方法論記事

バイオメディカル応用のための適切なカドミウムフリーのInP / ZnSの量子ドットの合成

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10.3791/53684

2016年2月6日

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サマリー

このプロトコルでは、CdフリーのInP/ZnS量子ドット(QD)の合成が詳細に説明されています。InPベースの量子ドットは、ナノ粒子の分解によって放出される可能性のあるCd2+イオンの毒性により、人気を集めています。合成後、QDは両親媒性ポリマーを使用して水に可溶化され、生物医学用途で使用されます。

要約

蛍光ナノ結晶、特に量子ドットは、多くの生物医学的応用にとって有用なツールとなっています。生体システムへの利用を成功させるためには、量子ドットは蛍光性が高く、サイズが小さく、単分散である必要があります。一般的に使用されるカドミウムベースの量子ドットはこれらの特性を備えていますが、ナノ粒子の分解によってCd2+イオンが放出される可能性があるため、潜在的に毒性があります。インジウムベースの量子ドット、特にInP/ZnSは、蛍光特性とサイズが比較的類似していることから、カドミウムベースの量子ドットに代わる有力な選択肢として最近研究されています。ここで紹介する合成は、効果的なナノ粒子成長のための標準的なホットインジェクション技術を使用しています。しかし、ナノ粒子のサイズ、発光波長、発光強度などの特性は、反応条件のわずかな変化によって大きく変化することがあります。したがって、温度、反応時間、前駆体濃度などの反応条件を正確に維持して、再現性のある生成物を生成する必要があります。量子ドットは本質的に水溶液に溶けないため、水に溶解するためには表面修飾も行う必要があります。このプロトコルでは、両親媒性ポリマーを使用して、量子ドット表面上の疎水性配位子とバルク溶媒水分子の両方と相互作用します。ここでは、生物医学アプリケーションでの使用に適した高蛍光InP/ZnS量子ドットの合成に関する詳細なプロトコールを提供します。

概要

量子ドット(QD)は、光1を照射すると蛍光特性を示すナノ結晶を半導体されています。それらの小さな多くのより大きな生体分子に類似しているサイズ(2-5 nm)で、および生体機能化の容易さに、QDは、生物医学的応用のための非常に魅力的なツールです。それらは、生物学的標識での使用、単一分子の生細胞イメージング、薬物送達、 生体内イメージング、病原体の検出、および細胞追跡 、多くの他の用途の中で2-8を発見しました

CDベースのQDは、最も一般的には、それらの強い蛍光と狭い発光ピーク幅9の生物医学的用途に使用されてきました。しかし、懸念が原因で、ナノ粒子の分解によって放出されてもよいのCd 2+イオン 10の潜在的な毒性のために提起されています。彼らは多くの蛍光特性を維持するため、近年、InP系量子ドットは、CDベースのQDの代替として検討されていますCD-ROMベースのQDの、より生体適合性の11とすることができます。 CDベースの量子ドットのみが48時間11の後に、10ピコモルという低い濃度で、in vitroアッセイにおけるInP系量子ドットよりも有意に毒性であることが見出されています。

量子ドットの蛍光発光色は、サイズ調整可能な1です。すなわち、QDのサイズが大きくなるように、蛍光発光は、赤方偏移です。 QD製品のサイズおよびサイズ分散度は、反応12中の温度、反応時間、又は前駆体濃度の条件を変えることによって変更することができます。 InP量子ドットの発光ピークは、典型的には、より広いとCDベースのQD未満激しいが、InPの量子ドットは、スペクトルの重複を避けるために設計された色の多種多様てなされたものであり、ほとんどの生物医学的ア ​​プリケーション12のために十分に強いであることができます。このプロトコルで詳述合成を600nmを中心とする赤色発光ピークを有する量子ドットを生成します。

いくつかのステップは、AF取られますQDコアのター合成は、量子ドットの光学的整合性を維持し、生物学的用途に適合させるために。 QDコアの表面が急冷引き起こす可能性があり、酸化や表面欠陥から保護されなければなりません。従って、ZnSシェルは、のInP / ZnS(コア/シェル)13を量子ドットを製造するためにコアの上にコーティングされています。このコーティングは、QD物のフォトルミネッセンスを保護することが示されています。 InPのQD合成中の亜鉛イオンの存在は、表面欠陥、ならびに減少サイズ分布12を制限することが示されています。でも反応媒体中のZn 2+の存在と、InZnPの合成は、12非常に低いです。コーティングした後、得られたInP / ZnSの量子ドットは、トリオクチルホスフィンオキシド(TOPO)またはオレイルアミン12,14のような疎水性リガンドでコーティングされています。両親媒性ポリマーは、水溶性15を付与するためにQD表面上の疎水性リガンドと同様にバルク水分子と相互作用することができます。炭と両親媒性ポリマーキシレート化学基は、さらに量子ドットを官能化するために「化学ハンドル」として使用することができます。

このプロトコルは、非常に強い蛍光発光と比較的小さなサイズ-分散と水溶性のInP / ZnSの量子ドットの合成と機能化を詳しく説明します。これらのQDは、潜在的に一般的に使用されたCdSe / ZnSの量子ドットよりも毒性が低いです。ここで、InPの/ ZnSの量子ドットの合成は、生物医学的応用のためのCD-ROMベースのQDへの実用的な代替手段を提供します。

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プロトコル

インジウムリン/硫化亜鉛(のInP / ZnSの)量子ドットの1の合成

  1. インジウムリン(InP)量子ドットコアの合成
    1. 12インチのコンデンサーで100mlの丸底、三首フラスコを取り付けます。 30 mlのオレイルアミン(OLA)、0.398グラムのインジウム(III)クロリド(のInCl 3)、0.245グラムの亜鉛(II)クロリド(のZnCl 2)を添加し、1時間真空を用いて、室温で真空排気しながら撹拌します。解決策は、白色の沈殿物と無色に表示されます。
    2. 熱電対、加熱マントルを使用し、比例積分微分(PID)温度コントローラ、120℃に溶液の温度を上昇させます。コアの成長に影響を与える可能性がある低沸点不純物を除去するために20分間真空下で溶液を排出。
      注:加熱マントルを使用して、砂浴および温度計を使用することが可能であり、PIDは、反応生成物の均一性​​や再現性を増加させる一方。
    3. 不活性ガス例えば、下、N 2)は 、溶液を還流し、15分間220℃まで温度を上昇させます。 InCl 3とのZnCl 2は完全に淡黄色溶液が得られ、溶解します。温度を10分間安定化させます。
    4. 使い捨て、3ミリリットルプラスチックシリンジおよび4インチ、窒素ガスで22 Gの針をパージします。注射器を使用して、迅速のInCl 3溶液を0.5ミリリットルトリス(ジメチルアミノ)ホスフィン(TDMAP)を提供します。溶液温度がわずかに減少し、220℃に戻ります。 、透明、不透明に淡黄色、黒からの溶液に変化します。
    5. 温度が200℃未満に低下するまで、9.5分後、加熱マントルから反応フラスコを削除します。 InPコアの完全性を保護するために、ステップ1.2.1でのZnSコーティングに直接進みます。
  2. 硫化亜鉛(ZnSの)量子ドットシェルの合成
    1. 加熱マントルにステップ1.1.5から反応フラスコを置き、トンを安定させます200℃でemperature。ゆっくりのInP量子ドットを含む溶液に15秒間にわたって3.58グラムのドデカンチオール(DDT)を追加します。溶液を1時間反応させます。
      注:ZnSシェルの厚さは、ステップ1.2.4で追加ステアリン酸亜鉛の量を増加または減少させることによって変化させることができます。ステップ1.1.1および1.2.1でのZnCl 2またはドデカンチオールの量を変更すると大幅に反応速度を変更することにより、量子ドットの品質に影響を与えることができます。
      1. その後、加熱マントルから反応フラスコを取り外し、溶液を約60℃に冷却します。
    2. InP / ZnSの溶液を〜60℃に達すると、10mLのヘキサンを追加し、50mlのポリプロピレン遠心管におよそ45 mlに全体溶液を移します。未反応の固体前駆体を除去するために、サンプル(10分間3,000×gで)を遠心します。
    3. 慎重に(200ミリリットルのアセトンを追加し、250ミリリットルのポリプロピレン遠心分離ボトルに上清を移し、遠心分離ソリューション3000のxInP / ZnSの量子ドットを沈殿させ、10分間グラム)。必要なローター/アクセサリーと遠心機が利用できない場合、このボリュームは、また、遠心分離のための4つの50ミリリットルチューブに均等に分割することができます。上清を除去し、アセトンを除去するために窒素ガスで十分にQDペレットを乾燥させます。
    4. 0.474グラムのステアリン酸亜鉛、および攪拌を含む超音波処理、50ミリリットルへの転送丸底、三首フラスコを使用して20ミリリットルOLAにおける量子ドットを再懸濁します。 RTで20分間真空下で溶液を避難させます。
    5. 窒素ガス下、180℃まで温度を上昇させ、反応を3時間進行させます。この反応中に発生する反応液に顕著な視覚的な変化は存在しないが、ステアリン酸亜鉛を添加すると、このようにして量子ドット12の表面の不動態化を改善することによりQYを増加、ZnSシェル厚さを増加させる。反応が完了したら、加熱マントルからフラスコを取り外しその溶液を約60℃に冷却します。
    6. InP / ZnSのsolutiワンス流域に〜60°Cは、20ミリリットルのヘキサンを追加し、50ミリリットルのポリプロピレン遠心管に移します。未反応のステアリン酸亜鉛を除去するために、サンプル(10分間3,000×gで)を遠心します。
    7. 慎重に、250ミリリットルのポリプロピレン遠心分離ボトルに上清を移すのInP / ZnSの量子ドットを沈殿させるために200ミリリットルのアセトン、及び遠心分離液(10分間3,000×gで)を追加します。注意深く上清をデカントし、アセトンを除去するために窒素ガスで完全に乾燥。
    8. 30ミリリットルのヘキサン中のInP / ZnSのQDペレットを溶解します。完全な分散を確実にするために、簡単に解決策をボルテックスし、超音波処理。
    9. 繰り返し精製は、過剰な有機配位子の完全除去を確実にするために1.2.6-1.2.8さらに2回繰り返します。ステップ1.2での両親媒性ポリマーとQDとの間の相互作用は、過剰なリガンドの存在下で損なわれる可能性があります。
    10. 謝によって詳述。16の計算では、紫外可視分光法を用いて合成したInP / ZnSの量子ドットのサイズや濃度を決定。
      注:この分析のための重要な分光特性は、吸収ピークのショルダーです。この肩部の最大の波長と吸光度の値は、それぞれ、大きさ及び量子ドットの濃度を計算するために使用されます。この反応は、典型的には、600nmの発光ピークで約5モルQDのを生じます。異なる色の量子ドットを合成するために、反応の持続時間および/または温度を変化させることができます。より長い反応時間および/または赤方偏移発光ピークの溶液が得られるのより高い温度。例えば、240℃の反応温度を増加させ、10分の反応時間を維持することが680nmの最大放出ピークを有する量子ドットをもたらします。同様に、2分の反応時間を減少させ、470nmで最大発光ピークを有する量子ドットになり用い塩化亜鉛を倍増。これらのInP / ZnSの量子ドットは、不活性ガス下、暗所で4℃で少なくとも1ヶ月間安定です。

2.水両親媒性ポリマーを使用したInP / ZnSの量子ドットの可溶化

  1. 水の可溶化
    1. ステップ1.2.10からのInP / ZnSの量子ドットを用いて、1μMQDの1ミリリットルを得るためにヘキサンでQDの一部を希釈します。
      1. 遠心管では、各チューブに0.25ミリリットルのInP / ZnSの量子ドットを転送します。遠心分離管及び遠心(10分間3,000×gで)に1ミリリットルのアセトン又はメタノールを追加します。慎重に上清を除去し、1mlのテトラヒドロフラン(THF)中の各沈殿物を溶解します。
      2. 100ミリリットルの丸底フラスコにTHFに溶解したInP / ZnSの量子ドットを移し、16ミリリットルのTHFで希釈しました。溶液中の凝集体の数を減らすために、5〜10分間のQDを超音波処理します。
    2. 30mgのポリ(マレインandhydride- ALT -1-オクタデセン)、3-(ジメチルアミノ)-1-プロピルアミン(PMAL-d)は、10mlの溶解分子グレードの水。水浴超音波処理または穏やかに撹拌溶液が半透明になるまで、完全にポリマーを溶解するのに十分です。ザボルテックスまたは激しい撹拌の使用は、QDとポリマーとの相互作用を阻害する、多くの泡を生成することができます。 100ミリリットルにTHF中のInP / ZnSの量子ドットを含む丸底フラスコを10ミリリットルポリマー溶液を追加します。
    3. ロータリーエバポレーターを用いてQD /重合体溶液からTHFを蒸発させます。ポリマーとQDとの間の相互作用を容易にするために蒸発させながら氷浴中でフラスコを置きます。真空の強さに応じて、ほとんどのTHFを10分後に蒸発させ、溶液が濁って見えます。
      1. 溶液を10ミリリットルまで蒸発させた後、ロータリーエバポレータからフラスコを取り外し、30ミリリットルを分子グレードの水を追加します。ロータリーエバポレーターにフラスコを返し、2ミリリットルに蒸発し続けています。この最終蒸発段階は、多くの時間を取ることができます。氷浴が維持されることを確認します。
    4. ピペットで丸底フラスコから水溶性のInP / ZnSの量子ドットを削除します。 0.1ミクロンのナイロンSYに取り付けられた3ミリリットルプラスチックシリンジを用いてQDソリ​​ューションをフィルタリングringe 5 mL遠心管にフィルタ。
    5. 2万MWCO膜透析ユニットに量子ドットを配置し、過剰なポリマーを除去するために、0.05 Mホウ酸緩衝液pH 8.5に対して透析します。 (pHは、このホウ酸緩衝液を作るために8.5になるまでゆっくりと、激しく撹拌しながら、0.05 Mホウ酸を0.05 M四ホウ酸ナトリウム十水和物を追加します。)、真空濃縮器を使用して、1ミリリットルにホウ酸緩衝液中の量子ドットを集中。
    6. 保存のために、パラフィルムで密封する前に、窒素ガスで溶液をパージします。水溶性のInP / ZnSの量子ドットは、暗所で4℃で少なくとも4ヶ月間安定です。

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結果

コー​​ティングされていないのInPコアは目でかなりの可視蛍光を示すものではありません。しかしのInP / ZnS(コア/シェル)量子ドットは、UV照射下で目で明るく蛍光を発するように見えます。 InP / ZnSの量子ドットの蛍光は、蛍光分光法を用いて特徴付けました。ヘキサン中の量子ドットの蛍光スペクトル73ナノメートルの半値全幅(FWHM)を用いて600nmで中心一つの主要ピークを示しているnmの533で励起され (図1)。吸光度(0.2) 図1のオフセットは、光を散乱量子ドットを意味するもので、これにより集約QDの存在、分析( 下記参照)を点滅することもできますが、ほとんどの量子ドットは、量子ドットの単一の、または非常に小さい基であることを示しています。両親媒性ポリマーPMAL-dでコーティングした後、のInP / ZnSの量子ドットの量子収率は、標準的な17としてローダミンBとQDの統合された蛍光強度を比較することにより調...

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ディスカッション

このプロトコルは、多くの生物学的システムで使用することができ、高度に蛍光のInP / ZnSの量子ドットの合成を詳述します。ここで合成されたQD製品は、他の前述の合成12に匹敵する73ナノメートルのFWHMで600nmで( 図1)を中心とする単一の蛍光発光ピークを示しました。反応時間および反応温度は、QD合成の品質および再現性に対するそれらの深刻な影響のために非常に重要なステップです。水に可溶化した後、量子ドットは、約6%の量子収率を有すると決定されました。反応時間、温度、又は前駆体濃度の変化は、マルチスペクトルの用途に使用することができる、QDの大きさと発光波長の調整を可能にします。

サイズと表面電荷は、生体系におけるナノ粒子を使用する際に考慮すべき非常に重要な要因です。標的生体分子の乱れを最小限に抑えるために、QDは小さな、月を維持する必要がありますodisperseサイズ。さらに、溶液中の量子ドットの表面電荷は、意図しない標的に向かって非特異的結合を減少させるために修飾することができます。ここで提示QDの合成は、TEM(...

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開示事項

著者らは、開示することは何もありません。

謝辞

作者は感謝して、このプロジェクトの彼らのサポートのためにミズーリ州立大学化学科と大学院大学を認めます。また、それらの透過電子顕微鏡および炭素被覆グリッドの使用については、がん研究のためのフレデリック国立研究所の電子顕微鏡研究室を認めます。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
オレイラミンアクロス129540010
塩化亜鉛(II)シグマ030-003-00-2
塩化インジウム(III) ケムインペックス24560
トリス(ジメチルアミノ)ホスフィンエンコンパス50-901-10500
1-ドデカンチオールアクロス117625000
ヘキサンフィッシャー サイH292-4
アセトンTransChemicalUN 1090
亜鉛ステアリン酸Aldrichの化学307564-1KG
テトラヒドロフランAcros34845-0010
分子水FisherSci BP2470-1
(マレイン酸アンヒルドライド-alt-1-テトラデセン)、3-(ジメチルアミノ)-1-プロピルアミン誘導体シグマ90771-1G
ホウ酸フィッシャーSci BP168-500
四ホウ酸ナトリウム十水和物フィッシャー SciBP175-500
ローダミン Bアルドリッチ 化学R95-3
窒素ガスエアガスUN1066
トリパン ブルーサーモ サイSV30084.01
3 ml プラスチック ルアーロック シリンジBD309657
ルアーロック ニードルエアタイト83000144714 インチ 22 ゲージ
50 ml ポリプロピエン 遠心分離管ファルコン352098
250 ml 遠心分離瓶Thermo Sci05-562-23Nalgene PPCO
5 ml 遠心分離管Argos-TechT2076
1.5 ml 微量遠心分離管Bio Plas4150
0.1 μm シリンジ フィルターWhatman6786-1301Puradisc 13 mm ナイロン フィルター
Slide-A-Lyzer MINI 透析ユニットThermo Sci6959020,000 MWCO
ロータリー エバポレーターハイドルフ
遠心分離機 5072エッペンドルフスイング バケット 50 mlチューブアダプター
ラムダ 650 UV/VIS 分光計パーキン・エルマーUV-Vis分光光度計
LS 55 蛍光分光計パーキン・エルマー蛍光光度計
Axio Observer.A1ツァイス落射蛍光顕微鏡
アクシオカム MRmツァイスCCDカメラ
テクナイ TF20 顕微鏡FEITransmisison Electron Miscroscope
TEM Eagle CCDFEITEM CCDカメラ
NanoBrook Omni DLSBrookhavenDynamic Light Scattering Instrument
ポリ

参考文献

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Formal Correction: Erratum: Synthesis of Cd-free InP/ZnS Quantum Dots Suitable for Biomedical Applications
Posted by JoVE Editors on 2/29/2016. Citeable Link.

A correction was made to: Synthesis of Cd-free InP/ZnS Quantum Dots Suitable for Biomedical Applications. There was an error with an author's given name. The author's name was corrected to:

Katye M. Fichter

from:

Kathryn M. Fichter

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