顆粒球に依存する自己抗体誘発皮膚水疱形成

Summary

VII型コラーゲンの200アミノ酸（aa 757から967）のストレッチに対してIgG抗体を精製し、我々の現在の仕事で説明する動物モデルで猛烈な表現型だけでなく、人間に特徴的な病理組織および免疫病理学的特徴を再現したマウスに繰り返し注入され後天性表皮水疱症（EBA） ¹。

Abstract

自己免疫現象は、健康な個体で発生しますが、自己寛容が失敗したときに、自己免疫応答が特定の病状になることがあります。によるWitebskyのは、自己免疫疾患などの診断の基準のいずれかを仮定すると、自己抗体の受動的伝達によって、実験動物における疾患の再生です。後天性表皮水疱症（EBA）、皮膚や粘膜の原型の臓器特異的自己免疫疾患のために、いくつかの実験モデルは、最近設立された。 VII型コラーゲンの200アミノ酸（aa 757から967）のストレッチに対してIgG抗体を精製し、我々の現在の仕事で説明する動物モデルで猛烈な表現型だけでなく、人間に特徴的な病理組織および免疫病理学的特徴を再現したマウスに繰り返し注入されEBA ^1。本格的な広範な疾患は、通常、最初の注射後5-6日見られ、疾患の程度は、投与されたCの線量と相関しているollagen VII-特異的IgG。実験EBAにおける組織損傷（ブリスター形成^）-4組織結合自己抗体²によって顆粒球の動員および活性化に依存している。モデルは唯一の遠心性自己免疫応答のT細胞非依存位相を再現したがって、このモデルでは、自己免疫組織損傷に関与する顆粒球依存性炎症経路の解剖を可能にします。また、その値は、in vivoで自己抗体のブリスター誘導可能性を示すとEBA ^1,3、-6における水疱形成のメカニズムを調査研究の数によって強調される。最後に、このモデルでは、大幅に自己抗体によって誘発される疾患における新たな抗炎症治療薬の開発を容易にするでしょう。全体的に、EBAの受動転送動物モデルがアクセス可能で有益な疾患モデルであると研究者はEBAの病因ではないだけを分析するのではなく、基本的な生物学的にも臨床的に答えるのに役立ちます本質的な自己免疫の質問。

Protocol

1。病原性抗体の作製

注意：抗体は一晩0.1MグリシンpHは2.5から3（溶出バッファー）（ON）に格納されるべきではないとして精製と抗体の濃度は、同じ日に行われるべきである。

IgGのアフィニティー精製：免疫ウサギ血清25mlを使用します。

1. 4でONウサギ血清を融解℃で、20℃で1xPBS（バッファを実行している）と、それを1:1で混合し、10分間1260 xgでそれを遠心血清脂肪酸である場合には必要に応じて、ろ紙でろ過工程は、遠心分離後に含まれている場合があります。
2. 一方、G行列は1XPBSの10ベッドボリューム（ベッドボリューム=マトリックス容積（）バッファを実行している）でカラムを充填したタンパク質を洗う。
3. カラムに希釈し、濾過した血清を適用して、室温（RT）でロッキングプラットフォーム上で1時間インキュベートする。
4. フロースルー（FT）は50ミリリットルの小瓶チューブ内を収集します。濃度までそれを捨てないでくださいと精製IgGの力価が知られている。
5. 1XPBSの5ベッドボリュームで行列を洗い、その間に溶出したIgG画分を収集するために50mlのFalconチューブを準備する。ピペット1ミリリットルのpH中和バッファー：各チューブの1MトリスpH 10（そうでなければ、収集する溶出液の量に対する1時20分TRIS緩衝....

Results

マウスでは、本格的な疾患における抗原特異的抗体結果の受身伝達、臨床組織学的および免疫病理学的なレベルで人間EBA似ている。水疱、痂皮、びらん、脱毛症は、耳、鼻、足、脚、背中、マウスの目の周りに開発しています。病気の最初の臨床症状は、おそらく耳および/または頭部領域に表示されます。特定ウサギIgG、およびマウス補体C3の沈着は、IF病変部周囲の皮膚の凍結切片で真皮表皮接合部に直接で検出される。皮膚病変部では表皮下水疱や炎症性浸潤が組織学的に見ている。

病原VII型コラーゲン特異的抗体の注入が中断された場合は、疾患活動性は徐々に低くなり、数週間以内に病変が治癒する。それにもかかわらず、炎症後の瘢痕性脱毛症のある程度は無期限に持続するかもしれません。

Characteriz組換え抗原のation（および病原性IgGの）

ネズミコラーゲン特異的IgGは、真皮表皮接合（ 図2B）にバインドします。特異性は、免疫ブロット（ 図2C、

Discussion

実験動物への自己抗体の受動的な転送は、その病原性^7、-12を実証^するための主要なアプローチです。この方法により得られた動物モデルは、自己免疫¹³の間接的な証拠であることに加えて、病原性機構の遠心性の相の調査を可能にします。後天性表皮水疱症（EBA）の膨れ抗体誘導性顆粒球依存皮膚の受動的伝達モデルは、自己免疫性皮膚疾患における組織損傷のメカニズムを分析するために使用された。これはよくVII型コラーゲンに対する自己免疫の限界を超えて拡張する抗体媒介臓器特異的自己免疫疾患の根本的な、生物学的および臨床的に重要な側面を研究するために絶妙に有益なモデル疾患として、また浮上した。最後に、このモデルは、基底膜の生物学を含む基礎的な生物学的および病態生理学的過程、免疫複合体による顆粒球の活性化を研究するために使用することができるDの補体活性化。

ex vivoで 、動物モデルなど、いくつかの実験的な設定は、自己免疫性皮膚疾患EBAの¹⁴のために利用可能であるが、断然顆粒依存性炎症経路を勉強す.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
試薬の名称	会社	カタログ番号	注釈
組換え抗原			マウスVII型コラーゲンの組換え形態をコードするプラスミドは、対応する著者から提供されています。
免疫ウサギ血清	www.eurogentec.com		我々は、抗原200μgの、2週間隔で3回で免疫されたニュージーランドホワイトウサギを持っていた。このために、我々はEurogentec、SA、ベルギーのサービスを使用している。
プロテインGアガロース	ロシュ·ダイアグノスティックス	11243233001
Balb / cマウス	チャールズ·リバー·ラボラトリーズ
OCTコンパウンド、ティッシュテック	サクラファインテック	4583	10月、最適な切削温度
Cryomold標準	サクラファインテック	4557	25ミリメートル×20ミリメートル×5ミリメートル
Cryomold中間	サクラファインテック	4566	15ミリメートル×15ミリメートル×5ミリメートル
ユニリンクEinbettkassette	R. Langenbrinck	09から0503	組織学処理や埋カセット
SPEZIAL-Tatowierfarbeシュワルツ	H. Hauptnerund＆リチャードHerberholz社＆Co KG	71492000	ペーストを刺青
Tatowierzange TZ1	EBECO E.ベッカー＆カンパニー社		刺青装置
ヘパリン	カール·ロート社＆Co。	7692.1
37％ホルムアルデヒド	カール·ロート社＆Co。	7386
塩酸ケタミン	シグマアルドリッチケミー	K2753-1G
キシラジン塩酸塩	シグマアルドリッチケミー	X1251-1G
滅菌PBS	Biochrom	L182-50
デジタルカメラ	ニコン	COOLPIX 5400
シリンジフィルターユニット0.45μmのを牽引	ミリポア
キャリパー	ミツトヨ7309	1667338	ファーネル（ディストリビュータ）
病気のスコアシート			柵の例SED