Journal of Visualized Experiments(JoVE)の3月号は、ショウジョウバエの自発運動行動を測定するための3つの基本的に重要なアッセイに焦点を当てた記事から始まります。具体的には、これらのアッセイには、幼虫の這うアッセイ(幼虫の運動機能)、RINGアッセイ(成虫の運動機能)、および求愛アッセイ(協調能力と感覚能力を評価するため)が含まれます。
幼虫の這うアッセイは、幼虫の収集と、目的の実験薬への幼虫の曝露を含みます。次に、動物を方眼紙の上に置かれたシャーレに移し、1分間に交差するグリッドラインの数を計算できます。
Rapid Iterative Negative Geotaxis、またはRINGプロトコルは、成虫のハエを特殊なバイアルに入れ、軽くたたいて底に押し込むことを含みます。ショウジョウバエは本能的に重力に逆らって上向きに這います。画像解析により、ハエが短時間でどれだけ上向きに登ることができるかを測定することで、成虫の運動能力の程度を判断できます。
より複雑な感覚誘導行動を評価するために、求愛アッセイが使用され、性的にナイーブなオスとメスを交配ホイールとして知られる特殊な装置に配置することから始まります。実験セッション中、研究者はオスのハエがいくつかの特徴的な求愛行動を示す時間を記録します。印象的なことに、ほんの数分以内に、オスのハエはメスの方に向きを変え、彼女の腹部をたたいたいて、翼で歌を生成し、メスをなめ、そして最終的には交尾します。
まとめると、これらのアッセイは、ショウジョウバエの行動に寄与する遺伝的および環境的要因を解明するのに役立つ一連の強力な行動テストを表しています。
今月後半、JoVEは運動生理学に焦点を移し、サンパウロ大学の研究者が、スポーツのような複雑な運動に対するさまざまなエネルギーシステムの寄与を明らかにするために設計された方法を提示します。例として、私たちの著者は彼らのデモンストレーションのために柔道を選びました。慎重に配置されたポータブルガス分析計を使用して、制御された条件下で柔道運動中の酸素消費量を測定できます。運動前、運動中、運動後の酸素消費量を比較することで、好気性代謝と無酸素性無酸素代謝のエネルギー寄与を判断できます。運動前後の採血とそれに続く電気化学分析を使用して、柔道のスポーツに対する乳酸嫌気性代謝のエネルギー寄与を決定します。酸素消費量と血漿乳酸濃度のデータを組み合わせると、お気に入りの柔道の投げなど、複雑な運動の特定の側面に対するさまざまなエネルギーシステムの相対的な貢献度を判断するために使用できます。
また、3月には、JoVEはゼブラフィッシュのアルコール曝露に関する開発研究のリリースを計画しています。胚が所望の時点まで発達すると、mRNAを精製してqPCRを実施し、全マウントin situハイブリダイゼーションを行うことで、アルコール曝露が遺伝子発現に及ぼす影響を評価できます。光学顕微鏡を用いて、体節形状などの形態学的変化も評価することができます。目的の遺伝子がエタノール曝露によって減少または増加することが観察された場合、アルコール誘発性の表現型を救うために、キャップ付きmRNAまたはモルフォリノのいずれかを2細胞期のどこかの胚に注入することができます。著者らは、発育中のゼブラフィッシュにおけるアルコール曝露が、哺乳類で観察されるものと同様の形態学的表現型と遺伝子発現プロファイルをもたらすことを示し、また、mRNA注射が発達異常に対するアルコールの影響を逆転させることも示している。
Immunology and Infectionでは、JoVEがカリフォルニア大学リバーサイド校の植物寄生虫学の実験を紹介しています。特に、私たちの著者は、ネコブセンチュウ - 湿った土壌を自由に移動して植物の根に感染し、餌を与える義務的な植物寄生虫 - に興味を持っています。まず、感染した植物の処理方法とネコブセンチュウの収集方法について説明します。幼虫が感染力の高い段階に成長したら、土壌に接種することができます。その後、根を染色し、これらの寄生虫によって生成された特徴的な根の結び目の有無を評価できます。鉢植えの植物を用いた実験に加えて、著者らは、透明なポーチで育てられた植物で根の結び目アッセイを実施し、根を簡単に見ることができ、世界の作物損失の年間5%を占めるこの壊滅的な感染症の存在をハイスループットでスクリーニングする方法を示しています。
この3月のJoVEのコンテンツの概要は、その月にリリースが予定されている50以上の記事のうち4つに焦点を当てています。その他の注目すべき実験には、ショウジョウバエのアンテナで匂いを誘発する応答をイメージングする方法、電子鼻を使用して果物の揮発性化合物を分析する方法、および高分子を生細胞に送達するための通常のオフィス機器の転用が含まれます。