フルーツフライで免疫染色でステロイド合成器官とそのインタラクティブ臓器を可視化するためのプロトコルキイロショウジョウバエ

サマリー

私たちは、解剖、固定、およびステロイドホルモンの生合成とその調節機構を研究するために、ショウジョウバエの幼虫と大人の女性のステロイド産生器官の免疫染色のためのプロトコルを記述します。ステロイド産生臓器に加えて、我々は、ステロイド産生器官の神経支配並びにそのような生殖細胞系列幹細胞のようなステロイド産生標的細胞を可視化します。

要約

多細胞生物では、細胞の小グループは、成長と再生への全身応答を誘導する、その生物起源の活動の専門機能に恵まれています。昆虫で、幼虫の前胸腺（PG）と、成人女性の卵巣プレイエクジステロイドと呼ばれる主要なステロイドホルモンの生合成における重要な役割。これらのecdysteroidogenic器官は生合成のタイミングは、環境手がかりに影響され、それを通して神経系から神経支配されています。ここでは、ステロイドホルモンの生合成とその調節機構を研究するための適切なモデルシステムを提供キイロショウジョウバエを 、飛ぶecdysteroidogenic臓器や幼虫でのインタラクティブな臓器や果物の大人を可視化するためのプロトコルを記述します。巧みな解剖は、私たちは脳、腹側神経索、および他の組織を含むecdysteroidogenic臓器とそのインタラクティブな臓器の位置を維持することができます。を用いた免疫染色ecdysteroidogenic酵素に対するntibodiesは、組織特異的プロモーターにより駆動されるトランスジェニック蛍光タンパク質と共に、ecdysteroidogenic細胞を標識するために利用可能です。また、ecdysteroidogenic器官の神経支配はまた、特異的抗体又はニューロンの様々なタイプのGAL4ドライバーの集合によって標識することができます。したがって、ecdysteroidogenic器官およびそれらの神経接続は、免疫染色およびトランスジェニック技術によって同時に可視化することができます。最後に、我々は、その増殖とメンテナンスエクジステロイドによって制御されている生殖細胞系列幹細胞を、視覚化する方法について説明します。この方法は、ステロイドホルモンの生合成とその神経調節機構の総合的な理解に貢献しています。

概要

多細胞生物では、細胞の集団は、体全体のために不可欠である彼らの生体活動の専門機能に恵まれています。その任務を果たすために、各組織または器官は、それらの機能に関連する遺伝子のシリーズを発現し、開発のコンテキスト内でそれらの活性を編成するために他の組織と通信します。このような特殊な細胞機能およびインター器官相互作用を特徴づけるために、我々は、細胞の他のタイプの多アーキテクチャにそのまま保持されると共にセルのグループを指定する必要があります。

そのような特殊な器官の一例は、多くの生合成酵素が活性ステロイドホルモン¹にコレステロールから変換ステップを仲介ステロイド産生器官です。これらの酵素の遺伝子のほとんどは、特にステロイドの器官で発現され、生合成経路がしっかり体液入力とニューロンの入力を介して多くの外部刺激により調節されます。一度合成、ステロイドホルモンは、体液中に分泌され、遺伝子²の種々の発現を調節するため、多くの組織および器官を標的とします。したがって、ステロイドホルモンの作用は、恒常性、成長、および再生を維持するためのシステム応答を誘導します。

ステロイドホルモン生合成の機能及びステロイドホルモンの多面的な行動を調査するために、 キイロショウジョウバエは、適切なモデル系として利用することができます。幼虫の段階では、昆虫ステロイドホルモン、エクジステロイドは、専門的な内分泌器官で生合成される前胸腺^（PG）3と呼ばれます。 PGでは、いくつかのecdysteroidogenic酵素は、具体的には、適切な発達段階⁴に脱皮および変態制御する、エクジソンにコレステロールから複数の変換ステップを触媒します。したがって、エクジステロイド力価の動的変化が規制されています環境合図に応答して、多くのシグナル伝達経路によって。一方、成人の段階では、エクジステロイドは、再生、睡眠、メモリ、および寿命^{5、6、7、8}を含む生理学における重要な役割を果たしています。エクジステロイドが積極卵形成^{6、7、8、9、10、11}の進行を調節する、卵巣で生合成されることが知られています。最近では、生殖細胞系列幹細胞（GSCs）の数が^12を刺激交配に応じて、エクジステロイドとのセックスペプチドのシグナル伝達に影響されることを報告しています。

よく注釈付きゲノム情報を含むキイロショウジョウバエ遺伝学および細胞生物学の強力なツール、バイナリ遺伝子発現系、およびトランスジェニックのRNAi技術は、PGおよび卵巣^13、14、15で生合成をエクジステロイドために不可欠な遺伝子を同定するために私たちを有効にしています。 ecdysteroidogenic遺伝子が同定されたら、これらの遺伝子の転写調節および遺伝子産物の動的局在は、生合成経路¹⁶で検査することができます。この目的のために、定量的逆転写PCR、in situハイブリダイゼーション RNA、及び免疫組織学的分析が行われます。これらの技術の適用は、困難なタスクを含みます。 PGまたは卵巣の精巧な解剖。 1は、果物のサンプリングのために解剖を飛ぶの重要なスキルを練習する必要があるので、特に、ショウジョウバエのPGは、他の昆虫（ 例えばカイコとクロバエ）に比べて相対的に小さいです。さらに、両方のecdysteroidogenic器官は神経支配を受けます中枢神経系^{（CNS）17、18、19、20}秒から。したがって、正確な解剖学的な分析のために、ecdysteroidogenic器官は彼らの神経接続を破壊しない、CNSおよび他の器官と一緒にそのまま保持されなければなりません。

ここでは、Dにおけるステロイド産生器官の解剖と可視化のためのプロトコルを提供します。 ショウジョウバエ。解剖の技術を学ぶことはこれらの実験のための重要な出発点です。また、1が正常にいくつかの抗体とGAL4ドライバーラインとステロイド産生臓器並びにそれらのインタラクティブな器官にラベルを付けることができます。これらの技術、材料、および遺伝学を利用して、一つはステロイドホルモンの生合成の総合的なメカニズムを研究することができます。

プロトコル

注：プロトコルの全体的なスキームを図1に示されています。

1.幼虫リング腺の解剖（RG）

NOTE：Dで。 cyclorrhaphous双翅目に属するメラノは 、PGは、複合内分泌器官内リング腺（RG、 図2D）と呼ばれます。それはPGを外科的（後述する）他のタイプの細胞から分離されることが不可能であるため、実用的な目標は、解剖によって無傷の、無傷RGを単離することです。

1. 適切な発達段階での幼虫の準備
   注： キイロショウジョウバエの幼虫の発達段階を同期させるために、狭い時間ウィンドウ内の卵を収集するために、適切なタイミングで幼虫を収集する必要があります。
   1. 25℃でのグレープジュース寒天プレート上で2時間、卵を集めます。
   2. 新たに孵化し収集1 ^{ST齢ピンセットで解剖顕微鏡の下で幼虫とマッシュポテト標準酵母/コーンミールフライ食品を含む小さなバイアルに移します。
      注：幼虫の年齢は「卵は産卵後の時間（HAEL）」、「時間ハッチ後（ほら）」、または「L3の脱皮後の時間（hAL3E）」で表されます。}
   3. 適切な時点で、望ましくない負傷を避けるために、使い捨てのプラスチック製のループで上演幼虫を集めます。 ^第3齢幼虫の発達の進行の差を最小にするために、70 HAEL（48 HAH）における第^2齢幼虫を収集し、それらを2時間間隔で脱皮することを可能にします。次いで、L3の脱皮後2時間以内に^第3齢幼虫を集めます。この手順は、0-2 hAL3Eの幼虫を与えます。
   4. リン酸緩衝生理食塩水（PBS）で満たされたシャーレにステージング幼虫を転送します。
   5. 身体から残留食べ物を取り除くためにPBSで幼虫をすすぎます。
2. 下の幼虫の粗解剖解剖顕微鏡
   1. ピンセットで幼虫の口のフックを保持します。マイクロはさみを使用して、本体の長さの前方三分の一で幼虫体を切断します。
   2. 鉗子の1ペアで前幼虫体の切断端を持ちます。鉗子の他のペアを使用して、優しく体の内側に向かってヘッドの先端を押します。この手順は、裏返し幼虫の体を回します。
      注：このステップでは、1 ^回目の齢幼虫の解剖のためにスキップすることができます。
   3. 手順を繰り返して、1.2.1-1.2.2、追加の幼虫を5〜10分間。
      注：幼虫の数は解剖のための時間を節約することが20以下でなければなりません。
3. 幼虫のフィレ解剖
   注：このメソッドはそのまま残るために組織の位置を維持することができます。
   1. わずか1時間水に幼虫を残します。幼虫は、窒息のために固定化されています。
   2. シリコンコーティングにPBSのドロップ幼虫の背側を上にして置きますその背側を上にして皿。
      注：背側は、長手方向に延びる2本の気管チューブを持っています。
   3. 解剖顕微鏡下で、ピンセットを用いて幼虫の前方先端部に虫ピンを挿入します。後方側に幼虫体を伸ばすと幼虫の後方先端部に第二のピンを置きます。
      注：昆虫ピンに加えて、タングステンワイヤから製造された針²¹に有用であり得ます。針は、解剖針として使用するための加熱によってピペットチップに埋め込むことができます。
   4. 解剖顕微鏡下で、マイクロハサミで尾の近くに小さな切開を行います。切開部から、頭部に向けて背側正中線に沿って縦方向に背側クチクラを切りました。キューティクルの下に組織を傷つけないように注意してください。
   5. 各側の側板のキューティクルを伸ばし、解剖側板の各コーナーに4本のピンを配置します。
   6. 脳-RG Cを露出させ、鉗子で前脂肪体の部分を削除します表面に露出することomplex。必要に応じて、唾液腺のペアを削除します。
4. 免疫組織化学と組織の固定および染色
   1. 500μL定着液（PBS中の4％パラホルムアルデヒド）を充填した1.5 mLのマイクロチューブに幼虫体（ステップ1.2.2）の前方三分の一を置きます。そうでなければ固定したサンプルに付着PBSで固定液の好ましくない希釈を引き起こす可能性があり、一度に20個の未満のサンプルを固定します。フィレット解剖のために、PBSの滴を除去した後、定着液の液滴を加えます。
      注：固定溶液は、3.7％ホルムアルデヒドを4％パラホルムアルデヒドのいずれかを使用することができます。
   2. 室温（RT）で30分間定着液中に切開組織をインキュベートまたは代わりに4℃で2時間撹拌しました。
   3. 500μLPBSで定着液を交換し、すぐにサンプルを3回すすいでください。 Rにおけるロッカーに15分間、500μLの0.3％PBT（PBS + 0.3％オクチルフェノールエトキシレート）を有するサンプルを洗いますフィレット解剖についてT.、昆虫ピンを除去し、1.5 mLのマイクロチューブにサンプルを移します。
      注：組織への抗体の浸透性を増大させるため、試料を室温でロッカー上で1〜2時間、500μL2.0％のPBTを用いて処理されます。
   4. 溶液（PBT中の2％ウシ血清アルブミン）をブロック500μLとPBTを置き換えます。 RTでロッカー上で1.5時間試料をインキュベートします。
   5. 50μL一次抗体溶液、ブロッキング溶液で希釈したすなわち抗体によるブロッキング溶液を交換してください。
   6. 一晩4℃でロッカー上のサンプルをインキュベートします。
   7. 500μLの0.3％PBT一次抗体溶液を交換し、迅速にサンプルを5回すすぎます。 RTでロッカー上で15分間、500μLの0.3％PBTで試料を3回洗浄します。
   8. 50μLの二次抗体溶液（ブロッキング溶液中に希釈した色素標識抗体）を用いて0.3％のPBTを置き換えます。核染色、0.5μL4' のために、6-diamidino-2-フェニルインドール（DAPI、0.1mg / mlのストック溶液）、50μLの溶液に添加します。 RTでまたは代わりに一晩4℃で2時間ロッカー上でサンプルをインキュベートします。
      注：暗闇の中でサンプルを保管してください。
   9. 500μL、0.3％のPBTと抗体溶液を交換し、5回すすいでください。 RTで15分間、500μLの0.3％PBTで試料を3回洗浄します。
5. PGを含むと取付脳-RG複合体の微細解剖
   1. 0.3％PBTを充填した皿に免疫染色サンプルを転送するために、使い捨てピペットを使用します。
      注：解剖および実装時に不便な泡を避けるために、0.3％のPBTは、PBSと交換することができます。
   2. 解剖顕微鏡下では、鉗子の1ペアでキューティクルや口のフックを保持します。 「ナイフ」と1mlシリンジに取り付けた27 G針を使用して、身体のキューティクルから脳-RG眼ディスク複合体を除去するために、食道と眼ディスクの前方先端を切りました。
   3. SEPAピンセットで脳-RG-目のディスク複合体から食道と腸を評価。食道は、腹側神経索（VNC）上記脳を通過するので、後側に腸を引き出します。
      注：ニードルナイフで脳、目のディスク、および脚のディスク間の接続を切り、サンプルから余分な成虫を削除するには。
   4. 他のサンプルのための手順を1.5.1-1.5.4繰り返します。
      注：0.3％PBT又はPBSで満たされた異なる清浄な皿に各完成サンプルを転送する、サンプルに付着する組織破片を防ぐために。
   5. マイクロピペットで清潔なガラススライドの中央にサンプルを転送します。
      注：第²または^第3齢幼虫の場合、マイクロピペットチップの端部は、かみそりの刃で切り捨てられるべきです。
   6. 解剖顕微鏡下で、ピンセットを使用して、背側を上にして個々のサンプルを整列させます。
      注：RGは、脳の背側に配置されている（ 図2A）。このアライメントは、撮像中の個々のサンプルの仕様を容易にします。
   7. ガラススライドを傾け、できるだけ多くの余分なPBTを拭き取ってください。スライドの側面に取り付けた試薬の液滴を入れてください。ドロップの反対側からカバースリップのエッジを置き、ピンセットでゆっくりとサンプルにカバースリップを置きます。
      注：この手順では、カバーガラスの外に移動するからサンプルを防ぐことができます。
   8. 4°Cでサンプルを保管してください。暗闇の中でサンプルを保管してください。

2.卵巣の解剖で 大人の女性

1. 成人女性の調製
   1. フィードの女性は卵巣を太らせるために3〜4日間食べ物を飛ぶ標準酵母/コーンミールで飛びます。 25°Cで維持します。
2. 大人の女性の卵巣の解剖
   1. 女性は、CO ₂ガスで飛んで麻酔し、頭を切り落としました。
   2. 3センチメートル皿にフライ体を転送PBSでいっぱい。
   3. 解剖顕微鏡下で、ピンセットを用いて背側胸部を保持します。他の鉗子で腹部のセグメントA5またはA6をつかみ、後側に向かって腹部キューティクルの剥がれ。鉗子の先端から粘着性のキューティクルを拭き取ってください。
   4. 卵管をピンチし、体内から卵巣を取り出します。
   5. 櫛や鉗子で卵巣のヒントを広げます。
      注：この操作は、免疫染色の効率を向上させることができます。
3. 大人の女性の脳、VNCや生殖器官の解剖。
   注：この方法は、卵巣の神経支配はそのまま保持されることを可能にします。
   1. 女性は、CO ₂ガスで麻酔ハエおよびPBSを充填したシリコンコーティング皿に移します。
   2. 解剖顕微鏡下で、口吻を保持し、鉗子で脳が露出するようにヘッドキューティクルをはがします。脳に添付気管を削除します。
      注：brainが白と丸みを帯びた構造です。脳は胸部にVNCに接続します。
   3. 背側胸部を持ち、鉗子の1ペアで脚と翼を切り落としました。鉗子の他のペアを使用して、足の塩基から胸部腹キューティクルを剥がします。 VNCが露出されると、VNC使用鉗子に取り付けられた残留背側クチクラ及び筋肉を取り除きます。脳とVNCとの間の接続を傷つけないように注意してください。
   4. 腹部キューティクルの剥がれや卵巣およびニューロンを含む彼らのインタラクティブな臓器、作物、消化管、卵管、子宮、およびアクセサリー腺を露出するために鉗子を使用してください。
   5. 気管や鉗子を使用して体脂肪を含む残留組織を削除します。
4. 免疫組織化学と組織の固定および染色
   1. 250μLの固定液（4％paraformaを充填した1.5 mLのマイクロチューブに卵巣の約8~10対を転送PBSでldehyde）とRTで30分間、サンプルをインキュベートします。
   2. 500μLPBSで定着液を交換し、すぐにサンプルを3回すすいでください。
   3. RTで5分毎にサンプルを500μLの0.1％PBTで2回洗浄します。
   4. ブロッキング溶液50μLとPBTを交換してください。 RTでロッカー上で1時間試料をインキュベートします。
   5. 50μL一次抗体溶液でブロッキング溶液を交換してください。
   6. 一晩4℃でロッカー上のサンプルをインキュベートします。
   7. 500μLの0.1％PBT一次抗体溶液を置き換えます。 RTでロッカー上で15分間、500μLの0.1％PBTで試料を3回洗浄します。
   8. 50μLの二次抗体溶液と0.1％のPBTを置き換えます。核染色のために、50μLの溶液に0.5μLDAPIを追加します。 RTでロッカー上で2時間サンプルをインキュベートします。
   9. 500μLの0.1％PBTとの二次抗体溶液を置き換えます。 500μLの0.1％PBTで試料を3回洗浄 RTでロッカー上で15分間、。
      注：洗浄操作は4℃で一晩行うことができます。暗闇の中でサンプルを保管してください。
5. スライドガラス上にサンプルをマウントします
   1. マイクロピペットを用いて、0.1％のPBTを用いてガラススライドにサンプルを移します。
      注：解剖し、実装時の不便な気泡を回避するために、0.1％のPBTをPBSで置換することができます。
   2. 卵巣のために、解剖顕微鏡下でピンセットで互いにovariolesの文字列を区切ります。 germariaを含むovariolesのヒントを傷つけないでください。脳-VNC-生殖器官の複雑なために、残留キューティクルを削除し、ガラススライド上の位置を配置します。
   3. できるだけ過剰PBTを拭き取り、サンプルの中心に取り付け試薬の滴を置きます。ゆっくりとピンセットを用いてカバースリップを置きます。
   4. 4°Cでサンプルを保管してください。暗闇の中でサンプルを保管してください。

共焦点レーザー走査顕微鏡で「> 3。イメージング

1. 顕微鏡でサンプルを観察し、視野内のステロイド産臓器をもたらします。ビューが固定されたら、画像取得モードに撮像システムを切り替えます。
   注：10-20X対物レンズが脳-RG複合体や卵巣全体の画像を取得するために使用されています。あるいは、40-63X対物レンズ（水又は油浸）はGSCsまたはPGおよび卵巣のニューロンの神経支配中のタンパク質の細胞内局在を可視化するために使用されます。
2. 付属のソフトウェアでの画像取得のパラメータを設定します。蛍光（ 例えば GFPおよびRFP）の組み合わせを選択します。高速走査手順によって、レーザパワー、検出器の感度（ゲイン/オフセット）、及びピンホールの大きさを調整します。
   注記：高品質の画像を取得するために、走査レーザパワーと検出器（ゲイン）の感度は、各サンプルのために最適化されなければなりません。形状の概要を説明するために、組織を、透過光画像は蛍光画像に加えて取ることができます。
3. 画像のZスタックを取ります。連続高速走査中に、顕微鏡のフォーカス駆動と焦点面を移動させ、開始位置と終了位置を設定します。スライスの数とスライス間の間隔距離は、それに応じて調整されます。
4. スキャン速度、スキャン方法、および双方向スキャンモードを選択します。
5. 画像取得のための「本当のスキャンを開始します」。
6. 付属ソフトの形式で画像を保存します。
   注：元の画像ファイルは、画像取得パラメータおよびスケールの情報が含まれています。エクスポートされた画像は、コンピュータ²²上で画像処理ソフトウェアを用いて処理することができます。

結果

私たちは、ステロイド産生器官やキイロショウジョウバエの幼虫と大人の女性で彼らのインタラクティブな臓器を可視化するために上記のプロトコルを使用していました。プロトコルの全体的なスキームを図1に示されています。

PG（ 図2D）を含むRGは、脳よりも小さく、より透明であり、脳（ 図2A-C及び図3-E）の前方、背側に位置しています。 PG細胞を標識するために、いくつかのグループがecdysteroidogenic酵素（ すなわち 、ネバーランド^23、24 Spookier、シュラウド^20、ファントム^25、肉体^25、及びシャドウ^26）に対する抗体の様々なタイプを生成しました。これらの...

ディスカッション

私たちは、エクジステロイド生合成およびキイロショウジョウバエにおけるその調節機構を研究し、そして解剖および免疫染色のためのプロトコルを考案しました。エクジステロイド生合成のタイミングは、ニューロンの入力³³を介して、環境手がかりに影響されるので、解剖時の脳、VNC、および他の組織と一緒にecdysteroidogenic器官の神経支配を維持するために不可欠です。

上述したように、 キイロショウジョウバエ PGはコーパスallata（CA）と複合内分泌器官RGとコーパスcardiaca（CC）（ 図2D）を形成します。 PGは、エクジステロイドを生成しながら、CAおよびCCは、それぞれ、幼若ホルモン及びadipokineticホルモンを産生します。この解剖学的特性はDでecdysteroidogenesisを研究、研究者への障害となってきました。 ショウジョウバエ 、他の昆虫に比べて。しか...

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
<ストロング>エッグコレクション
ティッシュ培養ディッシュ(55mm)	AS ONE	1-8549-02	ぶどう果汁寒天プレート
用コレクションカップ	光化学
酵母ペースト	オリエンタルドライイースト、東京
ぶどう果汁100%	ウェルチ食品
飼育幼虫
小さなバイアル(12ml、40回;23.5 mm、PS)	SARSTEDT	58.487
使い捨てループ	AS ONE	6-488-01
標準フライフード			Blooingtonストックセンターのウェブサイトで私たちをレcepi。
解剖
解剖顕微鏡	カールツァイス	ステミ 2000-C
解剖顕微鏡	ライカ	S8 AP0
組織培養皿 (35×10mm, 未処理)	岩城	1000-035
シルガード	東レ		石炭シリコン 皿内
テルモ針 (27G,0.40 x 19 mm)	テルモ	NN-2719S	を切る「ナイフ」
イノックス #5	デュモン
昆虫ピン (直径0.18mm)	フィレット解剖	滋賀ブランド
	夏目製作所	MB-50-10
fixation
ultra純水	メルク ミリポア
リン酸緩衝生理食塩水 (PBS)
ホルムアルデヒド	ナカライ テスク	16222-65
パラホルムアルデヒド	ナカライ テスク	02890-45
Triton-X100	Nacalai tesque	35501-15
microtubes (1.5 ml)	INA OPTIKA	CF-0150
Incubation
As one swist mixer TM-300 (rocker)	As one	TM-300	rocker
Bovine Serum Albumin	SIGMA	9048-46-8
primary antibody
抗SRO(モルモット)、1:1000
抗GFP(ウサギ)、1:1000	Molecular Probes	A6455	島田丹羽、丹羽、2014
抗GFP(マウスmAb、GF200)、1:100	中来テスク	04363-66
抗5HT(ウサギ)、1:500	SIGMA	S5545
anti-Hts 1B1(マウス)	Developmental Studies Hybridoma Bank (DSHB)	1B1
抗DE-カドヘリン(ラット)、1:20	DSHB	DCAD2
抗nc82(マウス)、1:50	DSHB	nc82
二次抗体
ヤギ抗ウサギIgG(H + L)二次抗体、Alexa Fluor 488コンジュゲート	Life Technologies	A-11008
ヤギ抗マウスIgG(H + L)二次抗体、Alexa Fluor 488コンジュゲート	Technologies	A-11001
ヤギ抗ラットIgG(H + L)二次抗体、Alexa Fluor 546コンジュゲート	Life Technologies	A-11081
ヤギ抗モルモットIgG(H + L)二次抗体、Alexa Fluor 555コンジュゲート	Technologies	A-21435
Alexa Fluor 546色素標識ファロイジン	ライフ技術紹介	A-22283
<ストロング>マウント試薬
マイクロスライドガラス	松波硝子工業	SS7213
角型顕微鏡カバーガラス	松波ガラス工業
FluorSave試薬(マウンティング試薬)	Calbiochem	345789
トランスファーピペット 1 ml (ディスポーザブルスポイト)	WATSON	5660-222-1S
imaging
LSM700レーザー走査型顕微鏡システム	カールツァイス		倒立Axioオブザーバー。Z1 SP left
image processing
LSM700 ZEN	Carl Zeiss		これは、64 ビットの Microsoft Windows7 オペレーティング システム
ImageJ
Fly stocks
です。GMR45C06-GAL4			ブルーミントンショウジョウバエストックセンターから。(#46260)
UAS–GFPです。UAS–mCD8::GFP			gifts(東京大学伊藤和彦さんより)
w[1118]
w; ファントム-GAL4#22/UAS-turboRFP
w;UAS-mCD8::GFP;TRH-GAL4			Ref29、Alekseyenko、O.V、Lee、C.&を参照してください。クラヴィッツ、EA(2010)
w;UAS-mCD8::GFP			ブルーミントンショウジョウバエストックセンターから。(#32188)
yw;; nSyb-GAL4			ブルーミントンショウジョウバエストックセンターから。(#51941)