本研究は、純粋な小さな繊維エナンチオ (RTX) ニューロパシーの実験モデルを確立します。RTX のユニークな線量 (50 μ g/kg) が患者の特性を模した小さな繊維神経障害モデルを開発するため最適な神経因性疼痛の基礎となる受容分子の意義を調査を助けることができます。
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方法論記事
一過性受容体電位バニロイド型 1 Ultrapotent アゴニストと純粋な小さな繊維の神経疾患のマウスモデルを確立します。
この記事について
サマリー
要約
糖尿病 (DM) や化学療法剤の神経毒性の影響を経験している患者は、変性と小さな繊維の神経障害と呼ばれる小径感覚ニューロンの損傷による感覚障害を開発があります。小さな繊維の神経障害の存在の動物モデルは両方の大と小口径の感覚線維に影響し、負傷した小径感覚線維の効果を適切に評価するには複雑すぎる、神経病理学をこうして作成します。したがって、これらの問題の検討を十分に純粋な小さな繊維の神経障害の実験モデルを開発する必要があります。このプロトコルは、具体的にはエナンチオ (RTX) 一過性受容体電位バニロイドを通じて型の 1 (TRPV1)、単回投与の ultrapotent アゴニストと細径感覚神経に影響を与える小さな繊維の神経障害の実験的モデルを記述します。腹腔内投与、RTX 神経障害と呼ばれます。この RTX 神経の病的な症状を示し, 表皮内神経線維 (IENF) 変性、具体的には外傷を含む小さな繊維神経症患者の臨床的特徴を模倣行動の異常小径ニューロンと熱消と機械的アロディニアの誘導。このプロトコルは、RTX の 3 つの線量をテストした (200、50、および 10 μ g/kg、それぞれ)、結論 RTX の重要な線量 (50 μ g/kg) の典型的な小さな繊維の神経障害症状の開発に必要なし、する変更された染色手順を準備IENF 変性神経相馬損傷を調査します。修正手順は、高速、体系的、かつ経済的です。神経因性疼痛の行動評価は、細径感覚神経の機能を明らかにするため重要です。実験齧歯動物で機械しきい値の評価は特に挑戦的なこのプロトコルを記述するこのタイプの齧歯動物の評価に適しているカスタマイズされた金属製のメッシュ。要約すると、RTX 神経障害は分子の重要性と神経因性疼痛治療薬の開発のための基礎となる介入を評価する新しいと簡単に確立された実験的モデルです。
概要
IENFs の変性によって明らかである神経因性疼痛を含む小さな繊維の神経障害は、DM などは化学療法のエージェント1,2、神経毒性影響の結果としての条件の様々 な種類の共通 3,4,5。IENFs は後根神経節 (DRG) にある小径ニューロンの末梢の端末を並行 IENF 変性6の場合に影響を受けます。たとえば、神経突起の変えられた上流遺伝子転写は転写因子 3 (atf3 作動)6,7をアクティブにするのアップレギュレーションによって実証されています。さらに、皮膚生検、IENFs 神経支配の評価は小さな繊維神経障害5,8,9の診断に有用。従来、皮膚生検で IENFs のプロファイルに依存しているタンパク質遺伝子産物の免疫組織化学的デモ 9.5 (PGP 9.5)....
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プロトコル
記載されているすべての手順研究所動物30に関する倫理指針に基づき、プロトコルは、動物委員会の高雄医学大学、高雄、台湾によって承認されています。
1. RTX 神経障害の確立
注意:RTX は神経毒性と有害です。接触、目、粘膜、上気道刺激として機能します。吸入を避ける、RTX の準備中にラボ メガネとコートを着用します。多量の皮膚への接触や処理後の水で洗い流してください。
- Tween 80、エタノール (各溶剤 100 μ L) の等量の混合物を 200 μ l 添加に RTX 粉末の 1 mg を追加します。
- 因数 RTX ソリューション (12 μ L/バイアル) し、3 ヵ月の-20 ° C で保存します。この下に RTX 株式;有効期限の残りの RTX ソリューションを破棄します。
- 600 μ L の最終巻に生理食塩水入りの RTX 株式を希釈します。RTX 溶液の最終濃度は 0.01% を 10 μ L 車両ソリューションで 1 μ g RTX に匹敵するをする必要があります。
- 実験動物として 8 週齢アダルト雄 ICR マウス (35-40 g) を使用し、RTX ソリューションの単一の線量の管理 (投与量: 200、50、および 10 μ g/kg、....
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結果
このプロトコルでは、RTX 神経障害、具体的には IENF の変性、感覚器障害 (図 2) に関連付けられているを含む小径ニューロンに影響を与える新規マウスモデルをについて説明します。ここ記載されているプロトコルに従い、動物は熱消、D7 のポスト RTX 噴射で機械的アロディニアを展示しました。この小さな繊維神経障害モデルを RTX の 3 つの用量の確立: i. p. のルートで 200、50、および 10 μ g/kg を投与します。RTX 線量 (50 μ g/kg) は、重要とみなされ、予備的考察その高線量を示した RTX (200 μ g/kg) 引き起こされる高いマウス致死率 (図 3)。
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ディスカッション
診療所の小さな繊維の神経障害の効果的な治療は、機能回復と患者の生活の質を促進するため必要です。現在、ターゲットに小径神経細胞傷害の分子機構の包括的な理解の不足のために小さな繊維神経障害による感覚障害治療ガイドの欠如があります。神経障害の以前のモデルに通常両方大と小口径の感覚神経が影響を受ける例えば、化学療法による末梢神経障害12,32,33と機械による末梢神経障害34,35のモデル。したがって、運動麻痺の大径感覚神経の損傷貢献完全に除外できなかったこれらの神経障害モデルの行動テストで。この議定書では、マウスの小さな光ファイバー神経の障害であり、IENFs 変性の病理組織学的および機能的な証拠を提供することによって細径感覚神経にのみ影響の新しいモデルについて説明します。
RTX は、.......
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開示事項
著者がある何も開示するには
謝辞
この作品は、省の科学と技術 (106-2320-B-037-024)、高雄医科大学 (KMU M106028、KMU S105034) トップ大学助成金 (TP105PR15)、台湾、高雄医学大学の目的からの補助金によって支えられました。
....アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 化学試薬 | |||
| レシニフェラトキシン | Σ | R8756 | |
| Tween 80 | Σ | P1754 | |
| 3,3'-ジアミノベンジジン | Σ D8001 | ||
| アビジン-ビオチン複合体 | ベクター | PK-6100 | |
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
| Primary Antisera | |||
| Peripherin | Chemicon | MAB-1527 | |
| ATF3 | Santa Cruz | SC-188 | |
| PGP9.5 | UltraClone | RA95101 | |
| Name | Company | カタログ番号 | コメント |
| 二次抗血清 | |||
| ビオチン化ヤギ抗ウサギIgG | ベクターBA-1000 | ||
| キサスレッドコンジュゲートヤギ抗マウス | Jackson ImmunoResearch | 115-075-146 | |
| イソチオシアネート(FITC)結合ロバ抗ウサギジャ | クソン免疫研究 | 711-095-152 | |
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
| Equipment | |||
| ホットプレート | IITC | モデル 39 | |
| フォン フレイ フィラメント | Somedic Sales AB | 10-600-0001 | |
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
| Material | |||
| Shandon カバープレート | サーモ科学 | 72110017 | |
| スライドラック | Thermo scientific | 73310017 |
参考文献
- Shun, C. T., et al. Skin denervation in type 2 diabetes: correlations with diabetic duration and functional impairments. Brain. 127 (Pt 7), 1593-1605 (2004).
- Polydefkis, M., et al.
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再版と許可
