血管疾患の研究のためのマウスにおける同所性大動脈移植

サマリー

我々は、マウスからの腹部大動脈の部分がちょうど同種もしくは同系レシピエントにおける腎動脈下に同所移植する技術が記載されている。この手法は、均一な大きさの大きな動脈の移植が有利と認められる研究に役立つことがあります。

要約

マウスで吻合を伴う血管の手順は、一般的に困難であり、個々の外科医の技量に大きく依存すると考えられている。これは主に真であるが、これらの手続きの難しさを軽減し、再現性を高めることができる重要な原則がいくつかあります。同所性大動脈移植は、それが唯一の2つのエンド·ツー·エンドの吻合を伴うため、これらの原則を学ぶためにいる優秀な手順ですが、一貫性のある成功のための良好な縫合技術や船舶の取り扱いを必要とします。この手順では、レシピエントにおけるネイティブ大動脈の分裂が続くドナー動物から腹部大動脈の長さの調達から始まります。調達大動脈は、その後、受信者の大動脈の分割端部の間に配置され、エンドツーエンドの吻合を用いて、所定の位置に縫合する。この目的を達成するために首尾よく集中度の高い、優れたツール、着実に手、そしてどのように簡単に感謝の意を必要とするマウスの血管系は、血栓症で、その結果、破損することがあります。これらの重要な原則を学ぶことは、小型げっ歯類ではマイクロサージェリーを学習する際に最も初心者向けの時間を占めているものです。このプロトコルでは、私たちはこれらの重要なポイントを参照してください。このモデルは^{、1から8まで}の異なる実験系の様々な血管疾患を研究するために使用することができます。ここに示されている文脈では、それはほとんどの場合、移植後血管疾患、内膜肥厚は、同種移植片内で発生する固形臓器移植の共通の長期合併症の研究のために使用されます。モデルの主な利点は、それが定量的な形態学的解析を容易にし、移植された容器は、追加の制御⁹として役立つことができる内因性容器に隣接する位置していることです。ここに示されている技術は、ほとんどの場合18〜25グラムの重量を量るマウスに使用されます。我々は、C57BL/6J、BALB / CJ、とのC3H/HeJ株を用いて、我々の経験のほとんどを蓄積してきました。

プロトコル

1。術前準備

1. 外科的処置は、慎重に行う方法に関係なく、大きなストレスになりません。このようなストレスの影響を最小限に抑えるため、埋蔵量を最大化するために、動物を使用^10,11前に少なくとも72時間ビバリウムで維持されるべきです。
2. 手術器具、ガーゼ、綿棒とは、無菌でなければならない。これは、楽器のタッチ縫合または術野の唯一のヒントを提供滅菌手袋を使用する必要はありません。
3. 止血のためには、クランプ圧力は必要最小限であることが不可欠です。過度の圧力や乱暴な取り扱いに起因する血管への損傷は後肢の麻痺、腸管虚血、および24時間以内の死亡で、その結果、血栓症の原因になります。我々はこれ以上より2グラム/ cm ²の圧力でクランプを使用することで問題を解消することを見出した。これらのクランプは、 表1に記載されています。クランプ圧は高品質外科instrumen製クランプの仕様に示されているトンメーカー。我々は安価なクランプや使い捨てのクランプが普遍的にあまりにも多くの圧力をかけることを見出した。
4. 側副血行路と同様に腹部大動脈の相対的な位置と下大静脈（IVC）の場所は、ひずみに依存しています。また、特に側副血行路の場所に、個々のマウスの間に小さな変化を見つけるでしょう。

2。ドナー操作

1. マウスは、イソフルラン....

結果

図1は、大動脈移植片を示しています。白い矢印は、縫合線を示す。特許グラフトは、可視パルスが表示されます。 図2は、受信者の生存率は56日間にわたって続いている、典型的な実験であることを示します。一つのグループは、BALB / c大動脈を移植した野生型（C57BL / 6×FVB）レシピエントマウスから成っていた。 "KO"と称する他のグループは、24時間内グラフトの血栓症を生じるヘムオキシゲナーゼ-1の発現が欠損レシピエント（C57BL / 6×FVB）で構成されています。特筆すべきは、図に示すように、すべての受取人の死でこの結果。 図3が示すように正常な動物と移植レシピエントにおけるIVCと腹部大動脈の測定値をエコーします。移植片は、特許と非移植大動脈に外観が似ていることに注意してください。

ディスカッション

マウスは非常によくimmunogenetically ^9,12,13定義されており、必要に応じてそれらを簡単に、特定の遺伝子の発現を変化させるように操作することができるので、大動脈移植のマウスモデルは、多くの利点を提供します。冒頭で述べたように、マウスの血管手術が原因の血管のサイズのほとんどのモデルよりも困難である。このような大動脈としても偉大な動脈は、通常、内径100〜200ミクロンにすぎない、ので、これらの船を操作するスキルと器用^8,14かなりの量を必要とします。単にシステムを実装するために始めたもので、この手術で観察された最も一般的な合併症は、通常、乱暴に扱ったり、クランプすることで内膜の損傷に起因する血栓症によって引き起こされる、後肢の麻痺です。マイクロサージェリーが25グラム/ cm ²よりも通常高い圧力で、マウスを使用することには余りにも多くの圧力を作成するのに適したツールを販売している会社によって市販クランプのほとんど。 CLA我々が使用するMPSは2グラム/ cm ^2であり 、止血を達成すると血管を損傷しないだけで十分である圧力の圧力.......

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
アイテム	会社	カタログナンバー
血管クランプ	ファイン科学ツール	00396から01（サイズB-1を参照）
デュモン鉗子	ファイン科学ツール	11293から00
10から0はmicrosutureにニードル	AROSurgical	TK-107038
ストレートはさみ	Roboz手術器具株式会社	RS-5620
低温cauterizer	ビーバー-Visitec国際	8441000
自己保持トラクタ	ワールド·精密機器	14240