ラット大動脈または下大静脈内のパッチ血管形成術

サマリー

私たちは、小径静脈または動脈のいずれかで使用できる心膜パッチ血管形成術のモデルを確立しました。このモデルは、静脈と動脈の新内膜過形成形成を比較するために使用できます。

要約

心膜パッチは、一般的に血管を閉じるために血管手術に使用されています。パッチの形成、新生内膜過形成の研究を容易にするために、我々は、それぞれ、パッチvenoplastyまたはパッチ動脈形成の作成、静脈または動脈のいずれかで使用することができるパッチ血管形成のラットモデルを開発しました。このモデルの技術的な側面が議論されています。赤外線腎IVCまたは大動脈を切開した後、近位および遠位クランプされます。 3ミリメートルの静脈切開または動脈切開は、6〜8週齢のWistarラットの腎臓下の下大静脈または大動脈で行われます。ウシ心膜パッチ（×1.5ミリメートル×0.6ミリメートル3ミリメートル）を10-0ナイロン縫合糸を使用してサイトを閉鎖するために使用されます。動脈パッチに比べて、静脈パッチは、術後7日目に、新生内膜の厚さ増加を示す心膜パッチ血管形成術のこの新規なモデルは、血管の生体材料の新生内膜過形成を調べるために、ならびに、動脈と静脈の間の違いを比較するために使用することができます環境。

概要

心膜パッチ、ウシまたはブタのいずれかで一般に近い血管の血管外科医は、再狭窄^1,2の危険性を低減します。動脈手術では、心膜パッチ血管形成術は、一次閉鎖^3、4に比べて再狭窄率を低下させます。パッチvenoplastyも同様に、動脈手順^5、6にそれほど頻繁に比較した場合にも、静脈を閉鎖するために行われます。パッチは、典型的には、その腔面上の新生内膜過形成を開発します。しかし、新生内膜形成のメカニズムは、特に、動脈と静脈の環境間で新生内膜形成の違いを比較して、不明なままです。我々は以前心膜パッチは、動脈と静脈の両方の環境で前駆細胞を誘引することが示されたと静脈パッチ血管形成術は、より多くのAを示しています動脈パッチ^7,8に比べてggressive新生内膜形成。

本研究では、静脈および動脈の両方を閉じることに共通の心膜パッチ血管形成のラットモデルを記述し、その新生内膜形成を研究するために使用されてもよいです。この方法は、一般的にヒト患者において使用される手術技術の小動物モデルです。ラットモデルは、手術の技術的側面を容易にし、モデルの学習曲線を改善する、マウスモデルよりも大きな直径を有しています。

プロトコル

適切な制度的動物実験委員会の承認は、あなたのプロトコルがあなたの機関の動物実験倫理委員会のガイドラインに従っていることを示す、取得する必要があります。

1.麻酔と手術前の手順

1. 気化した3％のイソフルラン及びアクリル誘導チャンバ内に投与1リットル/分の酸素と、周りに200グラムの重量を量る、Wistar系雄性ラットを麻酔。
2. つま先と尾のピンチに反応性の欠如を通じて十分な麻酔を確認してください。動物が麻酔下にある間乾燥を防ぐために、目に軟膏を置きます。位置プラスチック操作板上の各ラットの仰臥位および気化2配信するためにシリコーンマスクを配置 - 連続吸入により3％のイソフルランを。それは胸骨横臥位を維持するのに十分な意識を取り戻したまで無人の動物を放置しないでください。
3. 滅菌手袋を身に着けている間、毛リムーバーを使用して、腹側腹部の毛を除去します。 Buprenorphine、皮下または腹腔内に、頻繁にこの時点で与えられています。

2.手術の手順

1. パッチvenoplasty
   1. 手術前に、3ミリメートル×1.5ミリメートル×0.6ミリメートルサイズにmicroscissorを使用して、ウシの心膜パッチをトリミングします。細胞培養皿に5分間の滅菌生理食塩水10mlにパッチを浸します。
   2. あなたの制度的プロトコルに従って局所消毒して切開部位を準備し、外科用ドレープを適用します。手術を通して無菌技術を維持するために、滅菌手袋や楽器を使用してください。局所麻酔は、計画された皮膚切開の部位に注入することができます。
   3. メスを使用して、ちょうど恥骨上記に剣状突起のレベルから延びる腹部正中切開を行います。
   4. 開創器を挿入し、右側に向かって腹腔からすべての腸を骨抜き。生理食塩水に浸したガーゼで腸ラップ。
   5. 私を公開nfrarenal大静脈（IVC）。パッチ移植部位は、腎静脈の起源のレベルよりも約2ミリメートルです。このサイトでは無料のIVCを分析。 6-0ナイロン縫合糸を使用して、このレベルですべての腰椎と支流静脈を結紮し、分割します。
   6. 近位および遠位infarenal IVCの両方を横切って2マイクロサークリップを配置します。 IVCの前壁を穿刺することにより、25 G針で静脈切開を行い、その後、ハサミ（ 図1A）を使用して3mm程度にそれを拡張します。
   7. 実行中または中断10-0ナイロン縫合糸（ 図1B）を使用して、パッチで静脈切開を閉じます。
   8. venoplastyの閉鎖を完了します。パッチを通気した後、IVCへの血流を回復するために、近位のクランプを除去するために、第1の遠位のクランプを外します。
   9. 圧縮せずに30秒間観察することにより止血を確認してください。彼らの自然な位置に腸を返します。承認された動物プロトコルに従って実行されている縫合糸で腹部を閉じます。
2. パッチ動脈形成術
   1. 手術前に、3ミリメートル×1.5ミリメートル×0.6ミリメートルサイズにmicroscissorを使用して、ウシの心膜パッチをトリミングします。滅菌生理食塩水でそれを浸します。
   2. 局所消毒で切開部位を準備し、外科用ドレープを適用します。手術を通して無菌技術を維持するために、滅菌手袋や楽器を使用してください。
   3. メスを使用して、ちょうど恥骨上記に剣状突起のレベルから延びる腹部正中切開を行います。
   4. 開創器を挿入し、右側に向かって腹腔からすべての腸を骨抜き。生理食塩水に浸したガーゼで腸ラップ。
   5. 大動脈を公開します。パッチ移植部位は、腎動脈の起源のレベルよりも約2ミリメートルです。このサイトでは無料の大動脈を解剖。 6-0ナイロン縫合糸を使用して、このレベルでは、すべての腰動脈を結紮し、分割します。
   6. 腎臓下の大動脈をクランプします。 puncturiによって動脈切開を行うために25 G針を使用します大動脈の前壁ngをしてから、はさみ（ 図1C）を使用して3mm程度にそれを拡張します。
   7. 10-0ナイロン縫合糸（ 図1D）を実行して使用してパッチに動脈切開を閉じます。動脈形成術の閉鎖を完了します。パッチをベントしてから大動脈への血流を回復するために、近位のクランプを除去するために、第1の遠位のクランプを外します。
   8. 圧縮せずに30秒間観察することにより止血を確認してください。彼らの自然な位置に腸を返します。承認された動物プロトコルに従って実行されている縫合糸で腹部を閉じます。

3.術後の手順

1. 腹部の閉鎖後、麻酔を中止してください。施設内動物管理使用委員会が推奨する指示に従って、鎮痛および創傷ケアなどの術後ケアを適用します。
2. 鎮痛のために、0.1mgのでブプレノルフィンを使用/ kgの筋肉内に24時間毎に12時間以上では続きません外科手術る。周術期の期間から適切なリカバリ、および術後疼痛の適切な治療を確実に、動物室で毎日動物の状態を確認してください。それは完全に回復するまで他の動物の会社に手術を受けた動物を返さないでください。

結果

パッチ血管形成術の後、静脈た（n = 42）または動脈（N = 24）パッチ群のいずれかには血栓はありませんでした。 7日目での生存率は、静脈または動脈パッチのいずれかで両群で100％でした。

パッチは、7日目に採取し、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色し、そして以前に^7に記載^{されている}よう^に新内膜の厚さを比較しました。そのため、パッチと新生内膜の間に明確な形態学的な違いのために、新生内膜を区別することは非常に簡単です。静脈パッチでは、パッチの腔側に厚い新生内膜の明確な層は、新生内膜に蓄積された複数のセル（ 図2A、2C）と、そこにありました。動脈パッチに、はるかに薄い新生内膜層は、パッチの腔側に取り付けただけ少数の細胞（ 図2B、2D）と、ありました。...

ディスカッション

私たちは、それぞれ、パッチvenoplastyまたはパッチの動脈形成を作成し、静脈または動脈のいずれかで使用することができたラットにおけるパッチ血管形成術のモデルを記述します。この心膜パッチモデルを用いて、我々は大動脈動脈形成術（ 図^2）7、8に比べてラットのIVC venoplastyに積極的かつ安定した新生内膜過形成を示しました。

いくつかの技術的な側面が注目されます。大動脈動脈形成術では、縫合糸は、動脈環境のより高い圧力での血液の漏れを防ぐためにしっかりと数および/または間隔が適切であることが重要です。 IVCのvenoplastyでは、IVCの壁は非常に薄く、壊れやすいように、特定のケアと優しさと作動演習のすべてを実行することが重要です。また、移植部位の周囲に腰椎と小さな支流静脈は慎重に切開し、出血を防ぐためにライゲートされなければなりません。両方のアルテでリアルと静脈手順は、遠位クランプは、任意の管腔の空気を排出すると肺の...

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
ウシ心膜パッチ	LeMaitre Vascular
Vascular clamp	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5424
クランプ、鉗子の適用	Roboz Surgical Instrument Co	RS-5410
10-0、Prolene suture	Arosurgical Co.	T05A10N10-13

、、、