腎、免疫細胞の信頼性と高効率抽出

Ravi Nistala; Alex Meuth; Cassandra Smith; Aroor Annayya

doi:10.3791/54368

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方法論記事

腎、免疫細胞の信頼性と高効率抽出

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DOI:

10.3791/54368

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2016年8月19日

Ravi Nistala¹ , Alex Meuth² , Cassandra Smith³ , Aroor Annayya³

¹Division of Nephrology, Department of Medicine, University of Missouri-Columbia and Harry S Truman Memorial Veteran's Hospital, ²Division of Biomedical Sciences, Department of Medicine, University of Missouri-Columbia and Harry S Truman Memorial Veteran's Hospital, ³Division of Endocrinology, Department of Medicine, University of Missouri-Columbia and Harry S Truman Memorial Veteran's Hospital

この記事について

サマリー

腎臓免疫細胞の分離に信頼性と効率性を備えた技術が、下流のアプリケーションのために必要とされています。これには、少数の腎臓免疫細胞の表面抗体標識が必要です。ここでは、この目標を達成すると思われる腎臓免疫細胞の単離のための簡潔な方法について説明します。

要約

免疫系の活性化は、複数の腎臓病と病態生理学的過程で起こります。免疫系は、適応型と自然性の両方の要素と複数の細胞型で構成されています。場合によっては、目的の細胞タイプが、腎臓から単離された多数の全細胞のうち、非常に少ない数で存在します。したがって、腎臓疾患に関連する免疫学的問題を研究するためには、腎臓単核細胞集団を信頼性と効率よく分離することが重要です。従来、腎臓単核細胞の組織単離は、さまざまな種類と強度のコラゲナーゼ/DNAsを使用した酵素消化によって行われ、さまざまな数の生存免疫細胞が生成されてきました。最近、単一細胞単離のための機械的組織破壊物質の開発により、コラゲナーゼ消化ステップは回避され、マウスからの抽出後に腎臓の単純な機械的破壊に置き換えられています。ここでは、毎日の免疫細胞抽出のための腎臓単核細胞の単離のためのシンプルかつ効率的な方法を示します。さらに、腎臓の免疫細胞のサブセット解析の例を示します。重要なことに、この技術は、肝臓や脳などの他の軟組織や非繊維組織にも適応できます。

概要

免疫系の活性化は、複数の腎疾患および病態生理学的プロセス^6,10,11,13で発生します。活発な研究の潜在的な領域は、免疫系の活性化のための様々なトリガーを含む、種々の細胞型が関与する特定の疾患の設定におけるサイトカイン/ケモカインパターンなどの特定の薬物による上述のプロセスの全ての調節は、虚血 - 再灌流中、例示するために傷害（急性腎障害のモデル）、（6週間後）の修復または線維症の期間を通じて維持される数時間内の免疫細胞または骨髄由来造血細胞またはCD45 ⁺細胞の増加がある^{5、 12。}これらの免疫細胞は修復^5,12のプロセスを調整するために、炎症誘発性および抗炎症性サイトカインおよびケモカインの両方を分泌します。現在、単一細胞懸濁液中の細胞集団を標識するために同時に複数のフルオロフォアを使用する能力は、広告と増加しています4 5へのレーザーで近代的なフローサイトメトリー機のベント。これは、実質的にそれらの機能の状態^3,7に基づいて細胞集団を区別するために能力を追加しました。例えば、正確に^低 F4 / 80 ^ローのCD11b ^高 Ly6b ^高 CD206としてマクロファージを標識するために、少なくとも3以上のフルオロフォアは、同じ生細胞のためのゲートにサンプルボリューム、CD45 +（白血球）とLy6G-（好中球）に必要とされるであろ....