この作業による furzeriのターコイズのヒメダカにおよぼす単一および複合ストレスの効果を研究する、急性、慢性、多世代生物検定法について述べる.このプロトコルは、(死亡率、成長、産卵数、重量) の生活史形質と臨界温度最大研究するため設計されています。
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この記事について
サマリー
要約
生態毒性の分野で新たなモデル生物であるメダカによる furzeriと急性および慢性毒性試験の適用性を実証されています。全体的にみて、有毒化合物種の感度は、または、モデルの他の種のそれより高い範囲内。
この作品では、シングル、複合ストレスに及ぼす影響(名) furzeriの急性、慢性、多世代の生物検定のプロトコルについて説明します。その短い成熟の時間とライフ サイクルのためこの脊椎動物モデルは 4 ヶ月以内成熟時間や多産などのエンドポイントの研究をことができます。継代完全なライフ サイクル暴露試験は、わずか 8 ヶ月で実行できます。この種は干ばつ耐性がある卵を作り出す年間実行可能に残るので、種の敷地内の文化は必要ありませんが、必要な場合に個人を募ることができます。プロトコルは、メジャー生活史特性 (死亡率、成長、産卵数、重量) と重要な熱の最大しています。
概要
戦略的に選択した毒性の種の配列の感度分布は、欧州 REACH 法案 (登録、評価、承認、および化学物質の制限) に記載されている1をされています。急性または短期毒性試験はこの目的のため彼らは種の感度の簡単な目安として大抵使用されました。しかし、彼らの自然環境における生物は、はるかに長い期間にわたってさらされている、完全ライフ サイクルまたはさらにいくつかの世代がある影響を受ける2。また、汚染された環境で生物は通常なり相乗効果3時に、互いに相互作用があります、これで 1 つ以上のストレッサーに公開されます。したがって、安全な濃度計算に基づく、急性ストレッサー毒性試験が自然環境の毒性によって課された実際のリスクを過小評価します。それは、したがって、また欧州委員会4、5と米国環境保護庁 (米国によって提唱される環境に関連するコンテキストでは有効成分の致死濃度の慢性的な多世代の効果を勉強することをお勧め合衆国環境保護庁)6,7。脊椎動物の研究を中心に、脊椎動物無脊椎動物モデルと比較して比較的長い寿命のため慢性的な多世代の露出研究を実行するとき、労力、お金と時間の面で....
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プロトコル
ここで説明したすべてのメソッドは、カトリック ・ ルーヴェン大学の倫理委員会によって承認されています。
1. 孵化と名 furzeriの一般的なメンテナンス
- 準備魚の 14 ° C の温度で媒体 (pH 7) と 600 μ S/cm (24 の ° C) の伝導度に追加された標準化された塩の精製タイプ II 水を追加。
- 標準化された条件13の下に格納されている見る: GRZ (ゴナ Rhe 周) 研究室行から卵を選択します。(すなわち孵化する準備ができている)、DIII 段階で卵を選択認識ゆっくりと金色の目9の存在によってそれらを転送ソフト ピンセットのペアを持つプラスチック製 2 L タンク (タンクあたり以上約 30 卵) に。
注: 試験生物を健康に十分な数を持つために必要な魚の幼虫の数として 2 倍多く卵を孵化します。 - 12 ° C で魚の中の 1 cm を追加し、水の温度を常温 (24 ° C)9に徐々 に収束します。魚は最初の 12 時間で孵化します。
- 24 h 後フィード孵化ふ化Artemianaupliiの集中投与 (周波数と食品の量の詳細については、Polačikら
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結果
2.5.2 のように銅の濃度; furzeriの急性曝露の結果が計算される、cleardose 応答の関係 (図 1) を表示します。毒性物質の濃度を増加させると死亡率の増加があります。LC50値は時間をかけて減少し濃度を減少させるとより多くの時間がレプリケート死ぬの 50% の前に通過するを意味します。N. furzeri他の種と比較して種の感受性の比較だけでなく、銅の急性および慢性露出の詳細な結果を得るのためには、フィリップら20177を参照してください。
トライアルの慢性露出の体の大きさや、敏感なエンドポイントです。温度18によって、魚の成長に豊富なバリエーションがあります。大人サイズが 30 ~ 50 mm このセッ.......
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ディスカッション
この仕事個人を研究する新しいバイオアッセイによる furzeri、新興のモデル生物と有害物質と他のストレス要因の長期効果を組み合わせます。示されたプロトコル (銅、カドミウム、3, 4-dichloroaniline、クロルピリホス) は有害物質の配列に種の感度計測に適用されました。その高速のライフ サイクルによりこの脊椎動物モデルにより致死の評価と継代が 4 ヶ月以内に効果します。毒性スクリーニングのためのモデルとしてこの種の魚を使用してのもう一つの主な利点は、それは耐乾性の卵を生成するという事実です。これは卵を格納またはサプライヤーからそれらを取得することも可能、高価な時間のかかる敷地内文化する必要があります。さらに、胚が孵化が必要な12までの数年間保存できます。
参照の有効成分の数を(名) furzeriの感度を勉強した後は、種の感度は、範囲内にあるかよりも、他の上位モデルのテスト化合物によって、種を追加できます。特にに、産卵数に及ぼす影響を測定により、学びの種の感度の比較可能性が他のモデル種.......
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開示事項
著者が明らかに何もありません。
謝辞
水試料の分析のため、UAntwerpen と、どうすればの作物保護の部門の球グループに感謝しております。このプロジェクトの期間中、サポートはエクセレンス センターによって提供された ' エコ社会進化系区ルーヴェン研究基金 (PF/10/007)。AFG (11Q0516N) と ESJT (FWO SB151323) 資金が供給された、博士と FWO フランダース (フォン Wetenschappelijk Onderzoek) で博士研究員として TP (12F0716N)。
....アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 精製水 タイプ1(ミリQ) | ミリポア | ||
| 海塩 | インスタントオーシャン | ||
| 2Lプラスチックタンク | SAVIC | 常に制御と毒性処理のための材料を分離 | |
| 1Lプラスチックタンク(産卵) | アバモプラスト | 制御と毒性処理のための材料を常に分離 | |
| ネット | アクアビルゼン | 制御と毒性治療のための材料は常に分離されています | |
| 2Lガラス瓶 | Sepac-Flacover | と毒性治療のための材料は常に分離されています | |
| 0,5Lガラス瓶 | Sepac-Flacover | 制御と毒性治療のための材料は常に分離されています | |
| アルテミア卵 | オーシャンニュートリ | ||
| キロノマス | オーシャンニュートリ | 冷凍 | |
| トリカイン | 、シグマ、アルドリッチ | ||
| 、ペトリ皿 | 、VWR | ||
| パラフィルム | 、VWR | ||
| ピペット、 | MLS | ||
| ピンセット | 、FST | ||
| 500&マイクロ;mメッシュふるい | / | 自作 | |
| マイクロ遠心チューブ(2ml) | ブランド | に魚を保存するには | |
| シグマアルドリッチ | 水分析用 | ||
| 計量ボート | MLS | ||
| ジフィー7cペレット | ジフィー | ||
| ウォーターバス | Ctmax | ギラック | |
| エアリキード | |||
| デジタル温度計 | Testo AG | testo 926 | |
| HETO サームヒーター | アンカーシュミット | ||
| キャリブレーション済み天びん | メトラー・トレドAG | ||
| カメラ | / | ||
| カメラ用 | プラットフォーム/ | 自作 | |
| マルチパラメータキット | HACH | ||
| 冷凍庫 (-80°C;C) | パナソニック超低温冷凍庫 | ||
| 名前 | 会社名 | カタログ番号 | コメント |
| Fysio | |||
| 均質化 | バッファーVWR | 0.1 M TRIS–HCl、pH 8.5、15 %ポリビニルピロリドン、153 &マイクロ;M MgSO4 および0.2 % Triton X-100 | |
| クロロホルム:メタノール | Sigma Aldrich | ||
| グリセリルトリパルミテート | Sigma Aldrich | ||
| アミログルコシダーゼ | Sigma Aldrich | A7420 | |
| グルコースアッセイ試薬 | Sigma Aldrich | G3293 | |
| Biorad タンパク質色素 | VWR | ||
| 96ウェルマイクロタイタープレート | Greiner Bio-one | ||
| 384マイクロタイタープレート | Greiner Bio-one | ||
| 2 mlガラス管 | Fiers | 脂肪分析用 | |
| 2,5ml エッペンドルフ管 | VWR | ||
| ホモジナイザー | ウルトラターラックス TP 18/10 | ||
| 光分光計 | 無限M200 TECAN | ||
| ヒーター | Hach COD REACTOR | ||
| 遠心分離機 | Eppendorf Centrifuge 5415 R | ||
| Incubator | Bumako |
参考文献
- European-Chemicals-Bureau. TAPIR Three point three-A Project for the Information Requirements of REACH. Final Report-2 August 2005. Scoping study on the development of a Technical Guidance Document on information requirements on intrinsic properties of substances (RIP 3.3-1). , (2005).
- Philippe, C., et al.
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再版と許可
