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方法論記事

コア生物学の概念を教えるために、マウス乳腺腫瘍細胞を用いた：簡単なラボ·モジュール

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DOI:

10.3791/52528

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2015年6月18日

 ,  , 
1Department of Natural Sciences, Marymount Manhattan College

この記事について

サマリー

動物細胞培養を使用して高度な細胞および分子概念を探求する生物学の学部生のための実行可能な実験モジュールが説明されています。学生は、化学療法剤への曝露により、乳がん細胞モデルを成長させ、特性評価し、操作します。細胞生存率は、標準的な方法と新しい方法の両方を使用した細胞計数によってアッセイされます。

要約

学部生は、生物医学、大学院および専門的なプログラム、または科学のキャリアに備えて、さまざまな細胞生物学および分子生物学の概念と技術を学び、理解し、適用することが求められます。これに対処するために、動物細胞培養技術の応用を通じて、細胞分裂、細胞コミュニケーション、および癌の概念を教えるための簡単な実験室モジュールが考案されました。ここでは、マウス乳腺腫瘍(MMT)細胞株を使用して乳がんのモデル化を行います。学生は、これらの動物細胞を培養で増殖させ、特性評価する方法を学び、従来の化学療法剤と非伝統的な化学療法剤が細胞増殖に及ぼす影響をテストします。具体的には、プレーティングや細胞の増殖に最適な細胞濃度の決定、薬液の調製や希釈の方法、増殖防止剤の最適な投与量や治療時間の流れ、各種治療に対する細胞死率の把握などを行います。このモジュールは、血球計算盤を使用した標準的な細胞計数技術と、顕微鏡ソフトウェアを使用した新しい細胞計数法の両方を採用しています。実験的な手順は、学生がホメオパシー薬や市販薬のテストなど、プロトコルの重要なステップを変更できるため、自由回答形式の調査に役立ちます。要するに、このラボモジュールでは、学生は科学的なプロセスを使用して、細胞周期、細胞シグナル伝達経路、がん、治療モードに関する知識を応用すると同時に、細胞培養や学部の教室では日常的に教えられていない実験データの分析など、さまざまな実験スキルを開発する必要があります。

概要

多くの場合、学部一般生物学コースでは、細胞周期調節および癌のトピックは触れているが、これらのコースの内容の幅は深さのために少し時間を残しているため、詳細に調査していません。また、学部生物学の学生は、通常、動物細胞培養に関連した高度な技術にさらされていません。適用すると、彼らが学んだことを分析しながら学生は、これらの概念のより深い理解の開発を支援するために、実験室での活動は、研究室の活動1を拡張研究のウォルターリード陸軍研究所 （WRAIR）の変形例として開発されました。ラボモジュールは、成長および癌細胞モデルを特徴付ける、細胞計数法を開発し、実行する、抗増殖剤で細胞を処置するための最適な時間経過および用量を確立し、そして異常な細胞シグナル伝達経路を識別することを含む段階的、実験的な戦略を使用して。実験はまた、オープンを可能にします-ended問い合わせ。

この活性のために必要な技術のほとんどは、一般的な生物学教授の研究室で行うことができます。活動は、学生が、ヒト乳癌2のモデルをマウス乳癌（MMT）細胞株の形態と成長速度を特徴づけることから始まります。乳癌は、その集団における有病率、大学中年学生にその親しみやすさ、および利用可能な広範囲のデータのモデルガンとして選択しました。それは十分に特徴づけられ、容易に得られるので、MMT細胞株を特異的に選択された、短い倍加時間を有しており、成長するのは簡単です。また、MMT細胞は、エストロゲン依存性、最も女性の乳癌と一致するあります。学生はその後、その作用機序だけでなく、学生を可能に変えている薬や治療の長さのestablished.The濃度である化学療法剤で細胞を処理することにより、MMT細胞における異常な細胞シグナル伝達経路を特定します細胞分裂の速度に対するこれらの変数の影響を評価しました。このアクティビティのキーアッセイは単に2つの方法のいずれかを使用して、細胞計数を必要とする細胞生存率の決意です。それぞれの方法は、強力な顕微鏡のスキルに依存します。学生は、標準的な、血球計法および新規顕微鏡撮影法を用いて細胞生存率を決定し、提案します。それらの知見に基づいて、彼らは活動への変更を提案し、テストすることができます。生徒はその後、自分のデータを表し、それらの仮説を洗練して、新しい実験的な戦略を考案する結果を解釈します。

この研究室での活動は、生物科学専攻新入生や年生レベルの生徒に適しています。これは、最初の年に、一般的な生物学または二年、分子/細胞生物学のコースを完了することができる1週間のラボ·モジュールに凝縮されています。活動の適切完了するために必要なスキルは、基本的な算術と代数、Cの配列に精通を含みます鉱石ラボのスキル（ 例えば 、ピペッティング、解決策作り、滅菌技術）細胞培養や表計算ソフトのインストラクターの知識を持つに沿って、データ分析、基本的な光顕微鏡と時間管理、。必要な試薬（ 例えば 、マウス乳腺腫瘍細胞、MMT 2）、化学療法剤は癌の動物細胞株モデルを含む（ 例えば 、タモキシフェン、クルクミン、メトホルミン、アスピリン）、トリパンブルーおよび細胞培養培地（ 例えば 、 イーグルの最小必須培地 ;適切なサプリメント（ 例えば 、ドナー馬とウシ胎児血清）とEMEM）。 、血球計数器、およびデジタル顕微鏡ソフトウェア、必要な楽器は、デジタルカメラの取り付け、コンピュータ、100ミリメートル、24ウェル組織培養プレート、CO 2インキュベーター（または同等）、安全キャビネット（クラスII BSC）と倒立光学顕微鏡を含みます。

TEACする動物細胞培養に依存して、特定のラボ活動の良い例があります。細胞生物学3における概念に関する時間学部学生。しかし、多くは、（ 例えば、放射性同位体、生きている動物の組織、高度な画像処理装置1,4,5）は 、（400レベルのコース6に適した、 例えば ）はかなり高度なプロトコルを記述し、容易にアクセスできない物資や技術を必要としますか、マルチ週間の学期長いプロジェクト6,7を必要とします。ここで説明する実験室の活動は簡単であり、一般的な実験室機器と1週間で実施することができます。

要約すると、このラボモジュールを効果的に導入したり、基本的で高度な研究室のスキル、実験データ解析、動物細胞培養の方法と科学的なプロセスを教えている間、細胞周期、細胞シグナル伝達経路および癌の概念を強化します。実験用モジュールは、シンプルかつ経済的にアクセス可能で、オープンエンドの問い合わせに対応する柔軟性と機会の両方を提供します。活動は、学生の創造性を奨励しますレシピガイドとしてではなく、機能するテンプレート実験戦略を提供することによって。それは覚え、理解、適用、分析、評価し、教科書のうち、科学研究の世界にそれらを引っ張る過程で学生を係合することによって作成を必要とする最も重要なことは、活動を満たすには、すべての咲く分類8のドメインを学びます。

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プロトコル

注：行動クラスII安全キャビネット（BSC）9における細胞および細胞培養試薬を持つすべての作業。彼らは生物学的リスクを低〜中程度のポーズとしてMMT細胞は、バイオセーフティレベルIに分類されます。 （拭う例えば 、紫外線、70％エタノール）使用の間BSCに適切な洗浄と除染の手順を適用します。

1. MMT細胞を成長させます

  1. 10％ウシ胎児血清（FBS）、2mMグルタミン、および1％抗生物質/抗真菌剤（10単位のペニシリンを補充したイーグル最小必須培地 （EMEM）で構成され、栄養豊富な培地10 mlを入れた10cmの組織培養皿で細胞を増殖させます、100μgのストレプトマイシン、0.25μgのアンホテリシンB）。 37℃で、加湿5％CO 2チャンバー内で細胞を培養。 3.6×10 6細胞/ cm 2の密度でプレート細胞（ステップ2において細胞を計数する参照します）。
  2. UNL 48時間ごとに新鮮な培地で細胞培養培地の半分を交換してくださいESS他に指示。倒立位相差光学顕微鏡で検査することによって、細胞の生存率及び形態を確認してください。
    1. （注）と100で下のサイズ、構造、形状​​、組織と推定数の細胞を特徴付ける - 200X倍率。この密度では、細胞は互いに上にし、接近して凝集していない、一つの面に表示されます。各セルは、ポイントに来て、そこから拡大し、薄くて長い、枝状の拡張子を持つ厚い、球状のコアで構成されています（ 図1参照）。
  3. 彼らは7.2×10 6細胞/ cm 2の細胞密度に達したとき、細胞を分割。細胞は、24時間あたり1.8×10 6細胞/ cm 2の倍加速度を示します。彼らは分割された回数を示すために、細胞の継代X（Pxを）を指定します。
    1. 3世代での（ すなわち 、3継代後、P3）、収穫、カウント、および3.6×10 6の密度で24ウェル組織培養プレート上に細胞をプレー細胞/ cm 2。
  4. 表示セル毎日、レコードのデジタル顕微鏡写真。 （注）と細胞の形態（ すなわち 、大きさ、形状、光反射特性）を説明します。定期的に細胞を計数し、細胞数に経過時間を関連付けることによって、細胞の倍加時間を決定します。

2. MMT細胞をカウント

注：実験用に設定したり、細胞の生存率を決定するために、細胞を継代培養する必要があるかどうかを決定するために、細胞をカウントします。ここで紹介する2つの方法があります。

  1. 血球計数器を使用すると、標準的な技術は、細胞をカウントします。
    1. 輝線血球計数器、トリパンブルー色素、化合物の光学顕微鏡、無菌の試験管、ピペット、マニュアルセルカウンタの0.2％溶液を得ました。
    2. BSCの下で、10cmの組織培養皿から細胞を除去するために、10mLのピ​​ペットを使用します。細胞を、24ウェルプレート上で増殖させている場合は、メディアを削除するには、1 mlピペットまたは千μlのマイクロピペットを使用しています。
    3. 、ピペット内に細胞培地を描く皿の底に対してピペットの先端を配置し、プレート全体にピペットチップをスライドさせながらメディアを追放。 、細胞を取り除く助け塊を解離し、より正確な細胞数につながることが5回 - 4を繰り返します。
    4. 15ミリリットル滅菌チューブ（または1ミリリットルマイクロ遠心機、または他の小容量チューブ）で得られた細胞懸濁液を置きます。そうでない場合は、元の組織培養プレート中の細胞を残す/ウェル。
    5. 非滅菌マイクロ遠心機、または他の小容量チューブ内：（1比1）BSCの下で、トリパンブルー溶液10μlと10μlの細胞懸濁液を兼ね備えています。
      注：トリパンブルーは、健康な生存細胞に吸収されない生体染色です。細胞が損傷または死滅されている場合には、トリパンブルーは、死細胞を計数することを可能にするセルを入力することができます（別名排除 ​​法を染料 ）。生存細胞の色が明るく軽いつつ、顕微鏡下で、死細胞は濃い紫色に表示されます。
    6. インキュベート5分間室温で。
    7. 血球計数器のカバースリップを置きます。溝にトリパンブルー細胞浮遊液10μlを適用します。 200X倍率 - 100で血球計数器を表示します。四隅グリッドが明らかである（ 図2参照 ）。
    8. 各グリッド領域内の全細胞に対する生存細胞（染色されていない）の数をカウントします。 4グリッドを平均し、細胞/ mlを得るために、1×10 4掛け。
      1. 皿当たり細胞（または細胞/ cm 2）の合計数を外挿する。 3.6×10 6細胞/ cm 2の所望の密度で新しい組織培養プレートに播種またはプレート上又はウェル中の生存細胞の総数を決定するために使用する細胞懸濁液の正確な量を決定するために、いずれかのこの番号を使用します。
        注：血球計数器の使用に関する追加のガイダンスについては、10を参照してください。
  2. 生存細胞をカウントするソフトウェアとデジタルカメラを使用してください。
    1. ジを取得gitalカメラ、それに付随するソフトウェア、トリパンブルー色素、化合物の光学顕微鏡、無菌の試験管、ピペットおよびコンピュータの0.4％溶液です。
      注：ここで使用されるMOTICソフトウェアを伴うMoticam 2,000デジタルカメラ。任意の同等のカメラとソフトウェアが十分なものでなければなりません。デジタルカメラのソフトウェアは、（製造業者のプロトコルに従って）事前に較正されていることを確認してください。
    2. BSCの下で、24ウェル組織培養皿の中で成長しているMMT細胞から培地を除去するために、1ミリリットルピペットまたは千μlのマイクロピペットを使用しています。優しくその後プレートに少量の未補充し（すなわち 、EMEM任意のサプリメントを含まない）の新鮮な培地（約500μl）を適用し、それを除去することにより、接着細胞を洗浄。ウェルに直接：0.2％トリパンブルーの10μlのを適用します（未補充しEMEMで1 1に希釈することによって作られました）。
    3. 室温で5分間静置します。
    4. 200X倍率W - 100の顕微鏡下でプレートを見ますi番目のデジタルカメラが取り付けられています。 2％トリパンブルーで染色すると、暗すぎる場合はプレートが非補充培地で洗浄することができます。
    5. コンピュータAにソフトウェアを開き、NDソフトウェアが設定タブから使用目的に合わせて較正されていることを確認します。 FOVの画像が表示されます。
    6. メジャー ] タブから[グリッド]を選択します。正方形幅約0.005センチメートルのグリッドが表示されます。各正方形の面積を確認するために、 グリッドの情報を選択します。
    7. 細胞（ すなわち 、5乗×9の正方形）をカウントするために、グリッドの特定の領域を選択します。 メジャータブから四角形を選択します。正方形の角をクリックして、選択の正方形を包含するようにカーソルをドラッグします。
      注：緑の色合いが選択さと幅、高さ、面積を提供するコーナーに表示されます白いボックス、および選択されたグリッドのセクションの周囲の正方形をカバーします（ 図3を参照）。
    8. viabの数を数えます決定された領域内のル·セル。顕微鏡下でプレートを移動させることにより、同一ウェルまたはプレート内の2つの他の場所についても同じ操作を行います。
    9. 測定面積が同じであり、倍率が変更されていないことを確認してください。エリア内の生存細胞の平均数を計算します。ウェルの領域を使用する（100 mMのは、面積は78.6センチメートル2皿のために24ウェルプレートのために、1つのウェルが2 cm 2の面積を有する）に格子状に線引き領域から生存細胞の数を推定ウェル内の細胞の合計数（細胞/ cm 2）。

3.抗増殖剤とのMMT細胞を処理します

  1. 選択された抗増殖治療薬（タモキシフェン、クルクミンおよびメトホルミン）とBSCの下で任意の薬剤、アスピリンの溶液を調製します。
    1. 27mMのストック濃度を生成するために、100％エタノール中でクルクミンおよびタモキシフェンを溶解します。 unsupplementにメトホルミンおよびアスピリンを溶かしますED EMEMは、それぞれ、500ミリモル、15 mMのストック濃度を生成します。
  2. 用量反応を確立します。
    1. 96時間は、用量​​反応曲線を生成するための種々の濃度で3つの抗増殖性治療薬（タモキシフェン、クルクミンおよびメトホルミン）とオプションの薬剤（アスピリン）とMMT細胞を扱います。最初に発表された報告1,11-16に基づく濃度の範囲ですべての薬剤を投与した後、公開されたものよりも大きいか小さい濃度で。
      注：用量応答は、所望の結果を生成するために必要な薬剤の最小濃度を決定します。ここで、所望の結果は、対照と比較して細胞増殖の減少です。
      1. タモキシフェンとクルクミンは、0.054ミリ（1μL）、0.108 mMの（2μl）を、0.162ミリ（3μL）および0.216ミリ（4μL）の濃度（および対応するボリューム）を使用します。
      2. メトホルミンは、2 mMの濃度（および対応するボリューム）（2μLを使用）、4 mMの（4μL）、6 mMの（6μL）、8ミリ（8μL）及び10mM（10μL）。
      3. アスピリンは、0.030ミリ（1μL）、0.060 mMの（2μl）を、0.099ミリ（3.3μl）を、0.150ミリ（5μL）、および0.216ミリ（6.7μL）の濃度（および対応するボリューム）を使用します。
    2. 3.6×10 6細胞/ cm 2の濃度で24ウェルプレート上に10cmディッシュからスプリットMMT細胞。両方の細胞計数法（ステップ2）で、初期細胞濃度を決定します。細胞」 の日スプリット」のこの新しい24ウェルプレートを呼び出します。
    3. 24時間細胞プレーティングした後、ステップ3.2.1で説明した濃度で、抗増殖治療剤、タモキシフェン、クルクミン、メトホルミン及びアスピリンのそれぞれとMMT細胞を処理します。 「0日 」としてこれを参照してください。
      1. 各ウェルは、メディア、無菌マイクロピペットの先端で使用マイクロピペットと新しいチップを500μlの最大新しい井戸がCRを回避するために処理されるたびに保持することができますようにOSS汚染。対照として2つのウェルを使用します。任意の薬物治療の非存在下で増殖させた細胞（陰性対照）と細胞が存在100％エタノール（溶媒対照）で増殖させました。
    4. 処理の4、顕微鏡下で細胞を観察し、使用してカウント- 。細胞は、一日おきに供給されたときに1日目96時間（4日目まで）のために（ステップ1.2参照）記載の濃度で細胞と再投与薬を育てますステップ2.2の方法（ 図4参照）。
    5. 実験を少なくとも3回繰り返します。
    6. 実験の長さにわたって、細胞生存率および薬物投与との関係をグラフ化することによって、各薬剤の最適濃度を決定する（ 図5参照）。
  3. 時間経過を確立します。
    1. 期間を変化させるための固定濃度で3つの抗増殖性治療薬（タモキシフェン、クルクミンおよびメトホルミン）とMMT細胞を扱います。最適濃度のidentifを使用用量反応実験によってIED（ステップ3.2を参照してください）​​。
      1. 0.216 mMのタモキシフェン、0.216ミリモルのクルクミンおよび10mMのメトホルミン：以下の濃度を使用してください。
        注：薬物は、その最適な所望の結果を得るために時間の経過が必要な時間の量を決定します。ここでは、所望の結果は、対照と比較して細胞増殖の減少です。
    2. 3.6×10 6細胞/ cm 2の濃度で24ウェルプレート上に10cmディッシュからスプリットMMT細胞。両方の細胞計数法（ステップ2）で、初期細胞濃度を決定します。細胞」 の日スプリット」のこの新しい24ウェルプレートを呼び出します。
    3. 24時間細胞プレーティングした後、ステップ3.2で識別された最適な濃度で、抗増殖治療剤、タモキシフェン、クルクミン、メトホルミン及びアスピリンのそれぞれとMMT細胞を処理します。 「0日」としてこれを参照してください。
      1. 各だけでなく、私たちのメディアを500μlの最大値を保持することができます無菌マイクロピペットの先端と新しいチップの新しい井戸が交差汚染を回避するために処理されるたびに、と電子のマイクロピペット。
      2. 対照として2つのウェルを使用します。任意の薬物治療の非存在下で増殖させた細胞（陰性対照）と細胞が存在100％エタノール（溶媒対照）で増殖させました。
  4. 細胞を増殖し、細胞を一日おきに送られたときに選択された濃度で薬物を再投与（4日目まで）96時間、（ステップ1.2を参照してください）​​。 1日目-治療の4、顕微鏡で細胞を観察し、ステップ2.2での方法を用いてカウントする（ 図4参照）。
  5. 実験を少なくとも3回繰り返します。
  6. 選択された濃度での細胞生存率および薬物治療の長さ（時間）との関係をグラフ化することにより、各薬剤のMMT細胞の最適な露光時間を決定する（ 図6参照）。

4.ラボモジュール

注：以下は、5日ですラボ·モジュールの研究室スケジュール。 図7は、スケジュールが5日以内に伴うであろうもののフローチャートです。この活性は、5日間で完了するため、時間経過または用量応答曲線のいずれかが生成されます。両方の曲線を生成するのに十分な時間がありません。用量応答実験について説明します。時間経過実験を容易に交換することができます

  1. グループにクラスを分割する：一つのグループは、用量応答および提案された用量応答濃度の中央に濃度を選択する他の時間経過を確立しています。
    1. 適切な濃度で十分な文化や薬剤の在庫を維持します。特に断りのない限り、BSCの下ですべての作業を実行します。
  2. 1日目
    1. メディアを作成し、（ステップ1のように）細胞を成長させるための直接の学生。
    2. 学生は10cmプレート上MMT細胞の株式を取得するように、細胞培養培地を準備しhemocytomeの使用のチュートリアルを与えるために学生を導きますター、デジタル顕微鏡（ステップ2のように）デジタルカメラ顕微鏡ソフトウェア。
    3. 今、製造業者のプロトコルを使用して、顕微鏡で使用される目標（ 例えば、4X、10X、20X）にソフトウェアを調整します。
  3. 2日目
    1. 学生は（ステップ2のように）総細胞数および細胞生存率を確認しました。
    2. 学生は、同様の結果が得られるを確認するために、顕微鏡ソフトウェアおよび血球計法の両方を用いて100 mmディッシュ上で細胞をカウントしています。
    3. （ステップ1のように）所望の出発細胞プレーティング密度に24ウェルプレートに100ミリメートル皿から24ウェルプレートおよび分割細胞を得るために直接の学生。これは、 日スプリットと考えられています。 24時間細胞培養インキュベーター中で24ウェルプレートを置きます。
  4. 3日目
    1. 24ウェルプレート上で24時間、MMT細胞を成長させます。学生は、顕微鏡で細胞を観察し、（ステップ2のように）顕微鏡ソフトウェアを使用してカウントしています。
    2. 学生/ TEを与えますがん治療薬の株式のサンプルをしています。それらを準備し（ステップ3のように）元のストック溶液を希釈しています。用量応答曲線を確立するために、それらの細胞への薬物の様々な濃度を加えます。これは、0日目と呼ばれています。
    3. 48時間の最大のための薬剤と細胞（ステップ1.2）をインキュベートします。
  5. 4日目
    1. 学生は24時間後に処理した細胞を観察しています。これは、1日目です。
    2. 顕微鏡ソフトウェアを使用して、各ウェルを数えます。レコードごとの写真よくなるようにカウントが（ステップ2のように）研究室の外に行うことができます。
    3. 別の24時間の薬剤と細胞（ステップ1.2）をインキュベートします。
      注：インストラクターは、追加のチュートリアルやデータ分析とグラフィカル表示の口コミを提供しています。学生は、データ収集の次の日のための図、グラフ、および統計分析を作成することを学びます。
  6. 5日目
    1. 学生は48時間、2日目の後に細胞を処理しています。
    2. 各カウントウェル顕微鏡ソフトウェアを使用して。レコードごとの写真よくなるようにカウントが（ステップ2のように）研究室の外に行うことができます。
    3. 効果的に（ステップ2のように）顕微鏡ソフトウェアメソッドを使用する学生の能力を検証する手段として、従来の血球計数器法により計数するための細胞を収穫し、収集します。
      注：これにより、データを収集し、結論を出すか、仮説を修正します。

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結果

MMT細胞を増殖し、計数法を比較します 。

マウス乳腺腫瘍細胞は正常に増殖させ、特徴付けられる（ 図1）と新規な細胞計数法はMOTICソフトウェア、顕微鏡用デジタルカメラ関連のソフトウェアプログラムを使用して開発されました。この新しい細胞計数法は、血球計（ 図2）を用いた従来のカウント方法と比較した細胞数（ 表1）を決定する際にも同様に正確であることが示されました。 、異なる増殖条件または細胞型への細胞数への影響を制御するために、2つの細胞計数法との比較は、抗増殖剤の存在下および非存在下で、異なる細胞株、神経細胞モデルPC12 17を行いました。

図3は、definの重畳グリッドを使用して、この方法を用いて細胞を計数するための領域の描写を示しています編寸法。グリッドは、視野（FOV）の上に置かれ、緑色のフレームは、グリッド（すなわち、9時間×5日間の...

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ディスカッション

ラボ·モジュールは、動物細胞培養の高度な技術を介して、細胞生物学のさまざまなトピックを教えることを目指し、その提示されています。モジュールは、モデルヒト乳癌細胞の複製に対する抗増殖性化学物質の数の影響を分析することによって、これを達成します。一次アッセイは細胞計数の基本的な技術に依存しており、顕微鏡ソフトウェアを用いて細胞数を計測するための新しい方法を紹介します。モジュールを備え活動が最も生物学のプログラムで利用可能な器具および装置を用いて行うことができます。モジュールは、安価で容易に得られる電源で5日間のスケジュールで実施することができます。デジタル顕微鏡カメラや顕微鏡ソフトウェアの特定のブランドはここ（MOTICソフトウェア）を用いているが、任意の同等のカメラとソフトウェアで十分です。

このラボモジュールは、ヒト乳癌のモデルとしてMMT細胞を利用します。学生は最初に成長し、これらを特徴づけるために教えられています培養中の細胞。なお、この実験用モジュールの正常に完了したことを強調するために重要であるだけでなく、未処理のMMT細胞を対照として、特に以来、健康なMMT細胞の外観と動作...

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開示事項

著者はMOTICから金銭または同等の支援を受けていません。

謝辞

この作業は、ジョセフ・アレクサンダー財団、ASBMB学部研究賞、2013-2014、および2012-2013年のメアリーマウント・マンハッタン・カレッジの科学賞助成金によって支援されています。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
組織培養フードESCOラボカルチャー リライアントクラスII タイプA2 生物学的安全キャビネット
ウォータージャクター CO2 インキュベーターCEDCOモデル1510
ブライトライン血球計算盤2つの別々のグリッドを持つアメリカンオプティカル
Motic Images PlusMac OSX Verison 2.0以上
ギルソン・ピペットマンレイニンインスツルメンツ株式会社P-20D, P-200D, P-1000D
CK30/CK40 培養顕微鏡オリンパス4対物レンズ倒立光学顕微鏡 カメラ付き
200 μl ピペットチップMidSci40200C
1,000 μl ピペットチップMidSciAVR4
10 ml Seriological PipetsTPPTP94010
24 ウェルプレートCoStar- Tissue Culture Cluster352424 ウェル、16 mm ウェル径、放射線滅菌済み
Trypan Blue Solution 0.4%SigmaT8154100 ml、細胞培養テスト済み non-haz
Bright-line Hemacytometer 交換用カバースリップ、非 hazSigma
マウス乳腺腫瘍(MMT)細胞ATCCCCL-51
イーグル最小エッセンテール培地 (EMEM)ATCC30-2003500 ml
ウシ胎児血清Σ F0926500 ml
メトホルミン塩酸塩ΣPHR1084500 mg
タモキシフェンΣT5648白または白黄色の粉末
カーマミンシグマC1386黄橙色の粉末
アスピリンシグマA2093はUSPテスト仕様を満たしています
Z375357

参考文献

  1. Hammamieh, R., et al. Students investigating the antiproliferative effects of synthesized drugs on mouse mammary tumor cells. Cell Biol Educ. 4 (3), 221-234 (2005).
  2. Sykes, J. A., Whitescarver, J., Briggs, L. Observations on a cell line producing mammary tumor virus. J Natl Cancer Inst. 41 (6), 1315-1327 (1968).
  3. Palombi, P. S. J., Snell, K. Learning about Cells as Dynamic Entities: An Inquiry-Driven Cell Culture Project. Bioscene: Journal of College Biology Teaching. 33, 27-33 (2008).
  4. Ledbetter, M. L. S., Lippert, M. J. Glucose Transport in Cultured Animal Cells: An Exercise for the Undergraduate Cell Biology Laboratory. Cell Biology Education. 1 (3), 76-86 (2002).
  5. Weaver, D. Cardiac Cells Beating in Culture: A Laboratory Exercise. American Biology Teacher. 69, 407-410 (2007).
  6. Marion, R. E., Gardner, G. E., Parks, L. D. Multiweek cell culture project for use in upper-level biology laboratories. Advances in Physiology Education. 36, 154-157 (2012).
  7. Mozdziak, P. E. P., James, N., Carson, S. usanD. An Introductory Undergraduate Course Covering Animal Cell Culture Techniques. Biochemistry and Molecular Biology Education. 32 (5), 319-322 (2004).
  8. Anderson, L. W., et al. A taxonomy for learning, teaching and assessing: A revision of Bloom's Taxonomy of educational objectives (Complete Edition). , Longman, London, England. (2001).
  9. Centers for Disease Contol and Prevention. Appendix A - Primary Containment for Biohazards: Selection, Installation and Use of Biological Safety Cabinets. , (2014).
  10. Davis, J. M. Basic Cell Culture: A Practical Approach. , 2nd edn, Oxford University Press. Oxford, UK. (2002).
  11. Algra, A. M., Rothwell, P. M. Effects of regular aspirin on long-term cancer incidence and metastasis: a systematic comparison of evidence from observational studies versus randomised trials. Lancet Oncol. 13 (5), 518-527 (2012).
  12. Anand, P., Sundaram, C., Jhurani, S., Kunnumakkara, A. B., Aggarwal, B. B. Curcumin and cancer: an 'old-age' disease with an 'age-old' solution. Cancer Lett. 267 (1), 133-164 (2008).
  13. Ararat, E., Sahin, I., Altundag, K. Mechanisms behind the aspirin use and decreased breast cancer incidence. J BUON. 16 (1), 180(2011).
  14. Ararat, E., Sahin, I., Altundag, K. Aspirin intake may prevent metastasis in patients with triple-negative breast cancer. Med Oncol. 28 (4), 1308-1310 (2011).
  15. Blandino, G., et al. Metformin elicits anticancer effects through the sequential modulation of DICER and c-MYC. Nat Commun. 3, 865(2012).
  16. Kunnumakkara, A. B., Anand, P., Aggarwal, B. B. Curcumin inhibits proliferation, invasion, angiogenesis and metastasis of different cancers through interaction with multiple cell signaling proteins. Cancer Lett. 269 (2), 199-225 (2008).
  17. Burstein, D. E., Blumberg, P. M., Greene, L. A. Nerve growth factor-induced neuronal differentiation of PC12 pheochromocytoma cells: lack of inhibition by a tumor promoter. Brain Res. 247 (1), 115-119 (1982).
  18. Nazarali, S. A., Narod, S. A. Tamoxifen for women at high risk of breast cancer. Breast Cancer (Dove Med Press). 6, 29-36 (2014).
  19. Cui, J., et al. Cross-talk between HER2 and MED1 regulates tamoxifen resistance of human breast cancer cells). Cancer Res. 72 (21), 5625-5634 (2012).
  20. Komm, B. S., Mirkin, S. An overview of current and emerging SERMs. J Steroid Biochem Mol Biol. 143C, 207-222 (2014).
  21. Kaplan, R. M., Satterfield, J. M., Kington, R. S. Building a better physician--the case for the new MCAT. N Engl J Med. 366 (14), 1265-1268 (2012).

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