繁殖や生体内研究に適したゼブラフィッシュ施設は、簡単で手頃な価格で建設されています。メンテナンスは最小限で済みます。この施設は、学生の参加と独立した研究に最適です。
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この記事について
サマリー
要約
生体内では生物医学研究は、臨床の進歩に体外調査結果に変換するために極めて重要である。限られたリソースを持つ小型の学術機関は、それが事実上不可能に研究のための典型的なげっ歯類の施設を構築し、維持するために見つける。ゼブラフィッシュ研究は薬理学、生理学、発達および遺伝的研究におけるin vivo研究のための貴重な代替手段であることが実証されている。この記事では、機能的なゼブラフィッシュ施設が簡単かつ手頃な価格の方法で構築することができることを実証している。私たちは、そのような施設は、最小限のツールと専門知識を用いて約1営業日で構築することができることを実証している。本研究で構築し27 1.8 L水槽のゼブラフィッシュ設備の費用は約1500ドルだった。私たちは3ヶ月間の初期作業150魚のコロニーの維持が千ドルであると推定している。このプロジェクト研究のためにゼブラフィッシュの養殖するために導入された、関係の学生が、提案している。
概要
彼らはシステム及び生物レベルで翻訳されるために、インビトロ研究に許可しているため、生体内でのモデルは、総合的な生物医学研究の実施に不可欠である。例えば、小型哺乳類、すなわちげっ歯類との研究は、薬物の開発および利用可能な薬物の改善に必要な証明されている。しかし、（財政的およびロジスティック）複雑さは、それは実験のために齧歯類の施設を建設し、維持することは事実上不可能小さな研究の学術機関で提案するかもしれない。それにもかかわらず、in vivoでの研究は、より少ない複雑な物流を必要とする他の動物種を用いて行うことができる。ゼブラフィッシュ（ ゼブラフィッシュ ） が正常に遺伝学、開発、病態生理、および薬理1,2,10,11,12を研究するためのin vivoモデルとして使用されてきた。 rに比較した場合の実験のためにゼブラフィッシュを収容するために必要な設備が比較的単純でかなり安価であるodent施設。 Kim ら 3は最近、詳細に部品や人件費の両方が含まれている約1500ドル、のために構築することができる80のタンクゼブラフィッシュの住宅システムを記載している。これは商業的供給者の任意の数から既製、80タンクシステムを購入することを要求されることはほぼ8500ドルとは全く対照的である。しかしながら、説明は、Kim らによって与え。魚研究の初心者のために従うことが複雑で困難な場合がある。我々はゼブラフィッシュ施設が1500ドルの投資のための簡易的に構築することができると信じています。
小さ な学術機関での生体内の施設の設立は、より強力かつ徹底した調査を生成すると追加のツール彼らの学部を提供しています。 中でサポートされているin vitroデータvivoでの結果は、一般的にのみ体外のアプローチで使用して得られたデータよりもより包括的な生物医学研究を生産する。そのため、in vivoでの研究施設の実装が大幅に全体的な研究努力における機関の成功強化します（研究への学生の暴露、出版物、通信、外部資金の追求、 等 。）。
この研究で説明するようなゼブラフィッシュ施設の建設は、フィナンシャル·タイムズを収縮時に（in vivoでの研究施設なしまたは機関）限られた施設との研究教育機関に最適です。
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プロトコル
注：これらのプロトコルは、プレスビテリアンカレッジのIACUCのガイドラインに従ってください。
表1に列挙した材料を取得します。
2.メーカーの指示に従って5シェルフChromeを組み立てます。これは施設を収容するために使用されます。
3.水リザーバ及び濾過システム（図1A及び図2）を構築する。
- ガイドとして、図1Aを使用して、最終的な設置場所とサイズを決定するために、18ガロンのバケツ、ポンプ、フィルター、紫外線ランプをレイアウト。
- 部品がレイアウトされると、測定し、組み立てに必要な長さに¾ "PVCパイプをカット。特定のスペースのニーズと制限に応じてすべてのパイプの長さを変更します。
- PVCプライマーとセメントを使用して、以前にレイアウトとして配管や継手を組み立て、以下の（3.3.2および3.3.3）を参照してください。
- サンドサンドペーパーによるパイプの切断端部は、タッチANに滑らかになるまでデブリがないdは。
- 総理パイプの外側と塩ビプライマーから含ま綿棒で購入したPVCプライマーとフィッティングの内側。
- 含ま綿棒を使用してパイプの外側にPVCセメントを適用することにより、一緒にパイプと継手セメント。塩ビセメントを必要とするすべての手順について繰り返します。
- 棚建設の片側に18ガロンのバケツを置きます。
- リザーバタンクの側面にバルクヘッドコネクタを取り付けます。
- バルクヘッドに¾ "PVCパイプを取り付けます。
- ¾ "¾を使用してポンプ入口へのパイプ」のもう一方の端を取り付け金具作るネジ付き。
- 2 90度の肘と¾ "PVCパイプを使用してポンプにフィルタを接続します。
- 1活性炭フィルター、続いて1枚のフィルタがデブリをフィルタし、水に塩素および化学のレベルを減少させるために使用する。
- フィルタaccordiにUVランプを接続します製造元の説明書をngの。
- ワイヤータイを使用して、ラックの最初の棚の上部側にポンプとフィルターシステムを取り付けます。選択した棚/ラックのサイズとレイアウトによるアセンブリおよび添付ファイルの順序を変更します。
- ポンプとフィルターシステムが組み立てられ、棚に取り付けられた後、水の貯水池への水のガロン当たり1 bioballを追加します。
4.主電源ライン（図1Bおよび2）を構築する。
- 測定主電源にUVランプを接続するPVCパイプ」3/4部分を切断し
- UVフィルターから来るのPVC排気」¾にティーを接続することにより、主電源ラインを開始するためのPVCティー」¾を使用してください。 。
- システムのメンテナンス洗浄のためのドレインとして機能するPVCティーの底に開閉弁を追加します。
- 「¾を測定し、切断したPVCティー」3/4上部から主電源ラインを起動し、PVCラックの棚のそれぞれについて、供給管を提供する所望の長さのパイプ。
- インストール¾ "ラックの各棚に入ります水平線のためのPVCティーを。
- 必要に応じて（提示）、追加¾ "開閉弁各棚供給ライン各棚の単離およびシステムのモジュール設計を可能にする。
- 一番上の棚に線を減圧として¾ "PVCパイプを使用してください。この行が棚の裏に実行されている場合は、保存のために、この棚を使用しています。開閉弁¾ "メイン排気ライン（ 図1B）の線減圧を終了する。
- 上記のステップは、プライム完了し、リザーバとろ過システムを構築する際に、以前に行ったように一緒に塩ビ管を固めるされたら。
5.主排気ライン（図1Cおよび2）を構築します。
- ラックfの他方側に主排気ラインの垂直方向の長さを実行する主供給ラインにデキュー。各棚から魚の水槽からトップとドレインラインでの主電源ラインを受け取るために、この垂直線のために2 "PVCパイプを使用してください。
- 「垂直主排気ライン用の塩ビ管と2を使用する「2の部分をカットし、各棚から水槽のドレイン線を受け取るためにPVCティーを。スポンジフィルター上で再生水を排出するストックタンク内の主排気ラインを終了します。
- 2「PVCパイプ片の全長を開いて1インチをカットし、水槽からの水平ドレイン線用のPVCティー垂直主排気ラインに接続する。
- PVCキャップ2」2水平ドレイン線を「キャップ。
- 首相と必要な付属品（コネクタ、乳首や肘）を使用して作品を固める。
6.水槽（図3）を構築。
- ドリルで、ホールソーと上辺以下の「魚タンク1の背面に穴 "1 1/8を切った。
- （外部へのタンクの内側から）穴を介して（添付＃18 Oリング付き）のねじ¾ "PVCオスアダプタをスライドさせます。
- 90度を取り付け、締め3/4「魚タンク排気管を作成するために男性のアダプタにPVC肘をスレッド化。排気システムを通過するゼブラフィッシュを防ぐために、保持ナットをねじ込む前に、細かいメッシュの部分を追加します。
- その排気管がタンクの後ろに排水ラインのオープンスペースに終わると水槽を置き
7.水システムの起動
- そのようなリザーバーに使用されるものなど、いくつかの容器中に、システム内に含まれる水の3倍の量を測定する。この水は48時間調整のため室温で放置しましょう。
- システムに水を追加し、3日間の最低循環してみましょう。
- 汚染物質のTHAのシステムを取り除くために、循環の最初の3日間を通して積極的にシステム内の水を変更tは、パイプ内に存在する。
- スターターゼブラフィッシュを追加し、窒素サイクルの確立を取得することができます。 1.8 Lあたり7ゼブラフィッシュを保持し、かつのLiNbO 4とマクナブ6によって示唆されているように、週末の間、1日1回、週の日の間に1日2回、それらを供給し、一貫性のpHを7に正規化する。
- 、硝酸塩（<75 mg / Lの）を監視魚を追加した後の最初の週の間の毎日の亜硝酸塩（<10 mg / Lの）、およびアンモニウム（0ミリグラム/ L）、週に2回、一度所望のレベルは、通常の水の変更に維持されている。
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結果
ポンプとFltersシステムの構築
ラックを組み立てる最初のステップを設定したら、ポンプおよびフィルタシステムを構築することである。フィルタは、システムのポンプに接続されており、容易にフィルタのメンテナンスや交換を可能にする第1の棚の底レベルの上方に位置している。同様に、UVランプは、フィルタのPVCパイプに接続され、必要に応じて（ 図4A）のようなUVランプの容易な交換を可能にするために、プラスチック製のワイヤータイで適所に保持される。直ちにポンプ次の紙フィルター、活性炭フィルター、UVランプはPVC管を介して設置されている。 Bioballs硝酸塩に有毒なアンモニア廃棄物を変換する細菌の成長のための表面を提供するために、タンクに添加される。システム内の水のガロン当たり1つbioballは細菌の増殖を可能にするのに十分な領域である。オーバーフローの場合にbioballsリザーバとcontaminaの機会に残るように、プラスチック製の貯蔵器の蓋を装着することができるンが最小化されている。オーバーフローイベントが非常に低い場合であっても、（リザーバの上部のパイプの流...
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ディスカッション
この記事の主な目的は、機能的なゼブラフィッシュ施設の建設が複雑ではなく、最小限の工事知識を持つ初心者の魚の研究者が構築できることを実証することである。さらに、この資料では、この機能のゼブラフィッシュの施設のための材料は、地元のペット用品店やホームセンターから容易にかつ低コストで取得できることを示している。すべての材料とツールは、システムの構築や魚の水槽を取得した後は約1営業日かかります。 72時間最初の実行は、そのようなリークや、測定すべき低水圧、として、システム内の任意の障害を可能にする。システム内の汚染物質が循環から除去されるために、この最初の実行もできます。例えば、PVC接着剤は、循環の最初の数時間の間に除去される有害な有機材料を含んでいてもよい。システムはmaintenボリュームと水の交換の調整を可能にし、容易に主排水弁を有するンス。さらに、システムはまた、水の圧力の調整を容易にする圧力リリーフラインを有している。それは水圧の調節を可能にするので、1つまたは2つだけの区画（棚）が使用されますと、このラインが便利です。
施設は、個々の研究者の容量のニーズを満たすた...
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開示事項
著者は、この論文のための目的の競合を宣言しません。
謝辞
著者は、リサーチ＆コラボレーション（SPARC）賞小薬局·アワードを通じて、このプロジェクトの財政支援のために薬局のプレスビテリアンカレッジスクールの研究局に感謝したいと思います。著者は、ジョン·Smink、水生動物研究所のマネージャー、クレムソン大学、クレムソン、彼の技術支援の原稿の改訂のためのSCに感謝。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| アイテム | ブランド | 数量 | |
| 高さ 74インチ x 幅 48インチ x 奥行き 18インチ 5段 スチール製自立型シェルフユニット | スタイルの選択 | 1 | |
| 18ガロン 一般バケット/トート | セントレックス プラスチック: LLC 頑丈なトート | 1 | |
| 6アウトレット電源タップ、15フィート | マスター電気技師 | 1 | |
| 9ワットUVウォーターガーデンクラリファイヤーFiIterとUVランプ | Smartpond | ||
| 全体の水交換フィルター | ワールプール | 6 | |
| 不透明な全家プレフィルターハウジングワー | ルプール | 2 | |
| スレッドシールテープウィリアム | Hハーベイ | 1 | |
| 8液量オンスLO-VOCポリ塩化ビニールセメント | オーティー | ||
| 8液量オンスLO-VOCプライマー | オーティー | ||
| 1/4インチ×100フィートビニール点滴灌漑分配チューブ | ミスター造園家 | ||
| 1/4インチとげのある点滴灌漑オン/オフバルブ | ミスター造園家 | 33 | |
| 9ポートNPT灌漑マニホールドフィルター付き | ミスター ランドスケープ | 6 | |
| ドロップイン フィルター ハウス付き | ワールプール | 6 | |
| 2 インチ 直径 90 度 PVC エルボー | LASCO | 3 | |
| 2 インチ 直径 90 度 ティー | LASCO | 3 | |
| 3/4 インチ 直径 90 度スリップ エルボー | LASCO | 15 | |
| 3/4 インチ 直径 PVC アダプター | LASCO | 7 | |
| 3/4 インチ 直径 PVC ティー | LASCO | 12 | |
| 2 インチ DIA PVC キャップ | LASCO | 3 | |
| 1インチ径x 3/4インチ径PVCアダプター | ラスコ | 2 | |
| 3/4インチPVCソケットインラインボールバルブ | アメリカンバルブ | 5 | |
| 1/2インチ径x 3/4インチ径PVCアダプター | ラスコ | 8 | |
| 3/4インチ径PVCキャップ | ラスコ | 1 | |
| 2インチx 5フィートPVCパイプ | シャーロットパイプ | 4 | |
| ¾-インチx 10フィートPVCパイプ | シャーロットパイプ | 3 | |
| 11 / 16x1-7 / 80 PVCリング | SXT | 10 | |
| ½”PVCオス | アダプターSXT | 1 | |
| ¾”PVCカップリング | SXT | 1 | |
| ½”PVCメスアダプター | SXT | 1 | |
| リンク | |||
| 1.8 Lデュアルベータキーパー | トップフィン | 27 | |
| ¾”PVCオスアダプター(W /#18 Oリング) | SXT | 28 | |
| 90度¾”ねじ山付きPVCエルボ | SXT | 27 | |
| ファインメッシュ | N / A | 1ヤード | |
| バルクヘッドコネクタ | N / A | 1 | |
| 弓のこ | N / A | 1 | |
| N / A | 1 | ||
| 穴鋸 | N / A | 1 | |
| モンキーレンチ | N / A | 1 | |
| プライヤー | N/A | 1 | |
| 巻尺 | N/A | 1 | |
| 安全メガネ | N/A | 1 | |
| 作業用手袋 | N/A | 1 |
参考文献
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- Grim, J. M., et al. Hemogen (hemgn), a transcription factor that regulates erythropoiesis and skeletogenesis in zebrafish. Strategic Conference of Zebrafish Investigators Poster Presentation, 2013, Asilimar, CA, , (2013).
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- McNabb, A., Scott, K., Ochsenstein, E., Seufert, K., Carl, M. Don't be afraid to set up your fish facility. Zebrafish. 9 (3), 120-125 (2012).
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