正誤表：ナイフエッジ走査顕微鏡法における試料調製、イメージングおよび解析プロトコル

サマリー

ナイフエッジ走査顕微鏡のための試料調製、イメージングおよび解析プロトコルに訂正が行われました。ニッスル染色のプロトコルに重要な変更が加えられました。

要約

ナイフエッジ走査顕微鏡のための試料調製、イメージングおよび解析プロトコルに訂正が加えられました。ニッスル染色プロトコルに重要な変更が行われました。

プロトコル

ナイフエッジ走査顕微鏡のための試料調製、イメージング、および解析プロトコルに訂正がありました。ニッスル染色のプロトコルが以下のように変更されました：

2. 試料調製：ニッスル染色

1. マウスをケタミンとキシラジンを腹腔内投与して深く麻酔し、室温のリン酸緩衝生理食塩水（pH 7.4）50 mLで経心腔灌流を行い、次に室温の10%中性緩衝ホルマリン（pH 7.4）250 mLを灌流し、最後に原液のインク（India ink）3.0 ccを灌流させます。
2. 生理食塩水と固定液による全身灌流は、心血管系から血液を除去し、組織を固定するために必要です。インクによる灌流は、心血管系の血管網を完全に満たすために必要です。
3. 得られた脳を、段階的な濃度のエタノール系列（25%{}-100%）で脱水し、前述の1.8-1.9のプロトコルに従ってアラルダイト樹脂に包埋します。包埋剤にLR Whiteを使用する場合は、前述の1.10のプロトコルに従います。
4. マウスをケタミンとキシラジンを腹腔内投与して深く麻酔し、室温のリン酸緩衝生理食塩水（pH 7.4）50 mLで経心腔灌流を行い、次に室温の10%中性緩衝ホルマリン（pH 7.4）250 mLを灌流し、最後に原液のインク（India ink）3.0 ccを灌流させます。
5. 生理食塩水と固定液による全身灌流は、心血管系から血液を除去し、組織を固定するために必要です。インクによる灌流は、心血管系の血管網を完全に満たすために必要です。
6. 得られた脳を、段階的な濃度のエタノール系列（25%{}-100%）で脱水し、前述の1.8-1.9のプロトコルに従ってアラルダイト樹脂に包埋します。包埋剤にLR Whiteを使用する場合は、前述の1.10のプロトコルに従います。
7. マウスをケタミンとキシラジンを腹腔内投与して深く麻酔し、室温のリン酸緩衝生理食塩水（pH 7.4）50 mLで経心腔灌流を行い、次に室温の10%中性緩衝ホルマリン（pH 7.4）250 mLを灌流し、最後に原液のインク（India ink）3.0 ccを灌流させます。
8. 生理食塩水と固定液による全身灌流は、心血管系から血液を除去し、組織を固定するために必要です。インクによる灌流は、心血管系の血管網を完全に満たすために必要です。
9. 得られた脳を、段階的な濃度のエタノール系列（25%{}-100%）で脱水し、前述の1.8-1.9のプロトコルに従ってアラルダイト樹脂に包埋します。包埋剤にLR Whiteを使用する場合は、前述の1.10のプロトコルに従います。

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2. 試料調製：ニッスル染色

1. 本プロトコルは、Mayerichら⁷のプロトコルに厳密に準拠しています。
2. マウスをケタミンおよびキシラジンの腹腔内注射により深く麻酔し、室温のリン酸緩衝生理食塩水（pH 7.4）50 mLで経心腔灌流を行った後、冷4%リン酸緩衝パラホルムアルデヒド（pH 7.4）250 mLで灌流します。
3. 次に、脱イオン水に溶解させた0.1%チオニン染料溶液100 mLで灌流し、個体を冷蔵庫（4 °C）で24時間保存します。
4. 24時間後、頭蓋骨から脳を取り出して新しい0.1%チオニン溶液に入れ、4 °Cで7日間保持します。この手順に時間をかけることで、en bloc標本へチオニンを完全に浸透させます。
5. その後、脳を脱色し、50%エタノール水溶液から始めて100%エタノールまで段階的なエタノール系列を用いて、6週間かけて脱水します。50%から70%までのエタノール置換は冷蔵庫（4 °C）で保存し、70%以上のエタノール置換はすべて室温で保存します。
6. アセトンを3回置換した後（室温で各溶液に2～4日間浸漬）、上述の1.8-1.9のプロトコルに従って、脳をアラルダイト樹脂に包埋します。包埋剤にLR whiteを使用する場合は、上述の1.10のプロトコルに従います。