を押し、セレクト8400、enterキーを押し、変更シリンジを選択し、enterキーを押します。オートサンプラは、光ファイバを許可するように、それ自体を配置します（SPMEファイバーアセンブリ、75μmのCarboxen-PDMS、スペルコ分析、BellefoNTE、PA）は削除されます。
2. 繊維を覆うドアを開きます。ロックナットを緩めて、繊維集合体を除去することができるように、ラッチを動かします。繊維集合体を取り出す。緩めて緩め繊維を次にアセンブリ内の繊維を保持し、ナット。
3. 新しいものと古い繊維を交換し、繊維集合体を再構築する。 、オートサンプラのアセンブリーを交換して再ラ​​ッチし、所定の位置にアセンブリをねじ込む。設定が完了したら、キーパッド上の "変更が行われた"キーを押すと、オートサンプラが使用自体準備でしょう。

隔を変更するには

1. まず、緩めセプタムを覆うキャップを（ハイ一時0.450径ジェネリック馴化セプタム、Varian）をしてから、古いセプタムを取り外します。継手にダウンシート新しいセプタムを。キャップを再ねじ込み、レンチで締めます。繊維は隔壁がパンクされた最初の時間を壊すことはありませんように、その後、穿刺セプタムに注射針を使用しています。

11。代表的な結果

図1はエタノール規格の3濃度のエタノールと自己管理セッションの終了時に収集されたラットの透析液サンプルの例として、クロマトグラムを示しています。エタノールのピークは、相対的に対称である一貫した保持時間を有しており、雑音比> 10への信号があります。これらの基準を満たしていない場合は、システムの保守が必要なことを意味します。彼らの自己管理セッションの過程（図2B）のエタノール自己投与動物から採取した透析液サンプルのエタノール濃度を計算するために使用され、品質のクロマトグラフィー、正しく準備された基準は、線形標準曲線（図2A R2≥0.99）を生成。

図1の例のクロマトグラム。エタノール標準または透析液サンプルの1マイクロリットルをガスCにロードされましたバイアルをhromatographと文章で説明しているように分析した。 2.5、5.0および10mMエタノール規格から生成されたピークのA）のオーバーレイ。 B）のピークは、自記式エタノールを持つラットから透析液試料から発生した。

図2：図1に示す実験例からのグラフィカルな結果。 A）は、エタノールの検量線。エタノール自己管理セッションの向こう側に透析液のエタノール濃度のB）の時間経過。

ハードウェア	パラメーター	スタートアップの設定	設定を実行している	一休み設定
8400ブルカー（バリアン）オートサンプラー
	注入モード	SPME	SPME	N / A
	溶剤浸透深さ	0パーセント	20パーセント	N / A
	サンプル侵入深さ	20パーセント	20パーセント	N / A
	吸収時間	0.01分	3分	N / A
	脱着時間	19分	1分	N / A
	クリーンモード溶媒源	私	私	N / A
	クリーンモード吸脱着時間	0.01分	0.01分	N / A
	水浴（オートサンプラを加熱）*	50℃	50℃	オフ
CP-3800バリアンガスクロマトグラフ
インジェクタオーブン	上の	上の	上の
	オーブン温度	250℃	220℃	30℃
カラムオーブン	整定時間	0.10分	0.10分	0.10min
	温度	65℃	65℃	30℃
コラム	移動相流量	8.5ミリリットル/分	8.5ミリリットル/分	N / A
	カラム圧力	〜6プサイ	〜6プサイ	≥0.1 PSI
FID検出器	オーブンの電源	上の	上の	上の
	温度	220℃	220℃	120℃
	エレクトロニクス	上の	上の	オフ
	時定数	ファスト	ファスト	ファスト
	範囲	11	11	11
	オートゼロ	はい	はい	はい

オーブンの電源

水素炎イオン化検出システムパラメータを使用して表2。ガスクロマトグラフ。このテーブルには、準備するために使用される3つのプログラムのパラメータ（起動設定）、実行（設定を実行している）を示していますし、システムを維持し使用していない（安静時の設定）にある間。

ディスカッション

アプリケーションと制限

薬物自己投与は、モデル薬物中毒にげっ歯類で使用されています。この方法でモデル化され、虐待の多くの薬物は、薬物が中心コンパートメントに直接配信されて、静脈内に投与することができる。これは、自己管理セッションを介して投与量の綿密なモニタリングを可能にします。エタノールは経口通常自記式であるので、それは吸収と代謝の個体差に起因する薬物濃度を監視することは非常に困難です。興味のある脳領域からサンプルにマイクロダイアリシスを用いて、我々は唯一の領域に到達するエタノールのパターンをモニタすることはできませんが、我々はまた、同時に各々自己管理フェーズで時間をかけて同じ領域内の神経伝達物質の変化を監視することができます。

脳内の神経化学的な変化と薬物誘発性応答は薬物乱用と依存性に関連付けられている、したがって、同時に測定する能力を具体的な自己管理のフェーズで確認神経化学と薬物濃度は非常に強力でユニークなツールを提供しています。行動と検体の透析液の濃度を相関させるために心に留めておくべき一つの問題は、マイクロダイアリシス配管の物理的な特性である。具体的には、マイクロダイアリシスプローブの内腔からのコレクションチューブに転送する流体にかかる時間は重要であり、短い時間では優れています。私たちの研究室では、時間は約90秒になるようにプローブを構築。これらの条件を用いて、我々は、透析液のエタノール濃度の増加に伴って、ドリンクやポストドリンク期間の経過とともに減少し、エタノールの消費、開始時のaccumbalドーパミンの増加があることを発見した^。2,3,8,9これらの実験は、 、薬理学的研究からのデータと組み合わせたとき、私たちはCHにエタノールと自己管理に伴う環境手がかりの厳密薬理作用を解析することができました神経伝達物質濃度のアンジェス。

これは、結合された行動 - マイクロダイアリシス技術のこの特定のアプリケーションは、我々の研究室の現在の研究対象に適していることに留意すべきである。それは、我々は同期自己管理行動にこれらの措置を関連付けることができるように、同じ領域内の神経伝達物質の変化のパターンと比較して脳に到達するエタノールの時系列パターンを評価するために設計されています。派生した透析液のエタノール濃度は、in vivoでのプローブ回復のために修正され、脳のエタノール組織中濃度のほんの一部ではありませんされています。エタノールの定量的な微小透析が必要な場合は、プローブへの細胞外空間から拡散することをエタノール抽出画分は、実験的に決定されるべきである。メソッドとさらなる議論のために我々の研究室から以前の資料を参照してください^。10,11,12

このプロトコルは、ガスchの使い方を示していますが微小透析試料のヘッドスペースからのエタノールの固相マイクロ抽出と共にromatographyは、マイクロダイアリシスサンプルのエタノール含有量の分析のための他の方法を用いることができる。しかし、代替の方法は、いくつかの欠点に苦しむことがあります。例えば、機密性の低い分析方法は、ここに示されて5月7日分未満のサンプリング倍必要とサンプル量を増やす必要がある場合があります。ここで説明するシステムのタイプは、バイアルのヘッドスペースに配置ファイバへの吸収を可能にすることにより、密封されたサンプル瓶内の気相中のエタノールを濃縮固相マイクロ抽出を使用しています。これは、通常の蒸気の50から100マイクロリットルを注入することができます直接ヘッドスペースサンプリングと比べて検出限界を向上させます。ヘッドスペース法のもう一つの大きな利点は、分析のために注入されたサンプルは非常にきれいで、塩の自由であるということです。液体微小透析試料の直接注入も高いsensitと共に使用されるかもしれませんivityが、これは注入された塩をきれいにするために必要な定期的なメンテナンスのためのダウンタイムより楽器が必要になります。

トラブルシューティングやその他の注意事項

1. あなたの実験を開始する前に、あなたのマイクロダイアリシスのセットアップが正常に機能していることを確認するために、すべての問題をトラブルシュートするために自分の時間の多くを与える。私たちはあなたと一緒に切り替える準備、ACSFで灌流し、セットアップ余分を持っていることを示唆しているほとんどのオペラントセッションが毎日特定の時間に発生する傾向があるので、自分の時間を節約するためにセットアップ誤動作。
2. マイクロダイアリシスプローブはプローブが脳を貫通などの組織の剪断によって生成される組織の損傷を最小限にするために、約5分間かけて挿入されていることを確認してください。
3. オペラントチャンバーにラットを転送する場合は、2番目の人は、搬送ライン（マイクロダイアリシスのセットアップの一部）がもつれになっていないこと、およびオペラントプログラムがinitをすることができるように支援しておくと便利です時間にiated。
4. あなたが適切な温度に達するまでの時間のオートサンプラの水槽をたくさん与えることを確認してください。我々のシステムは、通常は2時間、50℃に到達するために必要また、あなたのサンプルが完全にサンプルを分析する前に気化されることを保証する。我々は一般的に視覚的に、これはサンプル分析を開始する前に発生したことを確認します。
5. 標準の良い分析化学プラクティスに従うべきである。これらには、個人、機器、および手順の検証が、これらに限定されない。要するに、我々は、次のガイドラインを採用しています個々のユーザは、複数日にわたって標準濃度と線形標準曲線（R2≥0.99）の再現性、ピーク高さの値を生成する能力を実証する必要があります。 GC-FIDシステムが正常に動作していることを確認するには、標準的には、すべての透析液サンプルが注入される前に解析することが常にあるべきである。生成された標準曲線はR2≥0.99を持っている必要があります。
6. 我々が使用する機器のほとんど2010年にアジレント·テクノロジーズに買収されたバリアン社を通じて購入した。この時点では、ブルカー·サイエンティフィックインスツルメンツはVarianの実験室ガスクロマトグラフィー機器事業を取得しました。今後の購入については、どちらかの会社に相談してください。
7. 本プロトコルでは、ラットを用いたオペラント行動を示していますが、ビューアは動作をより混乱が小さいマウスモデルで発生する可能性があることに注意する必要があります。注意すべきもう一つの問題は、その内側前頭前野や側坐核以外の脳領域に微小透析プローブの配置がここに示されているよりも大きくオペラント行動に支障をきたす場合がありです。密接にプローブ配置による被害が行動に深刻な変化をもたらすかどうかを判断するために、多数の行動のパラメータを調べることが重要です。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
試薬の名称	会社	カタログ番号
95％エタノール	AAPERアルコールと化学株式会社シェルビーヴィル、ケンタッキー州	E190、111000190
超純ショ	MPバイオメディカル、LLCは、ソロン、オハイオ州	821721
超高純度ヘリウム	空気ガス	HE UHP300
空気	空気ガス	AIZ300
水素	空気ガス	AIZ300
GCの2 mLバイアル	アジレント	＃8010-0015
PTFE /シリコンセプタム付きのGCバイアルキャップ	アジレント	＃8010-0084