神経筋接合部 (NMJ) の機能評価は、筋肉と神経の間の通信に不可欠な情報を提供できます。ここで使用して 2 つの異なる筋神経剤、すなわちヒラメ坐骨とダイヤフラム隔 NMJ と筋肉の両方の機能を総合的に評価するためのプロトコルについて述べる。
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この記事について
サマリー
要約
神経筋接合部 (NMJ) 機能は運動ニューロンと筋肉の間の通信障害、加齢、筋萎縮性側索硬化症 (ALS) などの病気を勉強して極めて重要な役割を果たしています。ここで述べる NMJ 機能を電気刺激の 2 つのタイプを組み合わせることで測定するために使用することができます実験的プロトコル: 筋膜刺激と神経を通して刺激を直接します。これらの 2 つの異なる刺激に対する筋反応の比較は、筋肉の機能低下につながる略記で潜在的な変化の機能レベルで定義する助けることができます。
Ex vivo準備はよく統制された研究に適しています。ここで筋肉と NMJ 機能ヒラメ坐骨神経の準備のため、ダイヤフラム横隔神経の準備のためのいくつかのパラメーターを測定するための集中的なプロトコルについて述べる。プロトコルは約 60 分を持続し、カスタムメイドによる間断なく行われている収縮動態特性、筋肉や神経の刺激の力周波数の関係と 2 つパラメーター NMJ 機能に固有すなわち神経伝達障害と intratetanic の疲労を測定するソフトウェア。この方法論は、SOD1G93Aトランスジェニック マウス、普遍的突然変異体の抗酸化酵素スーパーオキシドジスムターゼ 1 (SOD1) を染色 ALS の実験モデルを用いたヒラメ筋と横隔膜筋の準備で損害を検出する使用されました。
概要
神経筋接合部 (NMJ) は、筋線維の運動終板と運動ニューロンの軸索の端末間の接続によって形成される化学シナプスです。略記は、筋肉と神経との間の通信が高齢化や筋萎縮性側索硬化症 (ALS) が発生すると、障害に重要な役割を再生する示されています。筋肉や神経は、双方向の方法1,2通信、筋肉奇形とは切り離して NMJ 欠陥を測定することができるという、physiopathological の相互作用に新たな洞察があります。確かに、この機能の評価は、形態や生化学的変化を減らす神経伝達機能を伝達するかどうかを評価するために役立つことがあります。
神経刺激と同じ筋に、膜の直接刺激によって誘発される応答による筋収縮反応の比較は NMJ 機能の間接測定として提案されています。確かに、膜刺激パスによって神経伝達シグナル、以来 2 つの収縮応答の違いと思われる略記で変更します。このアプローチをラット3,4,5,6、7、広く提案されており、またマウス モデル8,9,10、11,12に関する情報を収集するために使用します。
ここでは、私たちは消費税し、2 つの筋の準備、すなわちヒラメ坐骨とダイヤフラム隔の準備をテストする手順の詳細に説明します。特注を使用してソフトウェア、考案した NMJ と筋肉の両方の機能を特徴付けるいくつかの測定を組み合わせた連続的なテスト プロトコルそれにより筋肉の別々 に NMJ 損傷の包括的な評価を降伏します。特に、収縮力と筋の動態、直接力周波数曲線, 神経刺激、発砲とテタヌス周波数と intratetanic 疲労7の両方の神経伝達障害13プロトコルを測定します。
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プロトコル
すべての動物実験は、ローマ・サピエンツァ大学の組織学・医学胚胎学部門の倫理委員会によって承認され、動物保護に関するイタリア法の最新版に従って実施されました。
1. 実験セットアップ
- 1台のアクチュエータ/トランスデューサ、2台の刺激装置、1台のin-vitro筋肉測定装置、1台の組織浴槽、1本の吸引電極、1台のデジタルオシロスコープ、1台の実体顕微鏡、1台の冷光照明装置、1枚のデータ収集ボード、1個のコネクタブロック、および1台のパーソナルコンピュータで構成される実験システムを構築する。
注：ここでは、高い柔軟性、精度、および刺激の再現性を保証するように、LabViewで制御ソフトウェアをプログラムした。各刺激について、ユーザーはパルス幅、周波数、持続時間を選択し、膜に直接刺激するか、または神経経由で刺激するかを決定できる。また、各刺激前の休止期間の長さも選択可能である。
2. ヒラメ筋および横隔膜におけるNMJ収縮特性の評価
- システムのウォームアップ
- Krebs Ringer緩衝液14を調製し、固定装置のバスおよび組織調製用バスに入れる。4 mlのシリコンを入れた60 mmディッシュを組織調製用バスに配置する。
- 循環式恒温槽の電源を入れ、温度をヒラメ筋の場合は30 °Cに、横隔膜筋の場合は27 °Cに設定する。
- 95% O2 - 5% CO2 混合ガスを両方のバスに流す。
- アクチュエータ/トランスデューサおよび2台のパルス刺激装置の電源を入れ、電流値を膜刺激用に300 mA、神経刺激用に5 mAに設定する。
注：300 mAの電流値は、溶液にD-tubocurarineを添加した場合、神経枝に有意な収縮を誘発しないことが以前に示されている15。5 mAの電流値は、溶液による膜刺激との重複を避けつつ、神経を介して筋肉を刺激するために必要な電流量に対応している。吸引電極と筋肉の間の距離は神経の長さに依存するため、この電流値は後述するように各実験の前に慎重に調整する必要がある。
- ヒラメ筋および横隔膜の摘出
- 苦痛を最小限に抑えるため、頸脱臼によりマウスを安楽死させ、直ちに以下のようにテスト用の筋肉を摘出する。
- ヒラメ筋-坐骨神経標本の摘出およびセットアップ
- マウスの脚に70%エタノールをスプレーし、脚を覆っている皮膚を取り除く。ハサミで脚の上部を切開し、皮膚を強く引っ張る。アキレス腱を脛骨から分離し、ハサミでアキレス腱を切断する。
- ピンセットで腱をしっかりと固定し、腓腹筋とともにヒラメ筋を優しく引っ張る。ヒラメ筋の近位腱が露出したら、アキレス腱を保持したままハサミでふくらはぎ全体を切断する。直ちに組織サンプルを組織調製用バスに入れる。
- 調製用バスを実体顕微鏡の下に置き、直径0.20 mmのステンレスピンを用いてふくらはぎをシリコンディッシュに固定する。ピンセットでヒラメ筋の近位腱を挟み、優しく引っ張って坐骨神経の神経支配を露出させる。
- 神経支配が露出したら（図1）、周囲の組織を慎重に取り除き、神経を約5 mm露出させる。精密ハサミを用いて神経を切断する。ピンセットで近位腱のヒラメ筋をしっかりと挟みながら、再度引っ張り、ハサミでアキレス腱を切断して摘出する。
- アクチュエータ/トランスデューサのレバーアームの穴にナイロン線を通す。線の端に結び目を作り、アキレス腱を把持してから、筋肉が固定装置のバスに届くまで線を引いて戻す。近位腱を固定クランプで挟み、ナイロン線をレバーアームに結びつける。溶液中で筋肉を平衡化させる。
- 初期最適長（L0）を決定する。
- まず、筋肉を伸ばして10 mNでプリロードする（この値は経験に基づき、最大収縮力を保証する）。次に、筋肉を緩やかに伸ばしてプリロードを変化させ、一連の単一パルスで刺激する。最大収縮力が測定されたときが最適長となる。
- 横隔膜-横隔神経標本の摘出およびセットアップ
- マウスの皮膚に70%エタノールをスプレーする。ハサミで胸骨上を切開し、皮膚を強く引っ張って横隔膜筋を覆う皮膚を取り除く。
- ハサミを用いて胸骨の下で腹部を水平に切断し、ピンセットで腸と臓器を優しく取り除く。太いハサミを用いて脊椎を切断する。
- 胸骨から約1 cm上の肋骨を切断し、水平方向に進める。ピンセットで外臓器を優しく取り除き、脊椎を切断して、横隔膜を含む肋骨の円環状の組織を得る。
- Krebs Ringer緩衝液を含むディッシュ内で標本を洗浄し、上側を上に、胸骨を前に向けた状態で組織調製用バス内のシリコンディッシュに配置する。
- 実体顕微鏡を用いて、肺と残りの臓器を慎重に取り除く。右側に横隔神経が見える（図2A）。
- 肋骨をトリミングし、横隔膜に沿って約2 mmのリング状に残す。
- ピンセットを用いて、横隔神経の神経支配に対応する点にある横隔膜の中央腱に直径0.20 mmのステンレスピンを1本、また同じ軸上の肋骨に別のピンを1本固定し、目的の横隔膜ストリップを特定する。
- 選択したストリップの両側の中央腱にさらに2本のピンを、肋骨にさらに2本のピンを固定して横隔膜を広げる。必要に応じて、ピンセットを使用して周囲の結合組織から横隔神経を清掃する。
- 曲がった刃のメスを用いて、神経支配の両側で横隔膜を切断し、図2Bに示すような腱-筋肉-肋骨ストリップを特定する。
- アクチュエータ/トランスデューサのレバーアームの穴にナイロン線を通す。線の端に結び目を作り、腱を把持してから、筋肉が固定装置のバスに届くまで線を引いて戻す。
- 肋骨を固定クランプで挟み、ナイロン線をレバーアームに結びつける。
- 溶液中で筋肉を平衡化させ、初期最適長（L0）を決定する。
- 筋肉を伸ばして5 mNでプリロードする。筋肉を緩やかに伸ばしてプリロードを変化させ、一連の単一パルスで刺激する。最大収縮力が測定されたときが最適長となる。
図 1 - ヒラメ筋-坐骨神経標本。機能試験のための外科的手術中のヒラメ筋-坐骨神経。ピンセットを用いて坐骨神経を露出させている。こちらのリンクをクリックして、この図の拡大版を表示してください。
図 2 - 横隔膜-横隔神経標本。横隔膜-横隔神経標本摘出の段階（A）と、機能試験用に固定するための組織片（B）を示す写真。この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
- 筋収縮能とは独立した神経筋接合部（NMJ）特性の測定
- 神経を介した刺激に最適な電流強度を設定し、吸引電極から供給される電流パルスが、バス内の電流拡散によって筋肉収縮を誘発しないことを確認してください。
- 吸引電極を筋肉の近くに配置し、神経を吸い込みます。電流強度を徐々に上げながら（5 mAから開始）、一連の単一パルスで筋肉を刺激してください。収縮力が最大となったときの電流値を最適値とします。
- 神経を電極から押し出し、単発パルスを数回与える。溶液を介した膜刺激との重複により、筋肉が収縮しないことを確認する。その後、神経を再び引き入れる。
- プログラムを起動し、入力ファイルを選択して、目的の試験プロトコルを実行します。
注：入力ファイルには、プロトコル全体を実行するために必要なすべての刺激パラメータが含まれています。2つの筋肉に対して同じプロトコル構成が使用されますが、刺激パラメータは、プロトコルがヒラメ筋または横隔膜のどちらを対象としているかによって異なります。- ヒラメ筋-坐骨神経刺激（表1参照）
- すべての電気刺激において、以下のパルス幅を使用してください。坐骨神経刺激には1.4 ms、ヒラメ筋への直接刺激には0.1 msを使用します。プロトコル全体の所要時間は約65分です。
- 横隔膜-横隔神経刺激（表2を参照）
- すべての電気刺激において、以下のパルス幅を使用してください。横隔神経刺激には1.8 ms、横隔膜への直接刺激には0.2 msを用います。プロトコル全体の所要時間は約55分です。
- 実験プロトコルの最後に、精度0.05 mmのアナログノギスおよび精度0.1 mgの精密天秤を用いて、それぞれ筋肉の長さと湿重量を測定する。
- 筋重量を最適筋線維長（L₀）と密度（ρ）の積で除して、横断面積（CSA）を算出します。f) および哺乳類の骨格筋の密度（1.06 mg/mm3)16.
注：Lf Lを乗じることで得られる0 繊維長/筋肉長比（ヒラメ筋では0.71）によって16 および、横隔膜の筋肉に1つ17).
- 筋重量を最適筋線維長（L₀）と密度（ρ）の積で除して、横断面積（CSA）を算出します。f) および哺乳類の骨格筋の密度（1.06 mg/mm3)16.
- ヒラメ筋-坐骨神経刺激（表1参照）
- 神経を介した刺激に最適な電流強度を設定し、吸引電極から供給される電流パルスが、バス内の電流拡散によって筋肉収縮を誘発しないことを確認してください。
| 実験の種類 | 周波数 | 持続時間 | 繰り返し回数 | 筋肉または神経刺激 | 目的 |
| (Hz) | (s) | ||||
| 単収縮 | 単一パルス | 1 | 筋肉 | 単収縮の力およびキネティクス | |
| 休息 | 30 | ||||
| 単収縮 | 単一パルス | 1 | 神経 | ||
| 休息 | 30 | ||||
| 単収縮 | 単一パルス | 1 | 筋肉 | ||
| 休息 | 30 | ||||
| 単収縮 | 単一パルス | 1 | 神経 | ||
| 休息 | 120 | ||||
| 不完全強直 | 40 | 0.8 | 1 | 神経 | 神経および筋肉刺激の力/周波数曲線 |
| 休息 | 180 | ||||
| 不完全強直 | 60 | 0.8 | 1 | 筋肉 | |
| 休息 | 180 | ||||
| 完全強直 | 80 | 0.8 | 1 | 神経 | |
| 休息 | 180 | ||||
| 不完全強直 | 20 | 0.8 | 1 | 筋肉 | |
| 休息 | 180 | ||||
| 不完全強直 | 60 | 0.8 | 1 | 神経 | |
| 休息 | 180 | ||||
| 完全強直 | 80 | 0.8 | 1 | 筋肉 | |
| 休息 | 180 | ||||
| 不完全強直 | 20 | 0.8 | 1 | 神経 | |
| 休息 | 180 | ||||
| 不完全強直 | 40 | 0.8 | 1 | 筋肉 | |
| 休息 | 300 | ||||
| 疲労パラダイム | 35 | 0.8 | 1回の筋肉刺激に続き、1.2 sの休息を挟んで14回の神経刺激を行い、これを20回繰り返す | 神経伝達不全 (NF) | |
| 休息 | 900 | ||||
| 疲労パラダイム | 80 | 0.8 | 1回の筋肉刺激に続き、1.2 sの休息を挟んで14回の神経刺激を行い、これを20回繰り返す | 神経伝達不全 (NF) および強直内疲労 (IF) | |
表1 - ヒラメ筋-坐骨神経刺激プロトコル。 この表は、ヒラメ筋-坐骨神経標本の試験に用いる完全なプロトコルを構成する試験の順序を示しています。
| 実験の種類 | 周波数 | 持続時間 | 回数 | 筋肉または神経刺激 | 目的 |
| (Hz) | (s) | ||||
| 単収縮 | 単一パルス | 1 | 筋肉 | 単収縮の力とキネティクス | |
| 休止 | 30 | ||||
| 単収縮 | 単一パルス | 1 | 神経 | ||
| 休止 | 30 | ||||
| 単収縮 | 単一パルス | 1 | 筋肉 | ||
| 休止 | 30 | ||||
| 単収縮 | 単一パルス | 1 | 神経 | ||
| 休止 | 120 | ||||
| 不完全強直 | 60 | 0.5 | 1 | 神経 | 神経および筋肉刺激における力/周波数曲線 |
| 休止 | 120 | ||||
| 完全強直 | 100 | 0.5 | 1 | 筋肉 | |
| 休止 | 180 | ||||
| 不完全強直 | 40 | 0.5 | 1 | 神経 | |
| 休止 | 120 | ||||
| 不完全強直 | 20 | 0.5 | 1 | 筋肉 | |
| 休止 | 120 | ||||
| 不完全強直 | 80 | 0.5 | 1 | 神経 | |
| 休止 | 150 | ||||
| 不完全強直 | 80 | 0.5 | 1 | 筋肉 | |
| 休止 | 150 | ||||
| 不完全強直 | 20 | 0.5 | 1 | 神経 | |
| 休止 | 120 | ||||
| 完全強直 | 100 | 0.5 | 1 | 筋肉 | |
| 休止 | 150 | ||||
| 完全強直 | 100 | 0.5 | 1 | 神経 | |
| 休止 | 180 | ||||
| 不完全強直 | 60 | 0.5 | 1 | 筋肉 | |
| 休止 | 300 | ||||
| 疲労パラダイム | 35 | 0.33 | 筋肉刺激1回に続き、0.67 sの休止時間を挟んで神経刺激14回を行い、これを20回繰り返す | 神経伝達不全 (NF) | |
| 休止 | 900 | ||||
| 疲労パラダイム | 80 | 0.33 | 筋肉刺激1回に続き、0.67 sの休止時間を挟んで神経刺激14回を行い、これを20回繰り返す | 神経伝達不全 (NF) および強直内疲労 (IF) | |
表2 - 横隔膜-横隔神経刺激プロトコル 横隔膜-横隔神経標本の試験に用いられる完全なプロトコルの試験順序を本表に示す。
3. データ解析
注意：プロトコルの最後に、以下のようにすべての必要なパラメータを算出してください。
- 単一パルス刺激から
- 収縮力（mN；収縮中に発生した最大活動力）および比収縮力（mN/mm2）を算出する。比収縮力は、筋肉によって発生した最大力から初期のプリロード値を差し引いて算出する。比収縮力は、収縮力を筋肉のCSAで除して算出する。
- ピーク張力到達時間（TTP）（ms）を、パルス放出から収縮力に達するまでの時間として算出する。
- 半弛緩時間（1/2RT）（ms）を、収縮力から収縮力の50%に達するまでの時間として算出する。
- dF/dt（mN/ms）を、収縮相における力の微分値の最大値として算出する。
- -dF/dt（mN/ms）を、弛緩相における力の微分値の最大値として算出する。
- パルストレイン刺激から
- 非融合力（mN）および比非融合力（mN/mm2）を算出する。筋肉によって発生した最大力から初期のプリロード値を差し引いて算出する。比非融合力は、非融合力を筋肉のCSAで除して算出する。
注：非融合力とは、強直周波数より低い周波数のパルストレイン中に発生した最大活動力のことである。 - 強直力（mN）および比強直力（mN/mm2）を算出する。最大力とは、強直周波数で与えられたパルストレイン中に発生した最大活動力である。筋肉によって発生した最大力から初期のプリロード値を差し引いて算出する。比強直力は、強直力を筋肉のCSAで除して算出する。
- 力-周波数曲線（force-frequency curve）を算出する。各刺激で得られた力（または比力）の値を、増加する刺激周波数に対してプロットする。通常、これは単一パルス刺激から始まり、強直周波数で終わる。
- 非融合力（mN）および比非融合力（mN/mm2）を算出する。筋肉によって発生した最大力から初期のプリロード値を差し引いて算出する。比非融合力は、非融合力を筋肉のCSAで除して算出する。
- 疲労パラダイムから
- 神経伝達不全（NF）を以下のように計算する：
ここで、MFは筋肉刺激後の力の低下であり、Fは筋肉刺激後の最初のパルストレインで測定された神経刺激後の力の低下である。 - 強直内疲労（IF）を以下のように計算する：
ここで、Flpは刺激の最後のパルスで筋肉によって発生した力であり、Fmは同一のパルストレイン中に筋肉によって発生した最大力である。神経刺激に関しては、直接刺激直後の最初のパルストレインにおいて強直内疲労を算出する。
- 神経伝達不全（NF）を以下のように計算する：
4. 統計解析
注意：統計解析モデルは、神経刺激および膜刺激に対する筋肉の反応を、同一のアニマルモデル内で比較するか、あるいは2つの異なるアニマルモデル間で比較するかに応じて選択する必要があります18,19。
- 直接刺激と間接刺激に対する筋肉の反応のみを比較する場合は、TTP、1/2RT、dF/dt、-dF/dtに対してStudent's t検定を使用します。2つの異なるマウス系統から得られた筋肉標本を比較する場合は、刺激の種類とマウス系統を固定要因とする2元配置分散分析（2-way ANOVA）を使用します。2元配置分散分析で有意な結果が得られた場合は、多重比較検定を用いて統計的な差を検討します。
- 力-周波数曲線について（直接刺激と間接刺激に対する筋肉の反応のみを比較する場合）、刺激の種類と刺激周波数を固定要因とする2元配置分散分析を使用します。必要に応じて多重比較検定を使用してください。
- 2つの異なるマウス系統から得られた筋肉標本を比較する場合は、刺激の種類、刺激周波数、およびマウス系統を固定要因とする3元配置分散分析（3-way ANOVA）を使用します。
- 3元配置分散分析において、動物系統と刺激の種類という要因に有意な効果が認められた場合は、2元配置分散分析を用いて、一度に2つのグループ間の有意差を特定します。例えば、膜刺激に対する2つのグループの筋肉反応の差、または1つのグループ内における直接刺激と間接刺激に対する筋肉反応の差を評価できます。
- 2つの異なるマウス系統から得られた筋肉標本を比較する場合は、刺激の種類、刺激周波数、およびマウス系統を固定要因とする3元配置分散分析（3-way ANOVA）を使用します。
- 強直性疲労（Intratetanic fatigue）
注：本プロトコルは対照群のマウスであっても神経刺激に反応して疲労を誘発するように設計されているため、このパラメータは2つのマウス系統間の差を調査する場合にのみ使用でき、単一グループ内での統計解析を行うと常に有意差が出ることになります。- 2つのグループを比較するには、刺激の種類、時間、およびマウス系統を固定要因とする3元配置分散分析を使用します。3元配置分散分析において、動物系統と刺激の種類という要因に有意な効果が認められた場合は、力-周波数曲線の場合と同様に、2元配置分散分析を用いて一度に2つのグループ間の有意差を特定します。
- 神経伝達不全については、動物系統と時間を固定要因とする2元配置分散分析を使用します。有意な結果が得られた場合は、多重比較検定を用いて統計的な差を検討します。
注：このパラメータは各マウス系統に対して1つの値しか得られないため、異なるマウスモデル間の比較が可能です。 - 筋肉の重量、長さ、および CSA については、異なる動物モデルからの筋肉-神経標本を比較して差を調査する場合、Student's t検定を使用します。
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結果
我々 が説明されたプロトコルでは、いくつかの神経筋疾患や老化サルコペニア機能神経について説明します。かどうか (その場合は、どのレベルで) は、このプロトコルを使用することができます筋肉の変化がそれ自体筋肉または神経筋伝達で発生する選択の変更によるものです。下図のデータは、我々 グループの18、20疾患の末期で筋萎縮性側索硬化症の SOD1G93Aトランスジェニック マウス モデルの実施による前の仕事の結果です。G93A SOD1 のトランスジェニック マウスでは、突然変異体の抗酸化酵素スーパーオキシドジスムターゼ 1 (SOD1) 普遍的染色します。図 3 と 4 は、dF/dt とヒラメ坐骨神経 (左) およびダイヤフラム横隔神経 (右) 準備テタヌス力値を示します。これらの結果は、厳密に筋肉自体に関連するものではなく NMJ に関連している遺伝子の筋肉の機能的な欠陥を検出するここで提案する手法の能力を発揮します。確かに、dF/d...
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ディスカッション
上記実験のプロトコルは、測定、差別または筋肉に直接に発生した任意の機能変化間接的神経筋接合部のレベルでの理想的な方法を提供します。この手法は NMJ 機能の間接測定に基づいているので、かどうか瑕疵は形態学的変化または生化学的変化に関係を確立する使用できません。対照的に、任意の形態学的または生化学的変化が神経伝達シグナルの機能を減らしたかどうかを決定するの効果的な方法を用意します。しかし、力の測定が完了したら、筋肉お風呂から削除、消された、最適の長さで固定、埋め込み化合物に囲まれたできイソペンタンを溶解で急速凍結されました。筋肉は、免疫組織化学的、形態学的分析など-80 ° C 以降の評価のために格納できます。
我々 はここで提案する手法は、初めて NMJ と筋肉の機能を特徴づけるいくつかのパラメーターの測定を組み合わせた実験的テスト プロトコルに基づいています。3 つの重要なポイントは、この手法には、信頼性の高い結果が得られますを確認します。
まず、骨格筋切除は比較的一般的な手法では今、余分な注意が必要、神経を筋肉をそのままに...
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開示事項
著者が明らかに何もありません。
謝辞
筆者らの研究室で仕事に支えられたスタンパーリアラヴェッロ ローマ、テレソン (付与なし。GGP14066)。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| デュアルモードレバーシステム | オーロラ・サイエンティフィック社 | 300B | アクチュエータ/トランスデューサ |
| ハイパワーバイフェーズスティミュレーター | オーロラ・サイエンティフィック社 | 701B | パルススティミュレータ(神経) |
| ハイパワーバイフェーズスティミュレータ | オーロラ・サイエンティフィック社 | 701C | パルス刺激装置(筋肉) |
| In vitro Muscle Apparatus | オーロラ・サイエンティフィック社 | 800A | |
| 準備ティッシュバス | Radnoti | 158400 | |
| モノポーラ吸引電極 | AMシステム | 573000 | リファレンス |
| オシロスコープ | テクトロニクス | TDS2014 | |
| 実体顕微鏡 | ニコン | SMZ 800 | |
| 冷光照明 | フォトニックオプティクス | PL 3000 | |
| アクイジションボード | ナショナルインスツルメンツ | NI PCIe-6353 | |
| 端子台 | ナショナルインスツルメンツ | NI 2110 | |
| パーソナルコンピュータ | AMD Phenom II x4 970 | プロセッサ 3.50 Ghz Windows 7 | |
| LabView 2012ソフトウェア | ナショナルインスツルメンツ | ||
| クレブスリンガー重炭酸塩バッファ | シグマ・アルドリッチ | K4002 | 生理学的バッファー |
| 重炭酸ナトリウム | Sigma-Aldrich | S5761 | |
| 塩化カルシウムCaCl2 | Sigma-Aldrich | C4901 | 無水、粉末、≥97% |
| バッファーHEPES | シグマ-アルドリッチ | H3375 | ≥99.5% (滴定) |
| ディッシュ 60mm x 15mm | ファルコン | 353004 | ポリスチレン |
| シリコーン | シルガード | 184シリコーン | エラストマーキット 0.5Kg。 |
| サーモスタット | Dennerle | DigitalDuomat 1200 | |
| ポンプ | Newa Mini | MN 606 | 水族館用 |
| 耐熱性 サーモケーブル | ラッキー 爬虫類 | 61403-1 | 50/60Hz 50W |
| バケツ | 任意の 10 リットル | ポリプロピレン | |
| O2 + 5%CO2 | siad | 混合ガス | |
| #5 鉗子 | ファインサイエンスツール | 11252-20 | 2アイテム |
| スプリングハサミ - 8 mm ブレード | ファイン サイエンス ツール | 15024-10 | 神経切除 |
| シャープハサミ | ファインサイエンスツール | 14059-11 | 筋肉除去 |
| はさみ | ワグ | ナー02.06.32 | 動物の |
| 学生のメスのハンドル#3 | ファインサイエンスツールの外側 | 91003-12 | |
| メスブレード #10 | ファインサイエンスツール | 10010-00 | |
| メスブレード #11 | ファインサイエンスツール | 10011-00 | |
| ナイロンワイヤー&オスラッシュ;0.16 mm | 任意 |
参考文献
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