哺乳類の鼻は複雑な内部構造を持つ多機能な器官である。鼻腔は、解剖学的部位、形態や機能に著しく異なる、嗅覚呼吸、および扁平上皮などの様々な上皮が並んでいます。成体マウスにおいて、鼻、特に内部構造、主嗅上皮（MOE）として後方などの形態と実験的なアクセスを制限する、種々の頭蓋骨で覆われている。ここでは、保存され、解剖学的組織とほぼ全体とそのまま鼻組織を得るための効果的な方法を説明する。解剖顕微鏡下手術のツールを使用して、我々は順番に鼻の周囲の組織の頭蓋骨の骨を取り除く。この手順は、両方のパラホルムアルデヒド固定し、新たに解剖し、肌のマウスの頭を行うことができる。全体の脱骨手順は、従来の化学ベースドに必要な実験時間よりも大幅に短くなって20〜30分程度をとり、石灰化。また、鼻の組織標本から無傷薄い水平または冠状または矢状セクションを取得するために重要である甲、間に閉じ込められた気泡を除去する簡単な方法を提示する。我々の方法を用いて調製した鼻腔組織は、特に地域特有の検査との比較に関心がある研究では、全体のマウント全体上皮の観察だけでなく、形態学、免疫細胞化学、RNAのようなin situハイブリダイゼーション 、および生理学的研究のために使用することができる。
このコンテンツを表示するには、JoVEへの購読が必要です。 または、無料トライアルをお申し込みください。
方法論記事
プリザーブド解剖組織と無傷マウスの鼻腔組織を準備するための効果的なマニュアル脱骨方法
* These authors contributed equally
この記事について
要約
概要
哺乳類の鼻腔は、異なる機能を果たす組織や臓器の様々なタイプが含まれています。鼻腔、肺の中に空の旅を可能にし、外に上気道の入り口部分を構成している。吸入空気は、それが同様に清掃や刺激や有害物質や感染性微生物2を除去するためにフィルタリングなどの温度と湿度の調節1を経鼻腔を通過する。両方の治療は腺や血管を含め、鼻上皮および上皮下組織によって実施され、下気道や肺を保護するために不可欠です。呼吸および上皮防衛におけるその役割に加えて、鼻の組織はまた、通過する空気中の化学物質の広い範囲を検出嗅覚と三叉神経システムの末梢感覚装置が含まれています。活性化されたシステムに応じて、鼻の中の化学物質の官能検出のいずれかを誘発することができ嗅覚、刺激、または痛み3,4。
末梢嗅覚系は複雑であり、鼻腔内のいくつかの解剖学的に分離された嗅覚の感覚器官で構成されている。このうち、主嗅上皮（MOE）はげっ歯5の鼻の上皮の約45から52パーセントを占めると後方領域に配置され、最大である。前腹領域では、鼻中隔の各辺に沿って座る鼻器官06として知られている管状構造のペアがある。 Masera 7,8とGruneberg神経節9の中隔臓器として知られている嗅覚ニューロンの二つの追加の小さなグループが、それぞれ、腹側中隔と鼻腔の背エントリ領域に沿って存在します。こ....
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
プロトコル
1。マウス鼻の準備
我々はこの研究で、成人C57BL / 6背景のマウスを使用していました。すべての動物のケアと手順はメリーランド大学、ボルティモア郡の動物のケアと使用委員会（IACUC）によって承認されています。
1.1 paraformaldahyde固定マウスから鼻を取得
図1。マウスの頭蓋骨の骨：頭蓋骨の背面図B：。削除下顎骨と頭蓋骨の腹ビュー。頭蓋骨は、40日齢のマウスから調製した。個々の骨は、より良い視覚化のために色分けされています。 より大きい数字を表示するには、ここをクリックしてください 。
- 番目以下の個々のマウスを固定するt....
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
結果
この方法を使用して、我々は確実にほぼ完全に無傷の鼻腔組織を得ることができます。 図2Aは、パラホルムアルデヒド固定頭部から成人鼻標本の画像を示している。この標本では、MOE、隔臓器、Gruneberg神経節、およびVNOを含むすべての4つのサブ嗅覚感覚器官は、無傷である。また、気道上皮や腺などや船舶などの上皮下組織は、保持されます。我々は、我々が正常形態、分布、神経支配、および様々な特殊な感覚細胞集団16,17,36-38における細胞マーカーの発現を調査した多くの研究では、この方法を使用している。
図2Bは、一緒に脳、嗅球、と鼻で標本を示しています。この拡張の準備は、周辺と中央嗅覚システム間の神経接続を必要とする研究では特に便利です。私たちは、頭蓋骨の骨のsuを削除することで、この標本を準備し顔面骨の除去前に脳rrounding。我々の拡張方法は、研究者が単一の製剤の両方の末梢および中枢嗅覚系で実験を行うことができます。
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
ディスカッション
ここでは、下記の組織を温存しながら順次周囲の骨を除去することにより、マウスの鼻から無傷の嗅覚および呼吸組織を分離するためのステップごとの手順を示した。我々は慎重に、骨の除去は、その全体をも、最も繊細な組織を維持することができることを示している。我々はまた、我々は神経接続を維持するために一緒に両方の脳と鼻の組織を分離しているこの技術の可能な修正、洞察を共有しています。この新しい方法は、in situハイブリダイゼーション組織化学、RNAでさらに処 理、および生理学的実験のための単一の標本で全体の嗅覚や呼吸器組織を分離するための手段を提供します。
骨除去の利点
我々の方法の前に、脱灰剤は、典型的には、組織切片および免疫組織化学のために骨を柔らかくするために使用された。しかし、脱灰、骨の大きさや動物の年齢に応じて時間あるいは数日間29,30用骨decalcifiersにおける組織のインキュベーションを要する長いプロセスになることがあります。一般的に使用される剤は、変更または免疫標.......
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
開示事項
著者は、彼らが競合する経済的利益を持っていないことを宣言します。
謝辞
この作品はWeihong林への研究助成金（NIH / NIDCD 009269、012831及びARRA行政サプリメントNIHの助成）によってサポートされていました。我々は、特にビデオテープに録画して処理するの彼の技術支援のためにUMBCで氏ティムフォードに感謝します。また、ビデオ撮影での機器の援助のためにオリンパスアメリカ社から博士ダフネブラムバーグ、UMBCで氏シェアーペティ氏とニコラス·マッカラムに感謝したい。
....アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| Dissection | |||
| Rongeur, 1.0 mm Jaw width | World Precision Instruments (WPI) | 501333 | |
| Fine Forceps, Dumont 3 | WPI | 503235 | |
| Fine Forceps, Dumont 55 | WPI | 14099 | |
| Fine Forceps, Dumont AA | Fine Science Tools (FST) | 11210-20 | |
| Specimen Forceps,鋸歯状 | VWR | 82027-440 | |
| ハサミWPI | 501753 | ||
| アイリスはさみ、ストレート | ミルテック | スV95-304 | |
| 解剖顕微鏡 | リンパス | SZ40 | |
| [ヘッダー] | |||
| 組織埋め込み | |||
| 最適切断温度(OCT)コンパウンド | さくらファインテック | 4583 | |
| プラスチック埋め込み金型 | VWR15160-215 | ||
| スピレーター真空ポンプ | フィッシャーサイエンティフィック | 09-960-2 | |
| [header] | |||
| セクション染色 | |||
| ニュートラルレッド | ACROS有機 | CAS553-24-2 | 核染色 |
参考文献
- Naclerio, R. M., Pinto, J., Assanasen, P., Baroody, F. M. Observations on the ability of the nose to warm and humidify inspired air. Rhinology. 45, 102-111 (2007).
- Bjermer, L. The nose as an air conditioner for the lower airways. Allergy. 54, Suppl 57. 26-30 (1999).
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
再版と許可
タグ
