パラレル・セグメントフローカラムをチューニングし、多重化された検出のイネーブル化

Summary

ここでは、マルチプレックス検出を可能にするための並列セグメントフロークロマトグラフィーカラムの操作とチューニングのためのプロトコルを提示します。

Abstract

アクティブフローテクノロジー(AFT)は、フローの不均一性を克服し、効率と感度の面で分離性能を向上させ、多重検出を可能にするために設計された新しい形のカラムテクノロジーです。この形式のAFTは、平行セグメントフロー(PSF)カラムを使用します。PSFカラムアウトレットエンドフィッティングは、2つまたは4つのポートで構成されており、最大4つの検出器を接続するために多重化できます。PSFカラムは、マルチプレックス検出用のプラットフォームだけでなく、破壊検出器と非破壊検出器の両方を同時に組み合わせることができ、デッドボリュームチューブを追加する必要はありません。各ポートを通る流量は、特定の検出器の要件に合わせて圧力管理を通じて調整することもできます。PSFカラムを使用してマルチプレックス検出を実現するためには、最適な分離性能と結果の品質を確保するために制御できるいくつかのパラメーターがあります。つまり、各ポートのチューブ寸法、各タイプの検出器のポートの選択、および流量調整です。このプロトコルは、多重化検出モードで機能する PSF 列の使用方法とチューニング方法を示すことを目的としています。

Introduction

アクティブ・フロー・テクノロジーの列

アクティブフロー技術（AFT）クロマトグラフィーカラムは、最近の流れ異質^1-6に関連した分離において非効率性を克服するために開発され、また、多重化された検出を可能にします。この特定の通信我々の詳細に並列の運用プロセスは、多重化された検出と流れ（PSF）の列をセグメント化。 PSF列の主要な機能の利点は次のとおりです：（1）カラムベッドの径方向中心領域からの流れは、（2）検出によって処理されなければならない移動相の体積流量の周辺や壁の領域から分離されていますソースが低減され、そして（3）検出ソースは、各検出処理を横切っ検出遅延を点滴、またはその後ポストカラム流ストリーム^7,8の分割を必要とすることなく、試料情報を拡張するために多重化することができます。 Aを可能PSF列の設計において重要な特徴多重化検出のdvantageは新規アウトレットフィッティングとフリット集合体である。 図1は、従来のカラムに比べAFT列の写真です。これは、セグメント化されたパラレルフローカラムを使用して得られた分割処理は、ポストカラム流ストリーム分割と同じではないことを理解することが重要です。ポストカラム流量で流れは、尾の先端にリーディングエッジからサ ​​ンプル全体バンドを分割均等に（ すなわち、軸方向）にサンプリングされ、それによっ....

Protocol

注：このプロトコルは、多重化された検出のための複数の検出器に結合されたHPLCシステムでPSFの列を使用する方法に関する説明が記載されています。プロトコルは、読者がクロマトグラフィー、様々なHPLC検出方法における基本的な知識と経験を持っていると仮定すると書かれています。

注意：（ すなわち、メタノールのためのMSDS）は、使用する前に、すべての材料および試薬の材料安全データシート（MSDS）をご参照ください。溶剤および高速液体クロマトグラフィー（HPLC）を溶離液を取り扱うときは、すべての適切な安全対策を使用することを確認してください。 HPLC、分析天びんと検出器計測器の技術的管理の適切な使用を確保し、個人用保護具（安全眼鏡、手袋、白衣、完全長ズボン、およびクローズドつま先の靴）を使用することを保証します。

HPLC機器の1.セットアップ

1. LIN用の超純水（例えば、100％のミリQ水）を用いたHPLC機器を準備します移動相としてのラインBのE Aと、100％メタノールとメーカーの要件ごとにポンプをパージします。それはここでそのまま使用する検出器の一つは、MSである場合、移動相AとBの両方に0.1％のギ酸を添加
2. 図2に示すように、HPLC楽器部品および検出器を設定する。検出器と列の間のデッドボリュームを最小にす....

Results

多重化されたHPLC分析は、PSFモード（ 図1）でAFTカラムを用いて行うと、図2に示すように設定した。このタイプのセットアップは、コーヒーサンプルは合計でUV-Visの^、DPPH•およびMSを用いて同時に分析することが許可されイオンカウント（TIC）モード。クロマトグラムを同時に記録したことから、 図3に示すように、保持時間のアラインメントに基づいてTIC回答- ^DPPH•に応えコーヒーサンプルの化合物は、簡単に、UV-VisのとMSまで一致させることができました。肯定応答は、MS-TICの検出器から見た場合には、ピークの分子質量を記録した。 表1に ^{DPPH•ピーク}の保持時間、及びUV可視及び/またはMSにこのようなピークの応答したがって、分子量を提供検出器。 AFのために許可された異なる検出プロセス間のマッチングピークを容易にコー​​ヒーなどの複雑なサンプルのスクリーニングおよび特徴付けのAST、より効率的な形式。

Discussion

本研究では、並列セグメント化されたフロー（PSF）のカラムを用いて多重化検出を備えたHPLCを使用してコーヒーの特性とプロファイリングを伴います。 PSFカラムを用いて多重化されたHPLCは、従来の多検出プロセスを使用してかかる時間の画分内の分子固有情報のより大きな程度を得ながら、サンプルのデータの複雑さを低減することにより、キーの化学物質の特徴付けおよび同定を可能にします。 PSFの列には、多重化検出のためのプラットフォームを可能にするだけでなく、追加のデッドボリュームとチューブなしの両方の破壊的および非破壊検出器の組み合わせ。 ^DPPH•、紫外-可視およびMS（TIC）は、エスプレッソコーヒーの分析のために多重化されました。

4ポートPSFカラムは、3つの異なる検出器を用いたコーヒーの多重化分析に使用しました。 PSFのカラム出口の中央口はMS検出器およびTHREの2つに接続されましたE周辺ポートは^{DPPH•検出システム}またはUV可視検出器のいずれかに接続されていました。第三の利用可能なペリフェラルポートが使用されなかったため、カラ.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
HPLC装置			マルチプレックス検出のための選択可能な複数の検出器。選択した検出器には、追加の計装、例:、ポンプが必要になる場合があります。
パラレルセグメントフローHPLCカラム	サーモフィッシャーサイエンティフィック	定義	まもなく商品化される
メタノール	任意のブランド		HPLCグレード
PEEKチューブ	任意のブランド		さまざまな長さと内径
カラムストッパー	任意のブランド		未使用の周辺機器ポートをブロックします。
PEEKチューブカッター	任意のブランド
分析スケールバランス	任意のブランド
ストップウォッチ	任意のブランド
溶離液収集容器	任意のブランドの		1-2mlサンプルバイアルを溶離液収集容器として使用できます