方法論記事

コカイン誘発性行動感作の評価とマウスにおける条件付け場所嗜好

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DOI：

10.3791/53107

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2016年2月18日

 ,  ,  , 
1Department of Psychiatry, Harvard Medical School, McLean Hospital

* These authors contributed equally

この記事について

サマリー

このプロトコルは、研究者が条件付けられた場所の好みと自発運動行動感作アッセイを使用して、依存症のこれらの側面をテストするように設計された実験を行うことを可能にすることを目的としています。

要約

薬物との報酬的な経験は、強い文脈上の関連性を生み出し、繰り返しの摂取を促すと考えられています。次に、乱用薬物への繰り返しの曝露は、脆弱な個人の脳機能に永続的な変化をもたらし、これらの持続的な変化は、依存症/依存症に特徴的な不適応薬物の探索および摂取行動を維持するのに役立つ可能性があります2。げっ歯類では、報酬経験と文脈上の関連性は、条件付けられた場所選好アッセイ(CPP)を使用して頻繁に測定され、以前に薬物とペアになった状況に対する選好が測定されます。一方、行動感作は、薬物誘発性行動の増加であり、繰り返しの曝露で徐々に進行します。感作行動は、数か月の薬物禁酒後に測定できることが多いため、初期曝露の用量と長さにもよりますが、薬物誘発性の持続的な可塑性の観察可能な相関関係と見なされます。研究者たちは、これらのアッセイが、依存症の側面を媒介する神経生物学的基質を決定するだけでなく、これらの行動を混乱させるさまざまな介入の可能性を評価するのに役立つことを発見しました。この原稿では、マウスのCPPおよびコカインに対する自発運動行動感作のための基本的で効果的なプロトコルについて説明しています。

概要

>jove_content<動物モデルを使用して薬物依存症を理解することを目的とした研究では、報酬/強化/動機付け、離脱と再発を含む治療の成功を妨げるさまざまな要素、および依存症におけるこれらの問題をさらに複雑にする一般的な持続性に対処するために、さまざまなアプローチを取る必要があります。乱用薬物を摂取することに伴うやりがいのある体験は、その後の使用を動機付けると考えられているため、薬物と文脈の関連性に焦点を当てた研究は、薬物の摂取と薬物探索に寄与する脳のメカニズムを理解するのに特に役立つ可能性があります。そのようなアッセイの1つであるConditioned Place Preferences(CPP)は、報酬感度のグループ差を比較するためのハイスループットな方法です。この課題の伝統的な解釈には、条件付け刺激(CS)が無条件刺激(UCS)と対になり、複数の対になった後、CSはUCSと同じ振る舞いを引き出すという古典的またはパブロフ的な条件付けが含まれる(ただし、39,40を参照)。理論的には、動物は内受容感覚状態(報酬または嫌悪)を文脈上の手がかりと関連付けることを学びます。次に、内受容状態の相対的な嫌悪的または食欲的な強度は、次に、文脈の手がかりに対する動物の好みを決定することによって評価されます。薬物と報酬の関連性を測定するための場所条件付けの使用は、少なくとも1957年にさかのぼり、Y字迷路のラットにモルヒネを使用した研究にさかのぼります3,4。過去数十年にわたり、この方法のバリエーションは、げっ歯類のさまざまな刺激に対する場所の好みと嫌悪感を研究するために広く使用されており、乱用薬物によって誘発される関連性の研究に特に有用であり続けています。薬物依存症の研究では、このアッセイは、多くの薬物の報酬特性と、薬物報酬に対するさまざまな脳システムやタンパク質の寄与を評価するために使用されてきました(レビューについては、5-7,44を参照)。薬物依存症に寄与する要因を評価する優れた方法、すなわち薬物の自己投与がありますが、CPPは報酬機能を測定するためのシンプルではるかにアクセスしやすいアプローチです。

現在の条件付けされた場所の好みと嫌悪感(CPA)のほとんどのプロトコルは、げっ歯類が出入り口または小さな接続室を介して2つの異なる部屋にアクセスできるようにするための装置を使用しています。2つのチャンバーの違いは、少なくとも壁の色や床の質感などの視覚的および触覚的な手がかりに基づいていることがよくありますが、嗅覚の手がかりなどの他の要素が含まれることもあります。「偏った」デザインは、通常、げっ歯類が一般的に白よりも黒い部屋を示すように、一方の部屋が他の部屋よりも既存の生来の好みを逆転させようとします。「偏りのない」デザインは、グループ内のいずれかのチャンバーへの割り当てをランダムに相殺することにより、最初は同等に魅力的だった2つのチャンバーのうちの1つを優先することを目的としています。「バランスの取れた」デザインは、動物が小さな好みを示すが、グループとして同じ部屋を好まない場合に使用されます。この後者のデザインの目標は、1)実験群間で有意差のない(最終的な)コカイン対チャンバーの事前テスト選好スコア、および2)事前テスト時のコカイン対チャンバーの選好性を無視できる程度にすること、つまり陽性または陰性のいずれかであることである8。バランスの取れたデザインは、壁の色(白の上に黒)とフローリング(バーの上にワイヤー)の矛盾するバイアスを利用し、異なる動物の黒と白の両方の側面の小さな好みがほぼ均等に分布する結果となる、説明されたチャンバーでの使用に最適です。バランス計算については、以下で詳しく説明します。

条件付け中、動物は薬物にさらされ、限られた時間、これら2つの環境のいずれかに素早く入れられます。曝露は、典型的には腹腔内(i.p.)または時には皮下(s.c.)注射を介して行われるが、静脈内(i.v.)自己投与9、および場所選好装置における頭蓋内注入38のパラダイムも開発されている。これらのペアリングは、反対側のチャンバーで実施される同じ長さの非薬物(ビヒクル)ペアリングによって補完され、薬物ペアリングと同じ日に行われることも、別々の日に行われることもあります。一般に、条件付け後に装置を探索することを許されると、動物は報酬を与える薬(つまり、人間と動物が自発的に自己投与する薬)を受け取った場所でより多くの時間を過ごすようになり、病気を誘発する薬(塩化リチウムなど)を与えられた場所を避けるようになります。いくつかの研究は、さまざまな乱用薬物に対する場所の好みの条件を最適化することに専念しています(レビューについては、7を参照)。マウスのコカイン投与量(i.p.)は一般に1〜20 mg / kgの範囲であり、5 mg / kg未満の用量は、1つのグループの高感度を解析するためによく使用されます。成体マウス10には、典型的には2つ以上の薬物のペアが必要であり、これらのペアの長さは重要な考慮事項である。非常に低用量のコカインは、即時かつ短時間のコンディショニングを必要としますが、これはおそらく、この方法が曝露の最も報酬の多い期間を捉えるためです。コンディショニング期間が遅れたり、非常に長いと、好みがなくなったり、嫌悪感を誘発することさえあります11,12。ここでは、成体マウスでコカインに対する条件付けされた場所の好みを得るための基本的な方法を紹介します。

CPPアッセイは、薬物と文脈の関連性の報酬関連の学習と記憶を評価するための理想的な方法ですが、行動感作は間違いなく実行が容易で、繰り返しの治療を通じて発生する変化の評価を可能にします。逆耐性とも呼ばれる、感作を受けている行動は、特定の乱用薬物、特に精神刺激薬に繰り返しさらされると徐々に強化され、交差感作はこれらの薬物のすべてではなく一部の間で発生することが知られています。特にげっ歯類におけるコカイン誘発性自発運動感作の最初の評価の1つは、1976年に発表されました13。多くの研究室では、感作性運動は薬物中止後も長く検出可能であり、曝露の元の長さ、位置、および用量にもよることが示されています14-17、そして現在のプロトコルは、マウス18のコカイン治療の7日間(30mg / kg)後10か月も感作を検出するために使用されています。このテストは、さまざまなサイズと形状の装置で、フォトビームまたはビデオトラッキング技術を使用して実施できるため、多くのラボで簡単に実行できます。自発運動感作の堅牢な性質、単純さ、持続性は、その評価を、薬物誘発性行動の長期にわたる変化の基本的なメカニズムを調べるための理想的な部分にします。

議論で展開されているように、自発運動感作アッセイを行う際の重要な考慮事項は、薬物が家庭またはテストケージの環境で投与されるかどうかです。薬物投与が自宅のケージの外で行われるときに発生する堅牢な感作を利用するために、このプロトコルはこの方法を採用しています。しかし、動物が薬物曝露前に新しい環境に十分に慣れていない場合、1日目に新規性誘発天井効果が発生し、感作の進行性を部分的または完全に覆い隠す可能性があることが観察されています。これは、新規性とともに薬物の相乗的な自発運動活性化効果を表している可能性が高く、そのような効果の根底にあるメカニズムは興味深いかもしれませんが、記載されている方法は新規性の役割を減らし、薬物の効果をより独立して測定できるように設計されています。この方法は、他の自発運動感作薬の評価に役立つことが期待されていますが、主にC57BL/6マウスのコカインでの有効性を評価しています。

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プロトコル

全ての実験手順は、マクリーン病院施設内動物管理使用委員会によって承認されています。注：以下のプロトコルは、単一のCPPへのアプローチと運動感を説明し、多くの詳細については、他の成功したプロトコル （例えば、軽対など暗い相試験、連続した対間欠投与、）とは異なります。初心者は、手元の実験の質問（複数可）に基づいて、文献からの変化を適応させる、これらのプロトコルで始まる、または単にガイドとしてそれらを使用することもできます。自動測定方法が記載されています。しかしながら、各アッセイ（ すなわち 、ビデオ録画、ハンドスコア）のために非自動化手段を使用することが可能です。

1.条件付け場所嗜好

  1. 機器やルームセットアップ：
    1. 試験前に、少なくとも3〜5日間、毎日1-3分間実験用マウスを処理します。
      注：-取り扱うことはありませんマウスは、チャンバSTREからの除去を見つけることができますssful、妨害またはコンディショニングを変更することができます。
    2. 好ましくは、自動データ収集18 photobeamsを装備した4以上の三室のCPP装置を得ます。確保各チャンバを高めることができるドアを介して小さく、中性のチャンバに接続する2つの大きく、visually-及び触覚的に異なるチャンバを有すること/アクセスを制御するために低下しました。各チャンバ上の蓋は、マウスの挿入/除去のために開く必要と小さな、個別に制御可能（調光可能）ライト（室につき1）を搭載したこと。
      注：CPPチャンバの設計は異なり、商業的に購入するか、または研究者によって構成することができます。 「バランスのとれた「デザインのために、推奨方式は、白い壁と黒い壁、バーの床とワイヤグリッドフローリングやその他とのうち大きい方のチャンバです。中間室は、灰色の壁と灰色固体プレキシガラスの床を持っている必要があります。説明の目的のために、これらのチャンバは、「白」、「黒」と「中と呼ぶことにします。 "ふたは透明プレキシガラスでなければなりません。代替コンパートメント構成（1または2室）も可能であり、（説明を参照）別の場所で説明。
    3. セットアップそれがテスト中であるように部屋：オフにするか、または最も暗い設定に頭上の照明を設定し、ドアを閉めます。各チャンバ内の露出計を使用して、中央の室が時間を費やしてからマウスを阻止するために、黒と白のチャンバー（6-10ルクス）よりも（15-20ルクス）少し明るくなるように蓋ライトを設定します。
      注：途中で費やした平均時間は、黒または白のチャンバに比べて同程度以上であれば、さらにステップ1.1.3で説明した照明のコントラストを高めます。また、中央のためにあまり魅力的な床材を使用しています。 （ 例えば 、均等に6×3.5×¼ "プレキシガラスに離間〜220直径0.5cmの穴、）が、このチャンバは嫌悪することを避ける。パイロットその中間の時間の減少を確実にする任意の変更は、総探査（交差）が減少したことによるものではありません。
    4. P以下のパラメータに従って自動データ収集（「手順、「 図1A）rogram、または手動でデータを収集します。空調室のいずれかにおける第1のビームブレイク時に開始する試験を設定します。長さは20分であることを「テスト」のセッションを設定し、各チャンバーで費やされた時間とビーム休憩を追跡します。各チャンバ内のビームブレークを測定するために（必要に応じて）30分長くなるように「コンディショニング」のセッションを設定します。試験中に照明するために、すべての室内灯を設定します。
    5. 手元の実験に必要なコカイン液のフルボリュームを準備します。 0.1ミリリットル/ 10g体重の注射容量で最終濃度を基づか、0.9％のNaCl（食塩水）でコカインのHClを溶解し（5ミリグラム/ kgの用量のために、 例えば 、溶液濃度は、0.5 mg / mlです）。 RTで30-45秒、滅菌フィルター（0.2μmのシリンジフィルター）とストアの渦混合物。
  2. テスト：
    注：CPPのための一般的なタイムラインがPRE-TEST、コンディショニングされ、その後、POST-TEST。予備試験は、1-3日間コンディショニングから分離することができます。しかし、コンディショニングとポストテストの日は連続した日（ 図2A）に場所を取る必要があります。このタイミングは、同じ実験内のすべてのコホートに対して同じに保つ必要があります。
    1. 日全体で各動物の同じ装置を用いて、動物の光フェーズ中のテスト。
    2. 各試験日（ すなわち 、テスト、コンディショニング日）、行動の控え室にマウスを移動し、それらを裁判前に1〜1.5時間のために彼らのホームケージに静置することができます。裁判が始まるとマウスは、最小限の中断で、装置に彼らのケージから迅速に移動することができる場所を選択します。テスト（ 例えば 、機器のファン）に関連付けられている任意のノイズが存在するように、すべての機器の電源をオンにします。
    3. 徹底的にSAMを使用（前各マウスにし、後に軽度の、アルコール、グリコールエーテル系やアンモニア系消毒ワイプで各機器（内壁、床、トレイを）きれいに実験を通してクリーナーのEタイプ）。無視フローリングの下面ないでください。
    4. 毎日の初めにその部屋の照明が（オフまたは淡色表示）適切に設定されているか確認してください。
    5. それが「テスト」または「コンディショニング」の日であるかどうかに応じて、以下に進みます。
      1. 試用日数1及び6（ すなわち 、前後のテスト）で、開いた位置（ 図2B）にインター室のドアを配置します。
      2. 該当する場合は、「テスト」コンピュータプログラムをロードし、動物のID（ 図1A）を入力し 、その後、（ 図1B）startコマンドを発行します。
      3. ゆっくりと後ろの壁に直面し、その割り当てられた装置の中間室に各マウスを低下させ、そっとふたを閉めます。全てのチャンバがロードされると、試験室を出て、ノイズを最小限に抑えます。
      4. すべてのマウスのための試験が閉じるまで、各装置内のマウスを残す/（ 図1C）終了しました。エクスポート試験データ。
      6. <李>は直前または試験前に続いて、動物の重量を量ります。コンディショニング中に線量計算のためにこれらの重みを使用してください。
    6. （ すなわち 、「黒マイナス白"＆"白マイナス黒」他からこれらのそれぞれに費やされた時間を減算することにより、黒と白のチャンバのための各マウスの試験前「好み」を算出、コンディショニング試験のために準備するために、参照してください。 図3、列9＆10）。
    7. 強い初期の好みにマウスが均衡を困難にするので、嗜好度の許容限度（ 例えば、<総試行時間の33％）を確立し、計算から、それを超えたマウスを除外します。スレがそうであるときにテストが完了した後に（これはオフターゲットの外科的操作に、 例えば）を含めることを最大化するためにリベラル限界（<総試行時間の66％）を使用します。
      注：限界を超えるマウスがまだ平衡それらの試験前の好みを維持しようとすると、試験することができます。その後、トン必要に応じてHESEマウスは、試験前のスコアのバランスをとるために、分析から除外することができます。極端なプレテストバイアス（ すなわち 、> 800秒）が不釣り合いに一つのグループに影響を与える場合は、コンディショニング環境を変更すること、および/ ​​または他のアッセイを使用することを検討してください。
    8. 一方念頭に置いて、次の優先順位で各グループ内で対応する試験前の嗜好スコアを合計し、各マウスのための薬物ペアリング室として黒または白の室を​​選択します。
      注：各コホート内だけでなく、以前のコホート全体でグループ間の得点のバランスをとるように注意してください。
      1. 可能な限り同等のものとして、すべてのグループの合計を作成します。
      2. できるだけゼロ（ すなわち 、いくつかのマウスおよび他のための非優先側のための好ましい側を選択）に近い金額を確認します。ほぼゼロの和は、任意のグループのために不可能である場合には、密接にわずかに負のグループはオーバー合計好む、制限するグループのための最良の入手スコアを一致させるために他のすべてを再調整正。
      3. 限り実現可能な、白とさえ、各グループ内の薬剤のペアのための非優先室対好ま対黒の割り当てを維持します。
      4. それは、上記の目標を達成することは必ずしも可能ではないように、それ以降のコホートに対向バランスの考慮をすることによって、任意のずれを補正します。しかし、乱暴に異なる平均試験前の環境でコホートを生成しないようにしてください。
    9. コンディショニング日2-5で、閉鎖位置（ 図2C）にインター室のドアを配置します。
    10. ステップ1.1.5で説明し、試験前に測定した体重に基づいとして、コカイン（日間2＆4）または生理食塩水（日3＆5）溶液を用いて、個々の注射器を準備します。
      注：投与量は実験的な期待、冒頭で述べた検討事項、および潜在的な床と天井効果に関連して選択されるべきです。これは、少なくとも2つの異なる用量を使用して独立した実験を実施するのが最も効果的です。
    11. ロード "C該当する場合onditioning「コンピュータプログラムおよび動物のID（ 図1A）を入力し 、その後、（ 図1B）startコマンドを発行します。
    12. 首筋とすぐにそっと蓋を閉じ、背面壁に直面して、割り当てられた装置の適切な黒または白室にそれらを下げ、各マウス（IP）を注入します。全てのチャンバがロードされると、試験室を出て、ノイズを最小限に抑えます。
    13. 実現可能な正確に30分近くに彼らのチャンバーからマウスを取り外します（最初のマウス、 すなわち、他のマウスはまだコンディショニングされながら、チャンバから除去されます）。ノイズを導入することなく、できるだけ静か動物を削除します。
  3. 統計分析：
    1. 分析の方法を選択します。いずれかの時点から事後テスト中に生理食塩水一対のサイドに費やさ減算時間は、ポストテスト（コカイン - 生理食塩水、秒）の間にコカイン一対のサイドに費やさまたはポストテスト薬剤対になっ室で過ごした時間を使用マイナスプレテスト時間は、薬物対になった室に費やしました。
      注：最初の方法を使用している場合は、平均時間のもプロット線グラフは、各グループの事前・事後テスト中にミドル、生理食塩水および薬物対になっ室で過ごしました。試験前と比較して、事後テストは、薬剤一対のサイドで時間の増加を示し、生理食塩水、一対のサイド（説明のための図6、底面、および考察を参照）に費やされる時間を減少させなければなりません。
    2. 比較されている基の性質と数に応じて、上記に提示された減算スコアのいずれかを分析するために、可能性の事後分析と、必要に応じて、t検定、1または2ウェイANOVAを使用しています。
      注：コカインの嗜好度は可変である傾向があり、さらに、陰性であることができ（ すなわち 、薬物一対のサイドに嫌悪感を示しています）。この結果はGR間の差異を決定する通常の、おそらく重要であるため嫌悪感を示したマウスは、（彼らは統計的な外れ値である場合を除き）は削除すべきではありませんoups。治療の効果の大きさに応じて、グループごとに12〜30匹の動物のサンプルサイズを必要とすることを期待しています。

2.歩行感

  1. 機器やルームセットアップ
    1. ×8 4（X X Y）フォトビーム・アレイ（外形寸法11.5 "×20"）を取得します。配列（ 図4A）を収容するために黒色プレキシグラス製のオープン突破室（内寸22 1/6 "×13¾"×9 3/8 "）を構築します。
    2. 赤色光（ceiling-または壁掛け式）が試験中に使用することができるように試験室を準備します。
    3. 毎日の習慣性および射出試験のための独立したプログラムセッションを準備します。
      1. 60-120分（ 図5B）の間になるように30〜60分間、注入試験の間になるように馴化トライアルを設定します。それぞれについて、推奨される長さは60分です。同じ実験内の複数のコホート全体で一貫性のある裁判長にしてください。
      2. RECOを開始するために試験を設定スタート信号が（ 図5B）が開始された後に発生する第1のビームブレイク時にrding。可能であればボックスは、（ない一斉に）個別に起動することができるように、注射の裁判については、スタート信号を設定します。
      3. ユーザー定義の「ビン」は、好ましくは5分毎（ 図5B）に記録されるように設定ビームブレーク。
    4. 手元の実験に必要なコカイン液のフルボリュームを準備します。 0.1ミリリットル/ 10g体重の注射容量で最終濃度を基づか、0.9％のNaCl（食塩水）でコカインのHClを溶解し（5ミリグラム/ kgの用量のために、 例えば 、溶液濃度は、0.5 mg / mlです）。 RTで30-45秒、滅菌フィルター（0.2μmのシリンジフィルター）とストアの渦混合物。
  2. 検査
    注：テストの初期段階は、10-11日間連続して実行されます。馴化（注射フリー）と注射：マウスは、2毎日の試験を受けます。 a〜fの最初の3のために生理食塩水を投与し同じ用量（ 例えば 、15ミリグラム/ kg /日）を使用して、次の7のための私達の日（生理食塩水馴化の重要性についての議論を参照）、およびコカイン。
    1. 毎日、1時間に30分間の行動控室に彼らのホームケージでマウスを順応させます。
    2. 、新鮮な寝具（ 例えば 、松チップ）の非常に薄い層できれいに標準のマウスサイズの透明なアクリル住宅ケージを準備していない無名のphotobeamsするように、該当する場合（ 図4C＆D）。
    3. 5ビームがその長さに沿って等間隔に配置されるように、一方の端部の近くにフォトビームアレイのY軸に対するプレイスケージ、。 X軸ビームは、この試験（ 図4CおよびD）で使用されていません。
    4. ランダムな順序、首筋に、彼らのホームケージからマウスを取り出し、それらの重量を量ります。 （サポート付き）、それらの尾の基部によって計量ボートから各マウスを削除し、その割り当てられた運動ケージに直接配置します。標準フィルタトップふた付き各ケージをカバーしています。
    5. ワット個々の注射器を準備します当日の体重に基づいて、ステップ2.1.7に記載したように、i番目の生理食塩水またはコカイン溶液。 15または20ミリグラム/ kgの用量で始まり、より高いまたはより低い用量を使用して第二の実験を考える（関連要因のための議論を参照してください）​​。
    6. 馴化試験はすべてのケージのために終了したら、注入プログラムをロードします。
    7. 一度に一つ、彼らのテストケージ、首筋からマウスを削除し、その注射（IP）を与えます。そのテストケージにマウスを返す前に、すぐにそのケージ（ 図5C、下）の開始信号を開始します。
    8. すべての注入試験が終了した後、ホームケージとその住宅の部屋にマウスを返します。
    9. オリジナル、半用量と同じ用量、ダブル用量、その後、生理食塩水、7日に同じ用量のチャレンジの前と3 7に可能：希望する場合は、マウスは次のような、離脱期間および薬物一連の課題を経験することができます追加の各課題の前に日。課題の選択、maintaiどのような実験内コホート全体でnは同様の離脱期間。
      注：元の線量が高い（ 例えば 、30ミリグラム/キログラム以上）であれば、二重投与量は低用量でスキップするか、交換する必要があります。生理食塩水の課題は、単独でコカインペアの環境によって任意のコンディショニング運動の活性化を明らかにし、その過程で、コカイン依存で感作された運動の量は、（説明を参照）。
  3. 統計分析
    1. 分析のために使用される各試行の部分（複数可）を選択します。げっ歯類におけるほとんどのコカイン誘発運動は薬物注射後の最初の〜15-30分以内に起こります。関係する変数に応じて、複数の時間ウィンドウの累積歩行を分析検討する（ 例えば 、最初の15、30、60および/ ​​または120分）や裁判の独立したセグメントに焦点を当てています。
    2. 選択した時間枠を使用して、別々に慣れ、注入試験のために日によって各動物のビーム休憩を合計した後、各グループの合計verage。プロットを意味し、すべて日間の線グラフの平均（SEM）の標準誤差。治療はマウスは、初期および/または後期毎日の裁判における薬物への対応方法を変更することができるようにも毎日の裁判の過程で5分間のビンによって平均グループビーム休憩をプロットします。
      注：馴化および射出試験のために毎日の活動の平均値をプロットする（ 例えば 、最初の15分）、それが人為的にその運動が生理食塩水の注入によって減衰されるに見えますが、その活動は（ほとんどの場合）を持っている覚えは毎日慣れ年末までにこのレベルまで減少しました。
    3. 別途、必要に応じて、繰り返し測定（RM）ANOVAを日/時間の被験者内因子を有し、デザイン内の任意の被験者間要因を含むを使用して、連続した生理食塩水及び薬物治療日数分析します。コカイン（急性曝露）の1日目のグループの違い、と課題のための多変量分散分析を調査するために、t検定または一方向ANOVAを使用してください。適切な場合、significancに従ってください事後テストや単変量ANOVAを持つ電子。

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結果

CPPアッセイの代表的な結果は、約生後9週間の野生型C57BL / 6Nマウスを使用して、 図6に示されています。研究デザインは、試験（前後）の被験者内変数と治療（生理食塩水とコカイン5および10mg / kg）を被​​験者間変数で、2×3混合要因でした。 RM ANOVAはた（p <0.01、F 1,20 = 9.86）試験の両方について観察された有意な主効果の代わりに解釈されたテストと治療（F 2,20 = 3.68、P <0.05）との間に有意な相互作用を示したとトリートメント（F 1,20 = 4.37、P <0.05）。事後比較はグループのいずれも事前テスト中に互いに異なっていないことを示しました。テスト後、5ミリグラム/ kgおよび10 mgの/ kgのは、互いに有意差はなかったです。 ; 10mg / kgの、P＆5ミリグラム/キログラム、P <0.5：ただし、両方のグループは、生理食塩水のみの対照群（Tukeyのよりコカインペアリング室のための有意に高い優先度を示しました＃60;...

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ディスカッション

このプロトコルは、薬物誘発行動可塑性の側面を評価するために、平均ラボで使用できるこれらの各々は条件付け場所嗜好及び運動増感するための方法を実証します。ほとんどの行動試験と同様に、基本的なプロトコル以外の追加値する考慮事項があります。まず、これらの技術の各々は、2つのフェーズ、誘導および発現を有すると考えられます。 「誘導」は、行動のためのCPPの開発をカバーし、それはコンディショニングの間に発生し、感作のためには、（一般的に連続した）薬物曝露の最初の期間です。感作のために、それが撤退した後、または単に最後の連続暴露のいずれかとして与えられた薬物課題として定義することができながら、CPPのための「発現」は、ポストテストです。

より自分の潜在的な影響を解析するために、他の対これらの相のいずれかに操作を制限することを検討する価値があります。時間的に限られた有効性を有するウイルス（例えば 、HSV）または薬物の同時投与/前処理（ 例えば 、アゴニスト/アンタゴニスト）は、このような努力にも有用です。このアプローチをとる場合には、特定の相がより良いウイルス...

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開示事項

著者は、彼らが競合する金融利害関係を持たないことを宣言します。

謝辞

著者らは、行動試験のヘルプのための行動の設計上の考慮事項とローレンPECAに前の入力のためのカレン・ディーツとシャリバーンバウムに感謝します。著者らはまた、シモンズ財団（CWCにシモンズ財団自閉症研究イニシアティブグラント）、NIDA（DA008277、DA027664、およびDA030590 CWC、RDPへのLNSにF32DA027265とF32DA036319へ）、FRAXA研究財団とエレノアとマイルの寛大な支援を認めますショアフェローシップ・プログラム（LNSへのフェローシップ・サポート）、ジョンKanebフェローシップ（MTへのフェローシップをサポート）。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
Cocaine Hydrochloride USPMallinckrodt Pharmaceuticals0406-1520研究目的での購入および使用(スケジュールII規制物質)には、州法および連邦法に基づくコンプライアンスとライセンスが必要です。 
条件付けされた場所の好み, MouseMed-Associates Inc.MED-CPP-MS &MED-CPP-3013私たちの研究室ではこれらのボックスを使用していますが、多くの代替ボックスが利用可能で許容範囲です。
PAS-Home ケージ活動モニタリング フォトビームアレイSan Diego Instruments2325-0223 & 7500-0221私たちの研究室では、テキストで説明されているように、これらのアレイをカスタムビルドチャンバー内に収容しています。 利用可能な代替手段があります。
使い捨てSani-Cloth分解ワイプPDI13872
の手動ドアとライトを備えた3コンパートメント装置

参考文献

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