Aortopathy β-アミノプロピオニ トリルによる大動脈瘤と解離のマウスモデルでのマイクロ CT 定量分析

Summary

放射線不透過性鉛ベースのシリコーンゴムを使用して大動脈径の大動脈瘤マウスモデルで定量化のためマウスの血管を灌流する詳細な方法について説明します。

Abstract

大動脈瘤および解離重大な罹患率と死亡率の人口に関連付けられて、非常に致命的なことができます。大動脈疾患の動物モデルが存在している間、血管系の生体内イメージングは制限されています。大小の船舶をイメージングの最寄りのモダリティとして浮上しているマイクロ コンピューター断層撮影 (マイクロ CT) 近年、体内と体外の両方。血管鋳造の方法と組み合わせて、正常に周波数と β アミノプロピオニ トリル扱わ C57/Bl6 マウスの大動脈の病変の分布を特徴付けるマイクロ CT を使用している私たち。このメソッドの技術的な制限には、貧しい人々 の動物の準備、容器サイズの定量化のための適切な方法論の適用とこのプロシージャの存続性によって導入された灌流の品質のバリエーションがあります。この記事は、鉛ベースの放射線不透過性シリコーン ゴム動脈瘤マウスモデルにおける aortopathy の定量的な特徴づけの血管内血流の方法論を詳しく説明します。大動脈の病理学を可視化、に加えて他の体内血管ベッドまたは事後削除血管のベッドを調べるこのメソッドを使用可能性があります。

Introduction

大動脈解離の発症率は¹年ごとの 100,000 ごとの 3 例です。大動脈解離や動脈瘤疾患アカウント以上 10,000 の死のためアメリカ合衆国で毎年、欧米²のすべての死の 1-2% を占めます。大動脈解離は、生理学的な圧力の下で大動脈壁の層を介して血液の伝播と容器の内膜層に涙によって開始されます。高い患者の脈圧は郭清の合併症発生率の増加に関連付けられます。高められた壁面せん断応力は、動脈瘤形成^3,4につながる大動脈壁の拡張に関連付けられます。大動脈解離の影響は、脳、腎臓、腸と手足、慢性脳動脈瘤、破裂、または死^5,6、7の形成を含む遠隔臓器への血流の閉塞を含まれます。

現時点では、生化学的・細胞プロセスを開始、大動脈瘤と解離の進行に関与するはまだよく理解されています。大動脈瘤と解離の再現可能な動物モデルは、自分の病態を理解するための鍵です。Β-アミノプロピオニ トリル (BAPN) は、エラスチンとコラーゲンの架橋結合を防止し、血管壁の細胞外マトリックスとその生体力学的整合性

Protocol

動物取扱のプロトコル制度動物ケアおよびメリーランド大学ボルチモア (動物のプロトコル番号 0116024) の使用委員会によって承認された、AAALAC 国際規格に従って実施します。

1. 試薬の調製

1. ヘパリン
   1. 1000 の 250 μ L を希釈 U/mL ヘパリン硫酸 50 ml のリン酸緩衝生理食塩水 5 U/mL の最終濃度を確認します。
   2. ヘパリン (5 U/mL) 暖かいリン酸緩衝生理食塩水、37 ° C に設定水浴の血管の血液を交換します。
   3. 必要なチューブを接続することで圧力制御ポンプを準備し、2 空 10 mL 注射器、ヘパリン生理食塩水バッファーの 1 と造影剤の 1。
   4. 暖かいヘパリン リン酸緩衝生理食塩水でチューブを入力し、圧力ポンプのチューブから空気の泡を削除します。
2. 造影剤
   注: コントラスト エージェント キット成分の材料表を参照してください。
   1. 1:6 色素希釈率を達成するために希釈液と色素化合物を混ぜます。
   2. (ステップ 2.3.12)、使用の直前に 200 μ L の希釈色素化合物の各 5 mL の約数に硬化剤とそれらが (ボリューム 4%) をよくミッ....

Results

このプロトコルを評価するために 20 男性アダルト マウス、上記¹⁹として混合の背景と 20-30 週齢、BAPN 治療の有無の鉛ベースの放射線不透過性シリコーンゴムと灌 (材料の表を参照してください。) 上記プロトコルを使用します。彼らは次の日にマイクロ CT スキャンを受けた (図 1と図 2)。比較対象グループのいずれかの間でマウスの年齢に有意差はありませんでした。

短軸径はこれらのマウスに定量化されたし。BAPN 処理マウスで上行大動脈の平均直径は未処理の年齢をマッチさせたコントロールよりも有意 (1.43 ± 0.56 mm対0.93 ± 0.11 mm;p = 0.023、.......

Discussion

マイクロ CT イメージングは、動物モデルにおける血管病変の詳細かつ三次元復元を提供するために使用できます。血管内の造影のメディアを使用して強化しているものと非強化の軟部組織など、血管の内腔を区別できます。レーザー ・ ドップラー、微小血管造影、磁気共鳴血管造影、共焦点、または 2 光子顕微鏡を用いた組織学は血管ベッドを評価するために使用可能性があります、彼らは通常研究の限られた領域に焦点を当てるのおよび/または二次元の評価に限定されます。マイクロ CT では、基になる血管新生と血管生物学の理解を得ることで助けることができる血管構造の詳細な画像を得ることのコスト効果の高い手段を提供します。小動物イメージングの追加方法には、生体内でマイクロ CT と血管造影があります。ここで説明する手法と同様に、生体内でマイクロ CT は解像度を上げる外因性造影剤に依存します。VC、窓、Isovue 370 2 そのような血液プール造影剤が利用可能マイクロ CT、VC 窓が使用されており、大動脈次の注入²⁰20 分 〜 620 ハンス ユニットの最大平均の増強が報告されて.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Microfil	Flow Tech、Inc	MV-122	黄色を使用しており、必要に応じて別の色を注文できます。キットには、MV-コンパウンド、MV-希釈剤、およびMV-硬化剤が含まれています。
ヘパリン (1000 U/mL)	Sagent Pharmaceuticals	25021-400-10
リン酸緩衝生理食塩水	Corning	21-031-CV
イソフルラン	Vet One, MWI	502017
3-Aminopropionitrile フマル酸塩	Sigma-Aldrich	A3134
シングルシリンジポンプ	Fisher Scientific	14-831-200
27ゲージ頭皮静脈セット針	Exel Int	26709	27G x 3/4", 12" tube
Inveon Micro-CTスキャナー	Siemens Medical Solutions
Osirix MD	Pimxmeo SARL		Version 8.0.2
Inveon Research Workplace	Siemens Medical Solutions		Version 4.2
Rodent Chow	Harlan Teklad	2018SX