マウス脂肪デポのローカライズ、識別、および切除

サマリー

原因肥満や他の併存疾患の間で抜本的なと負の接続に、ロールの脂肪の研究は、病気で再生し、全体的な健康が保証されています。私たちは、 その場で、そしてインビトロ方法で使用して脂肪の研究を可能に脂肪デポの単離および切除するためのプロトコルを提示する。

要約

肥満は過去数十年で劇的に増加し、米国の成人人口の3分の1以上が罹患しています。2005年の肥満の経済効果は、直接的な医療費だけで1,902億ドルという驚異的な額に達しました。肥満は、さまざまな病気の主要な危険因子です。歴史的に、脂肪とその体内での主要かつ本質的な機能についてはほとんど知られていませんでした。茶色と白の脂肪は脂肪の2つの主要なタイプですが、現在の文献では、ブライトまたはベージュの脂肪と呼ばれる新しいタイプの脂肪が特定されています。研究によると、脂肪貯蔵庫には特定の代謝プロファイルがあり、特定の貯蔵庫は肥満やその他の関連疾患の傾向を許容しています。このプロトコルの目標は、研究者に脂肪デポを特定して切除する能力を提供することです 脂肪に対するさまざまな要因の影響の分析を可能にします。また、脂肪が病気や全体的な健康に果たす有益な役割または有害な役割も含みます。脂肪デポーの分離と切除により、研究者は肉眼的な形態学的変化と組織学的変化を調べることができます。単離された脂肪は、転写および翻訳変化を評価するための分子研究や、関心のある標的および作用機序を発見するためのin vitro実験にも使用できます。この技術は、複数のデポをシンプルかつ最小限の汚染で分離できる設計により、他の公開された技術よりも優れています。

概要

脂肪は、20世紀の最後の数十年の間、肥満の劇的な増加に起因するメディアのスポットライトで注目すべきな外観を作った。肥満は現在、成人の三分の一以上と米国の小児および青年の17％（米国^）1に影響^を与えます。すべての民族グループにまたがる、肥満のまん延を取り巻く統計調査は、メキシコ系アメリカ人（40.4％）、すべてのヒスパニック（39.1％）、及び非と比較して非ヒスパニック系黒人は肥満（49.5％）の最高年齢調整率を持っていることが示されているヒスパニック系白人^{（34.3％）2。}肥満の経済効果も医療制度への高まる懸念である。 2012年では、2005年の米国における肥満のためのケアの年間医療費は1902億ドル、全体の医療費の予算の約21％と推定された。悲しいことに、小児肥満は単独で、直接医療費140億ドルの原因であると推定された。統計的に、それは、平均医療費が決定された肥満を持つ個人は、この罹患率^3-5ないものより年間2741ドル高かった。

2型糖尿病、脂質異常症、心血管疾患、癌、筋骨格障害および慢性炎症：肥満のような、様々な条件のための主要な危険因子である。肥満は深くメタボリックシンドロームと他の慢性疾患^6-8の病因に関連付けられています。肥満や他の併存疾患との間のこのような抜本的なと負の接続では、科学的研究は、より良い現在の流行と脂肪で演奏多様で重要な役割を理解するた....

プロトコル

注：すべての動物の手順はシンシナティ大学の施設内動物管理使用委員会（IACUC）の承認を得て、および国立衛生研究所から実験動物の管理と使用に関する指針に従って行った（NIH公開番号。85から23、）1996年改訂。

1.マウスを安楽死させると滅菌

1. イソフルランのsupratheraputic投与量を含むドロップボックスにマウスを置き、効果に吸い込むことができます。マウスを安楽死された後、箱から取り出します。
2. Cervically安楽死の第二の手段として脱臼。
3. 70％エタノールで動物を洗浄することにより、マウスの外面を滅菌する。

2.識別3つの異なる脂肪デポの単離

1. 褐色脂肪組織（BAT）単離：
   1. 表皮と真皮のレーを切断を支援するために、アルコールクレンジングから毛皮が濡れていることを確認してくださいRS。
   2. テーブルに対するその背中に仰臥位でマウスを置きます。
   3. ちょうど鉗子、リフト付きダイアフラム下の皮膚をつかみ、ハサミで切開。
   4. 腹膜を露出させ、マウスの周囲に横方向に切断。
   5. マウスの上半分をdeglovingことで蝶形のBATデポを明らかにする。片手で下の付属と腹部を押さえ、頭の方に肌を引き上げる。
   6. それはテーブルの上に発生しやすい....

結果

識別、および鼠径部皮下脂肪、肩甲骨間褐色脂肪、内臓副睾丸脂肪（ 図1）と同様に、大動脈弓の血管周囲脂肪、胸部大動脈脂肪、副腎大動脈脂肪と大動脈大動脈脂肪のローカライズ（ 図2）を使用して成功裏に達成された記載され手術方法。 BAT及びWAT試料間の組織学的検査および分化を陽性に染色（ 図3）をヘマトキシリンおよびエオシン（H＆E）を用いて評価した。細胞死誘導DFFA様エフェクター（CIDEA）、および他の脂肪特異的マーカーは、上記のすべての単離および切除さデポを測定したアディポネクチン（ADIPOQ）、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（PPAR-γ）のRNAレベルの分析（データ示さず）。

皮下脂肪細胞および血管周囲脂肪細胞の初代細胞株を培養し、前脂肪細胞から分化したマイクロアレイ分析のために正常脂肪細胞への。脂肪細胞に転換培養前脂肪細胞をオイルレッドO染色（ 図4）で確認した。成功した単離、培養および脂肪細胞の分化をin vitro<.......

ディスカッション

肥満は罹患率の大ホストと脂肪が完全に理解されていないが果たす役割の完全な理解につながることができます。脂肪の分野において、したがって継続的な研究が必要である。動物モデルは、特にマウスモデルは、病気や潜在的な製薬治療のテストの進行に初期の研究に最適です。これらのモデルを使用して、脂肪デポの正確な分離および切除は、脂肪の影響を受ける疾患の病理の研究において非常に重要かつ必要なツールです。

脂肪デポに関する現在の文献では、脂肪貯蔵物、ならびにそれらの解剖学的位置の間の代謝挙動および変化に関する文献のかなりの量が存在する。しかし、具体的には、ローカライズ特定し、これらのデポを単離する方法についての詳細な方法を提供するいくつか存在する。脂肪の現在の単離方法の見直しに基づき、プロトコルtの小さなサブセットがあります帽子は、一度に1つまたは2つのデポを単離する方法の方法論を提供する。しかし、正確な解剖、汚染の最小量の複数のデポの単離を可能にする技術と同様に、アドレスが収集されたサンプルを研究する様々な方法がこのプロトコル^13-14に特徴的である。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
イソフルラン	Med-Vet International	#RXISO-250
70%エタノール	フィッシャー	07-678-001
DMEF-12	シグマアルドリッチ	D-6421	ティッシュを装着する前に水浴で温めます。
2 mlマイクロ遠心チューブMidsci		MCT-200-C-S
リン酸緩衝生理食塩水	Sigma Aldrich	P5368-10PAK