郭清とコロナのスライス標本マウス下垂体腺の開発

Summary

下垂体腺の解剖し、マウスを開発から下垂体のコロナ セクションを準備するためのプロトコルを提案します。

Abstract

下垂体または下垂体は重要な内分泌臓器の恒常性に不可欠なホルモンを分泌します。別の胚起源と機能と 2 つの腺で構成されています — 後葉と下垂。小型で細長い楕円形と繊細な開発マウス下垂体です。マウス下垂体の単一のスライスで下垂前葉と後葉の両方を表示する冠状断面お勧めします。

このプロトコルの目的は、マウスを開発してからの手入れが行き届いた組織アーキテクチャで適切な下垂体のコロナ セクションを達成することです。このプロトコルでは解剖およびマウスを開発から正常下垂体腺を処理する方法詳細に述べる。まず、マウス解剖前にホルムアルデヒドの transcardial 灌流を固定です。3 つの異なる解剖技術はマウスの年齢に応じてそのまま下垂体腺を取得に適用されます。胎児マウス高齢者胚日 (E) 17.5 18.5 と新生児を 4 日間に、蝶形骨、腺、および三叉神経を含む全体のセッラ地域は解剖します。子犬の高齢生後 (P) 5-14、下垂体腺、三叉神経接続は全体として解剖しました。以上 3 週齢のマウスに、下垂体腺は周囲の組織から無料解剖慎重に。コロナ セクションを満たすを取得するランドマークとして周囲の組織を使用して、適切な方向に下垂体腺を埋め込む方法も表示されます。これらのメソッドは、マウスの開発に下垂体腺の組織学的・発達的特徴を分析に役立ちます。

Introduction

下垂体または下垂体が恒常性^1,2のために不可欠なホルモンを分泌する重要な内分泌器官です。解剖学的, 下垂体腺、後葉と下垂から成る「2 台」構造です。これらの部品がある異なる胚起源と機能非常に異なる。後葉は神経外胚葉由来、オキシトシンと抗利尿ホルモンを分泌します。下垂ラトケ嚢に由来、成長ホルモン、プロラクチン、甲状腺刺激ホルモン、卵胞刺激ホルモン、黄体形成ホルモン、副腎皮質刺激ホルモンを含むホルモンのリリースを担当し、メラニン細胞刺激ホルモンの^3,の^4,5。

下垂体腺は、マウス頭蓋骨の蝶形骨 (鞍) の背側表面にかかっている、壊れやすい茎によって脳の床にアタッチされます。三叉神経と前方視交叉^6、7それは横方向に囲まれています。腺は細長い楕円形で、その軸に垂直に頭を。背側表面の後葉と下垂することができます簡単に区切られ、背側内側領域と腹の横と、後者の拡張を占める前者で。生後発達期下垂体のサイズが誕生^8,

Protocol

c57bl/6 マウス特定病原体フリーの条件で飼育しています。すべての動物実験、動物実験、第二軍医大学の倫理委員会で承認されたガイドラインに準拠しています

。

1。 郭清の生後開発下垂

1. 実行麻酔: 低体温症を誘導するために砕いた氷を新生児マウス (P0 - P5) を配置。マウスの年齢の 5 日間以上、麻酔を誘導するために 5% ウレタン (体重の 30 μ L/g) を腹腔内注入します。テール/足指つまみレスポンスを評価します。マウスが有害な刺激への応答後にのみ続行します
。
2. そっと前足をテーピングで (上向きの顔、背中に横たわって) 仰臥位でマウスをセキュリティで保護し、あることが作業面にグルタミ固定化学発煙のフードの中に (すなわち、発泡スチロール).
3. Transcardial 潅流を行う。
   1. マウス胸部を中心 (やその他の胸部臓器) を公開する手術ハサミで切っています
   。
   2. は鈍い鉗子との心臓の鼓動をセキュリティで保護、26 G (0.45 mm) 針を左心室に挿入します。針が満ちているヘパリン リン酸緩衝生理食塩水 10 mL のシリンジに接続されている (PBS; 亜硝酸ナトリウム 5 mg/mL と 10 U/mL のヘパリンを添加した、pH 7.4 では、使用する前に 37 ° C に暖かい)。すぐに高級ハサミで右房....

Results

このプロトコルはマウスを開発から下垂体腺を分析する手法を示す.新生児マウス下垂体, 三叉神経と下を含む全体のセッラ地域の蝶形骨は頭蓋底からうち解剖されました。小型で繊細な下垂体腺はプロセス (図 1 a) の中にそのまま残った。5 日間以上のマウスの横の三叉神経に接続されている下垂体腺は当時孤立しました。マウスがよく保持されていた P7 から分離した下垂体腺 (図 1 b) の総構造。P21 マウス新生仔マウスのそれと比較すると顕著下垂体腺のサイズを増加しました。下垂体腺は周囲組織 (図 1) を削除中目に見えない破損と正常に分離されました。

下垂体の単一のスライスで下垂前葉と後葉の最大の領域を表示するには、冠状断面お勧めします。切り裂かれた下垂体腺はコロナ セクションの満足.......

Discussion

ネズミの脳下垂体を開発するための小さくて壊れやすい機能と解剖学的特徴^6,8により適切なコロナ セクションを得ることが技術的に困難だった。いくつかの研究グループは従って萌芽期・新生児下垂体^11,12の形態を分析する半ば矢状のセクションを選んだ。下垂体の半ば矢状断面が前方、中間を示すことができるでも、単一のスライスで後頭葉は、これらの 3 つの葉の最大ビューを表示することができます、冠状断面が非常に好ましい。特に、下垂体とアポトーシスの数を数えると、細胞の増殖の面積と体積の測定などの定量化研究のコロナ セクションは彼らの代表面で半ば矢状セクションに優れています。下垂体腺の解剖し、マウスを開発から下垂体のコロナ セクションの準備に役立つ方法を紹介します。

処理中に下垂体腺を損傷しないように、いくつかのテクニックは、このプロトコルで使用されています。まず、マ.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
ツール/機器
手術用ハサミ-ストレート	JinZhong	J21010	は他のベンダーから購入できます
ファインハサミ-strainght	JinZhong	WA1010	は他のベンダーから購入できます
鈍い鉗子			は他のベンダーから購入できます
ファイン鉗子	下垂体の分離のための	デュモン	RS-5015
心灌流用	26G(0.45mm)針	HongDa
リンジ(1 mL)	BD	300841	他のベンダーから購入可能
シリンジ(10 mL)	BD		は他のベンダーから購入可能
35mmディッシュ	コーニング	430165	他のベンダーから購入可能
レンズクリーニングペーパー	ShuangQuan		は他のベンダーから購入できます
解剖顕微鏡	OLYMPUS	SZX-ILLB2-200	は他のベンダーから購入できます
埋め込みカセット	Thermo Fisher	22-272423	は他のベンダーから購入できます
組織埋め込みコンソールシステム	KEDEE	KD-BM11	は他のベンダー
ミクロトーム	サーモフィ	ッシャーHM315R	は他のベンダーから購入できます
スーパーフロストプラススライド	サーモフィ	ッシャー22-037-246	は他のベンダーから購入できます
カバーガラス	サーモフィ	ッシャー12-543	他のベンダーから購入できます
蛍光顕微鏡	オリンパス	BH2-RFCA	は他のベンダーから購入できます
<ストロング>名前	会社	カタログ番号	コメント
試薬
ウレタン	BBI	EB0448
PBS用NaCl	シグマ	S9625	PBS
KCl	シグマ	P9541
Na2HPO4.12H2O	PBS 用	Sigma	71650
K2HPO4	Sigma	P2222	PBS
NaNO2	Sigma	237213
ヘパリンナトリウム注入	SPH	H31022051	灌流生理食塩水
パラホルムアルデヒド (PFA)	Sigma	P6148
エタノール	SCR	用 10009218
キシレン	SCR	10023418
パラフィン	サーモフィッシャー	8330
ヘマトキシリン	Sigma	H9627	H&E
染色 Eosin Y	Sigma	E4009	for H&E 染色ウサギ
抗成長ホルモン (GH)	染色	のための国民ホルモン
下	垂体プログラム
ウサギ抗マウスGFAP抗体	免疫染色のための	Sigma	G9269
ヤギ抗ウサギIgG、HRP	Jackson	111-035-003	免疫染色
TSAシステム	NENライフサイエンス製品	NEL700	染色用
ストレプトアビジン、Alexa Fluor 594	Thermo Fisher	S32356	免疫染色用
Anti-FITC Alexa Fluor 488	Thermo Fisher	A11090	染色用